一、铅(Ⅱ)与T(3-HP)P显色反应的研究及其应用（论文文献综述）
周娇[1]（2021）在《基于多功能DNA探针构建光学生物传感器及其应用研究》文中认为分子光谱分析方法作为常用的一种分析检测方法,能够定性、定量分析复杂样品,具有操作简单、实时检测等优点,具有应用潜力。其中荧光光谱法、紫外-可见吸收光谱法、散射光谱法,广泛运用于环境监测、疾病治疗等领域。DNA具有良好的稳定性和可编程性,能够根据碱基互补配对原则设计成为不同的结构。此外,DNA可作为分子探针特异性识别目标物,常与核酸信号放大技术联用实现对目标物的灵敏检测。本文以DNA为分子识别探针,结合纳米材料或者核酸信号放大技术分别构建了比色、荧光单信号光学生物传感器和荧光、散射双信号光学生物传感器,并将其用于疾病标志物、环境污染物的检测。具体研究内容如下:（1）基于C-Ag+-C发卡探针和目标诱导催化发夹自组装策略构建比率传感器可视化检测人类免疫缺陷病毒基因基于Ag+与错配的胞嘧啶-胞嘧啶（C-C）碱基的特异性结合,Ag+离子对脲酶的高效抑制作用以及苯酚红对p H的快速、灵敏响应,设计一种灵敏的可视化检测人类免疫缺陷病毒基因（HIV DNA）的比率传感器。这个传感器利用HIV DNA打开含有C-Ag+-C结构的发卡DNA探针,启动催化发夹自组装（CHA）反应,释放出Ag+,抑制脲酶催化尿素水解过程,阻止溶液的p H值升高。以苯酚红在两种波长下的吸光度比值(A559/A432)为输出信号,在CHA放大策略的辅助下,该传感器能够灵敏、高选择性地检测10-130 n M浓度范围内的HIV DNA,检出限低至7.8 n M。此外,该传感器能够可视化区分一定范围内的HIV DNA含量,且在1%的血清样品中具有良好的加标回收率,这将为生物传感器的设计、试纸条测试、血液检测和其他临床疾病预防提供新思路。（2）基于发卡DNA探针构建双链DNA纳米桥增强结晶紫/G-四链体复合物荧光检测铅离子和结晶紫作为通用识别元件,DNA酶和G-四链体能实现多功能信号的放大和读出,在生物传感器和纳米器件的设计方面显示出了巨大潜力。利用单链DNA（ss DNA）打开哑铃形状的发卡DNA探针,将生成的双链DNA（ds DNA）构建为纳米桥,所释放的富G序列折叠形成的两个G-四链体作为村落。ds DNA纳米桥连接两个G-四链体村落,增强结晶紫/G-四链体复合物的荧光。荧光发射强度与结晶紫（CV）浓度在10-250 n M范围内呈现出良好的线性关系,可用于CV的灵敏检测。此外,结合Pb2+-DNA酶,构建生物传感器,灵敏检测Pb2+。在5-25μM的浓度范围内,随着Pb2+浓度的增加,荧光信号逐渐增强。该方法对Pb2+的定量检出限为5 n M,且对多种水样中Pb2+具有良好的选择性和回收率。此外,该传感器通过控制Pb2+和CV的输入,成功地创建了分子逻辑与门。更重要的是,这种策略能通过改变金属离子对应的DNA酶序列实现对各种金属离子的灵敏检测,在环境监测方面具有广泛应用的潜力。（3）基于Co2+-DNA酶探针和Co OOH纳米片构建荧光、共振瑞利散射双模式生物传感器用于碱性磷酸酶的活性检测Co2+-DNA酶探针能够辅助核酸信号放大,Co OOH纳米片层具有较大的比表面积,较高的瑞利散射强度,能够吸附单链DNA。利用Co2+-DNA酶探针和Co OOH纳米片层构建荧光、共振瑞利散射双模式生物传感器,用于检测碱性磷酸酶（ALP）的活性以及研究其掩蔽作用。ALP特异性催化抗坏血酸-2-磷酸酯水解生成抗坏血酸,抗坏血酸还原Co OOH纳米片层为Co2+离子。Co2+离子活化Co2+-DNA酶,使得标记了荧光基团和猝灭基团的底物链裂解。作为结果,荧光基团与猝灭基团相互远离,518 nm处的荧光信号恢复,Co OOH纳米片层在405 nm处的瑞利散射强度降低。在荧光模式下,该传感器能够灵敏响应0.2-2000 U L-1范围内的ALP,对应的检出限为0.05 U L-1。此外,还验证了两种经典的ALP抑制剂（EDTA和Na3VO4）的作用机理,可以用于ALP抑制剂的筛选。
陶金华[2]（2017）在《菊非药用部位多糖类物质干预炎症性肠病的效应机制研究》文中研究说明菊属药用植物资源的利用目前主要以其头状花序中的黄酮类、挥发油及有机酸类化合物的研究为主,而对菊属植物中多糖等大分子物质的研究相对粗浅,主要涉及其多糖的提取、分离、简单纯化及活性筛选等,其中对菊非药用部位多糖的研究则仅有本团队前期的初步研究工作。根据课题组前期预实验结果,表明菊根、茎、叶总多糖的含量远远高于菊花中的含量（81.0%vs 8.62%）,在经水提醇沉、sevage法除蛋白之后,菊非药用部位多糖表现出抗氧化、抗凝血、抗肿瘤细胞生长、神经保护作用、调节肠道菌群的生长以及对结肠炎小鼠的保护作用等生物活性,鉴于此,本课题以原有工作基础为背景,对菊非药用部位多糖干预炎症性肠病的效应进行进一步验证,并对其可能存在的机制进行探讨,基于此活性导向性,对菊非药用部位多糖进行提取、分离、纯化以及结构的表征,为深入开展菊非药用部位多糖的研究利用奠定科学依据。本论文共分四章节内容。一、文献研究本部分在对相关文献进行整理、归纳和总结的基础上,系统总结了菊多糖的结构特征、分离与鉴定方法及菊多糖生物活性的研究现状,以期为开展菊非药用部位多糖的活性与结构研究提供科学参考。同时,对多糖类物质对机体肠道屏障功能紊乱及其引发的相关疾病的干预和治疗作用进行梳理和总结,为开展菊非药用部位多糖干预炎症性肠病-结肠炎的效应机制研究提供理论支撑。二、实验研究（一）菊非药用部位多糖类物质资源价值发现1.多糖类物质免疫调节作用和抑制肿瘤细胞生长研究1.1本实验采用免疫抑制剂环磷酰胺来复制小鼠免疫功能低下模型,用以考察菊非药用部位多糖对其诱导的免疫抑制小鼠的免疫调节作用,结果表明,菊多糖JFP能显着提升免疫低下小鼠的的胸腺指数和脾脏指数,能明显增强小鼠巨噬细胞的吞噬活力,使单位时间内血液中碳粒清除速率加快,表明JFP对环磷酰胺所致免疫抑制小鼠的免疫功能具有一定程度的保护和改善作用。1.2应用MTT细胞增殖检测法测定样品对人肠癌细胞体外增殖的影响。结果表明,JFP对人肠癌细胞LOVO,HCT-116,SW480和CAC02的生长具有一定程度的抑制作用,进一步验证,JFP对炎症性肠病改善的积极作用,为将来开发利用菊非药用部位多糖提供科学依据。2.结肠炎模型的建立及多糖类物质的效应评价2.1采用TNBS/乙醇灌肠方法成功诱导了大鼠结肠炎,表现在造模后大鼠出现体重下降、稀水便及血便。结肠外观及组织病理学检测可见结肠增厚、溃疡形成,并且MPO活性较正常对照组显着升高。JFP中、低剂量（100、50mg/kg）干预两周后,对其肠炎症状具有较好的缓解作用,可回调结肠炎大鼠体重及DAI值,可减轻结肠外观及镜下炎症病变,且显着降低MPO酶活性（P<0.05）。高剂量组（200 mg/kg）大鼠炎症症状,大鼠结肠外观损伤及MPO活性略有下降,但与模型组相比,无统计学意义。此外,多糖组显着降低结肠组织黏膜中TNF-α、IFN-γ、IL-17、IL-6、IL-1 β和IL-23的含量,同时提升IL-13、IL-10和IL-4的水平,尤其以中、低剂量效果更为显着。结果提示,不同剂量JFP对大鼠结肠炎的疗效存在差异,中、低剂量优于高剂量,与阳性治疗药柳氮磺胺吡啶接近。2.2采用DSS法成功建立了 C57BL6小鼠急性溃疡性结肠炎模型,考察了 JFP不同剂量、不同给药方式对模型小鼠结肠炎的影响。结果显示,中、低剂量多糖组对模型小鼠的炎症反应具有较好的改善作用,尤其以边造模边给药的方式为佳。具体表现为降低炎症小鼠DAI、缓解病理组织损伤、降低组织学评分,改善肠炎小鼠腹泻、便血状况,降低结肠组织MPO活性、NO含量,回升组织SOD活性等。（二）菊非药用部位多糖干预结肠炎的效应机制研究1.菊非药用部位多糖对结肠炎大鼠肠道微生态的调节作用1.1基于细菌16S V3-V4可变区,利用Illumina/Miseq二代测序技术平台进行高通量测序技术及生物信息学分析方法,研究JFP对TNBS诱导结肠炎大鼠肠道菌群结构的影响。结果表明,与正常组相比,模型组大鼠肠道菌群组成发生明显变化,其中Firmicutes/Bacteroidetes比例显着降低,而多糖的摄入明显改善了这种趋势,Firmicutes数量增多,二者比值回升,基本维持了肠道菌群的生态平衡。此外,病原微生物如Escherichia、Enterococccs和prevotella的相对丰度显着降低,有益微生物如Butyricicoccus、Clostridium、Lachnospiraceae、Rikenellaceae、Lactobacillus和Bifidobacterium的相对丰度明显增加。通过肠道菌群与生化因子的关联分析,发现Butyricicoccus、Clostridium、Lachnospiraceae、Rikenellaceae、Lactobacillus、Bifidobacterium等有益菌与抗炎因子 IL-4、IL-10、IL-11 呈显着正相关（P<0.01）,而 Prevotella、Ruminococcus、Bacteroides、Escherichia-Shigella、Akkermansia、Turicibacter等有害菌与 IL-23、TNF-α、IL-1β、IL-6、IF-17、IFN-γ 等促炎因子水平呈显着正相关（P<0.01）。同时,基于COG数据库和KEGG数据库对肠道菌群的相关生化功能进行预测,主要涉及氨基酸代谢、细胞运动、信号转导、能量代谢、葡聚糖生物合成与代谢、脂代谢、细胞膜转运、辅酶和维生素代谢、神经系统、转录、细胞生长和调亡等多种生理功能,在上述功能中,正常组与模型组在能量代谢、辅酶转运与代谢、转录、细胞壁/膜的合成、信号转导等方面有较为明显的差异,模型动物在摄入多糖后,这些差异的生理功能均有接近正常组的趋势,尤以中、低剂量给药组更为显着。本实验研究从不同分类学水平上发掘对菊非药用部位多糖起响应的关键菌属,分析JFP对结肠炎大鼠症状的改善作用,评价菊非药用部位多糖对结肠炎的干预效应,为中药多糖在治疗炎症性肠病的药物研究与应用方面提供新的思路。1.2采用GC-FID分析方法,测定了结肠炎大鼠肠道内容物中SCFAs的含量变化,结果表明,JFP在不同程度上增加了结肠炎大鼠肠道内SCFAs的含量,其中乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸的含量在模型动物肠道内显着升高,该结果与肠道菌群多样性的变化较为一致,提示:JFP可能通过改善结肠炎大鼠肠道菌群的失衡,恢复肠道菌群的代谢功能,增强肠道菌群产生SCFAs的能力,从而缓解和改善结肠炎的症状。2.菊非药用部位多糖干预炎症性肠病的分子机制研究2.1研究证实,上皮屏障功能受损,导致肠道细菌和其它抗原渗透进入肠道黏膜是炎症性肠病发病的主要因素之一。在本章节研究中,我们选择Claudin、Occludin与ZO-1作为研究对象,分析其在大鼠结肠黏膜组织中的表达情况,结果表明,肠黏膜上的Claudin-1、Occludin与ZO-1在正常组大鼠体内均有较高的表达,模型组大鼠肠道上述蛋白的表达明显降低,而模型组大鼠给予菊非药用部位多糖后,提高了 Claudin-1、Occludin与ZO-1在mRNA与蛋白水平上的表达,尤以中、低剂量组的效果更为显着。结合前后研究结果我们推测,菊多糖通过调控肠道菌群多样性,恢复肠道生物屏障的保护功能,使得肠道黏膜上皮细胞上的某些紧密连接蛋白的表达水平恢复正常,进而增强肠道黏膜的屏障功能,缓解和改善TNBS诱导的结肠炎大鼠症状。2.2大量研究证实,机体肠道微生态平衡的打破与炎症性肠病的发生发展密切相关。炎症性肠病患者存在肠道菌群失调,保护性微生物和侵袭性微生物生态平衡被打破,在各种微生物抗原刺激下,体内免疫系统被过度激活,各种炎症细胞活化,导致细胞因子的失衡,产生肠道慢性炎症反应。本章节围绕TLR4/NF-κ B信号通路,利用qPCR和western blot技术分别从基因和蛋白水平检测了 NF-κB、TLR4的表达水平。qPCR结果显示,与正常大鼠相比,模型大鼠结肠组织黏膜NF-κB、TLR4表达水平均显着提高,且具有统计学意义。而不同剂量菊非药用部位多糖对模型大鼠黏膜组织NF-κB、TLR4mRNA表达水平具有不同程度的回调作用;Western blot结果显示,与正常大鼠相比,模型大鼠结肠组织黏膜p65及其磷酸化pp65、TLR4蛋白表达水平均显着提高,多糖不同剂量组对结肠炎大鼠黏膜组织p65及其磷酸化pp65表达水平具有不同程度的回调作用,尤其是对P65蛋白表达水平的降低具有极显着差异。上述研究结果提示,菊非药用部位多糖可通过阻断TLR4/NF-κB通路途径,抑制TLR4、NF-κB的表达,继而减轻肠道炎症反应。此外,开展了 JFP对IL-6/STAT3信号通路的影响研究,分别从基因和蛋白水平检测了 IL-6、JAK2、STAT3基因转录水平及STAT3、p-STAT3、p-JAK2蛋白表达水平。qPCR结果显示,与正常大鼠相比,模型大鼠结肠组织黏膜IL-6、JAK2、STAT3mRNA表达水平均显着提高,而模型大鼠给予JFP后,IL-6 mRNA表达水平显着降低,JAK2、STAT3 mRNA只在低剂量组呈显着性差异,而在高、中剂量组没有明显差异。然而,Westernblot结果显示,与正常大鼠相比,模型大鼠结肠组织黏膜STAT3及其磷酸化蛋白p-STAT3及p-JAK2表达水平均显着提高,该蛋白与其基因表达不一致,表明IL-6/STAT3通路在蛋白翻译后对菊多糖产生响应。当肠道微生物与宿主之间的平衡被打破,革兰阴性细菌数量增加,LPS诱导的TLR4/NF-κB、IL-6/STAT3途径就被过度激活,炎症反应被放大,导致炎症性肠病发生发展。因此,维持肠道微生态平衡,抑制或阻断TLR4-NF-κB、IL-6/STAT3信号通路,将有助于控制和改善炎症性肠病病情及预防其复发。2.3基于代谢组学的思路与方法,探寻炎症性肠病大鼠病理状态下血浆、尿液代谢物组的整体变化,在筛选、鉴定其血浆和尿液中潜在的生物标志物的基础上,研究JFP干预后的代谢变化规律,挖掘JFP改善和缓解炎症性肠病的可能机制。实验结果显示,结肠炎大鼠血浆中亚油酸、花生四烯酸、牛磺脱氧胆酸、胆酸、鹅去氧胆酸等表现为下调趋势,白三烯A4、甘氨酸、二氢神经酰胺、胆固醇等表现为上调趋势。涉及代谢通路包括胆汁酸生物合成、视黄醇代谢、花生四烯酸代谢、亚油酸代谢、色氨酸代谢、不饱和脂肪酸生物合成、氨基酸代谢、甘油磷脂代谢、类固醇激素生物合成,其中影响较高的代谢通路有花生四烯酸代谢、胆汁酸生物合成、甘油磷脂代谢;结肠炎大鼠尿液中,烟酰胺、甘油磷酰胆碱、尿刊酸、烟酸单核苷酸、二氢尿嘧啶、磷酰胆碱等表现为下调趋势,D-葡糖醛酸-6,3-内酯、甲基咪唑乙酸、2-氧代-4-甲硫基丁酸等表现为上调趋势。涉及代谢通路包括烟碱和烟酰胺代谢、组氨酸代谢、赖氨酸降解、甘油磷脂代谢、赖氨酸生物合成、泛酸和CoA生物合成、β-丙氨酸代谢、淀粉和蔗糖代谢、半胱氨酸和甲硫氨酸代谢、肌醇磷酸代谢、嘧啶和嘌呤代谢等。从代谢通路方面分析,抗坏血酸代谢、烟碱和烟酰胺代谢、甘油磷脂代谢、半胱氨酸和甲硫氨酸代谢和组氨酸代谢影响值相对较高。JFP可影响上述代谢途径,对上述标志物的水平均有不同程度的回调,向正常状态转变,说明菊非药用部位多糖能改善和缓解结肠大鼠的症状。（三）基于活性导向下的菊非药用部位均一多糖的制备及结构表征1.菊非药用部位均一多糖的制备称取菊根、茎、叶部位干燥样品2 kg,石油醚脱脂两次,加热回流提取,合并两次提取液后浓缩,乙醇沉淀,得菊非药用部位粗多糖;对粗多糖中所含中性多糖、酸性多糖以及蛋白质含量进行测定,结果显示,中性多糖和酸性多糖分别为42.67±2.94%和18.36±1.09%,蛋白质含量为6.17±1.02%。由此可见,中性多糖是粗多糖中的主要组成成分。此外,采用三氯乙酸法除蛋白,大孔吸附树脂AB-8对粗多糖进行脱色、除杂,再经DEAE-52纤维素柱进行不同梯度的洗脱,最后经葡聚糖凝胶Sephadex G-200柱层析进一步精制、纯化,经洗脱、收集、减压浓缩、透析、冷冻干燥后,获得含量及纯度相对较高的均一性多糖 JFP1-1-2（1.6%）和 JFP1-2-2（0.4%）。2.菊非药用部位均一多糖的结构表征采用傅里叶红外光谱IR、酸水解、甲基化、13C-NMR,1H-NMR核磁共振等方法,对均一多糖JFP1-1-2和JFP1-2-2的结构进行分析,结果表明,JFP1-1-2主要由甘露糖、葡萄糖和半乳糖以摩尔比4.53:3.06:1.00组成;JFP1-2-2主要由甘露糖、半乳糖、葡萄糖、木糖及半乳糖醛酸以摩尔比3.01:2.36:1.25:1.00:1.02组成。将此两种多糖经甲基化并水解后,采用 GC/MS 分析,结果显示,JFP1-1-2 中含有T-β-D-Manp、5,6-β-Manp、1,3,5-β-D-Manp、1,3-β-D-Manp、1,5-β-D-Galp、T-β-D-Galp、2,4-β-D-Galp、1,3,5-β-D-Glcp和 2,3,4-β-D-Glcp 连接顺序的糖残基,其摩尔比为 13.41:3.39:30.30:1.87:18.01:6.22:15.10:7.01:4.69;JFP1-2-2 中含有 T-β-D-Manp、5,6-β-D-Manp、1,4-β-D-Manp、1,3,5-β-D-Manp、2,3,5-β-D-Manp、1,5-β-D-Galp、2,4-β-D-Galp、1,3,5-β-D-Glcp、T-β-D-Xylp 连接顺序的糖残基,其摩尔比为 2.31:0.44:1.12:2.6:2.86:5.87:3.33:4.56:4.80。由此可见,不论是中性多糖JFP1-1-2,还是带有酸性基团的JFP1-2-2,其糖结构中甘露糖的含量比例最大。而研究报道甘露糖受体MR可特异性地识别以甘露糖为末端的配体,介导吞噬病原微生物,发挥免疫调节作用。本实验研究表明,菊非药用部位多糖结构中含有大量的甘露糖,可能易于结合巨噬细胞和树突状细胞膜表面上的甘露糖受体,消除病原微生物,改善肠道微生态平衡,进而改善模型大鼠炎症性肠病的症状。这一假说,将在后续的实验研究中继续探讨和证实。
钱丽丽[3]（2016）在《Myostatin基因编辑梅山猪的制备与表型分析》文中指出Myostatin （MSTN）是肌肉生长发育的关键抑制因子。牛、羊、狗和人的MSTN基因突变后会表现出肌肉肥大的现象,又称双肌（DM）表型,然而到目前为止未见有关猪MSTN突变与明显肌肉表型的报道。猪不仅是肉产品的重要来源,而且也是人类疾病研究的理想动物模型。为了研究MSTN突变对猪骨骼肌发育的影响,我们利用无标记基因的锌指核酸酶技术（zFN）结合体细胞克隆技术成功制备并获得了MSTN基因编辑梅山猪。我们首先通过分离培养获得梅山猪的原代胎儿成纤维细胞,利用核转染方法将MSTN的特异ZFN质粒转染到原代胎儿成纤维细胞中。培养24小时后,收集细胞并提取总DNA,利用PCR扩增打靶区域的核酸序列进行TA克隆测序用于检测打靶效率；随机挑取了1000个单菌落进行菌落PCR测序,共鉴定出40个MSTN突变序列,由此判定该ZFN质粒在梅山猪胎儿成纤维细胞中的打靶效率约为4%。随后,利用上述方法转染细胞后,在没有任何药物筛选标记的情况下我们通过有限稀释法获取单细胞克隆。整个实验中共收集并鉴定了约1800个单细胞克隆,获得80个MSTN基因突变的细胞克隆,其中78个为单等位基因突变（MSTN+/+）,2个为双等位基因突变（MSTN-/-）,所有突变中有超过90%的突变为小于20bp的短片段缺失或插入。从中挑选了14个单细胞克隆用于体细胞克隆实验,经徒手克隆获得2631枚重构胚用于胚胎移植,共移植28头受体母猪,其中有10头母猪怀孕,7头正常生产,共获得19头活仔；最终有8头来自105细胞系、1头来自110细胞系的MSTN基因编辑克隆猪存活并繁育后代。最初获得的MSTN基因编辑克隆猪为MSTN单等位基因突变型（MSTN+/-）,经过两次自然交配获得MSTN纯合子突变（MSTN-/-）梅山猪。通过对后代个体的MSTN基因靶位点区域的测序分析证明经ZFN编辑后的基因突变可稳定遗传给后代,并且符合孟德尔遗传定律。同时,我们利用荧光定量PCR、Western blot及ELISA等方法对F2代三种基因型梅山猪MSTN基因的转录及表达情况进行了检测,结果显示MSTN梅山猪骨骼肌中的MSTN基因转录后发生错误拼接无法获得有功能的myostatin蛋白。通过对克隆猪及其后代的观察和屠宰检测发现,MSTN基因编辑猪生长发育正常,与MSTN梅山猪相比其胴体的肌肉量明显增多（MSTN-/-:p<0.01;MSTN+/-:p<0.05）、脂肪量则明显减少（MSTN-/-:p<0.001; MSTN+/-:p<0.05）;而且MSTN-/-梅山猪表现出明显的双肌型,8月龄MSTN-/-个体的瘦肉率比野生型梅山猪高出11.62%,个别肌肉块的重量由于肌纤维的增多可达到野生对照猪的两倍。除此之外,在本研究中我们还发现约有20%的MSTN-编辑梅山猪表现多—个胸椎的现象。MSTN基因编辑猪的成功制备不仅为提高国内地方脂肪型猪的瘦肉率提供了一种快速的遗传改良方法,而且该基因编辑猪有望成为肌骨系统形成、发育及其相关疾病研究的理想的大动物模型。
陈红果[4]（2016）在《基于目标循环放大及背景抑制策略构建灵敏的DNA荧光生物传感器的研究》文中研究表明生物传感器是由分析化学、生物化学、生物医学和生物技术等领域相互渗透而形成的一个新兴的研究课题。生物传感器凭借其设备简单、易于携带、测试成本低廉、检测快速方便、结果灵敏可靠以及易于实现原位活体检测等优势,跻身当前的研究热点之一。DNA荧光传感器便是其中一种。DNA荧光生物传感器通过DNA生物传感器将目标物的信号转换成荧光信号进行输出和检测,进而对目标物进行定性及定量分析。这种分析方法将生物传感器的特异性、易于实现多种放大策略的优点和荧光传感器的高灵敏度、高选择性和较高的仪器普及率等特点结合起来,大大提高了分析测试的灵敏度、准确度和可操作性。这些特点使得DNA荧光生物传感器吸引了大量研究者的目光,因而该技术也得到了不断的发展。然而随着基因测序、疾病诊断、食品药品监控、环境保护等领域对于分析检测技术的要求不断提高,DNA荧光传感器的研究也迫切需要更加深入,以期发展出更加灵敏快速、准确可靠、简易、实惠的测定方法,服务科研和社会。本文以DNA荧光传感技术为基础结合多种酶利用目标循环放大策略来提高方法的灵敏度,同时采用核酸外切酶Ⅲ和氧化石墨烯（GO）以实现对荧光背景信号的降低,构建了三种生物传感器分别用于灵敏地检测人p53原癌基因、凝血酶和L-组氨酸。本文的主要研究内容如下:基于toehold介导的目标循环放大反应和外切酶Ⅲ辅助的荧光背景信号降低方法构建的一种p53癌变基因片段检测传感器。设计一对带有黏性末端的发卡DNA用以识别人p53原癌基因,并被该目标基因片段特异性地打开,进而通过链置换反应的循环生产出大量的双链DNA,未反应的DNA加入外切酶Ⅲ进行水解。最后向体系中加入赛博绿Ⅰ荧光染料实现对双链DNA循环产物的专属性传感,通过荧光法检测目标基因片段的含量。该方法检测人p53原癌基因的检测限为5.34pM,且具有比较好的选择性和重复性。通过凝血酶适配体与凝血酶的特异性识别与优先结合作用引发toehold介导的目标循环放大反应,并利用外切酶Ⅲ的水解作用,构建检测凝血酶的高特异性、高灵敏度的新方法。凝血酶适配体与凝血酶的竞争性结合后,释放出信息DNA片段,该信息DNA片段可以打开设计好的一对带黏性末端的发卡DNA,该DNA片段在发卡DNA间的不断循环,诱导形成大量双链DNA,最后引入外切酶Ⅲ将未反应的发卡DNA水解,加入赛博绿Ⅰ荧光染料后,染料分子与反应生成的双链DNA相互作用使得自身荧光大大增强,从而测定凝血酶的含量。该方法检测凝血酶的检测限为0.42 pM,且具有比较好的选择性。利用组氨酸作为辅因子使得核酸酶8-17 DNAzyme独特的剪切活性被激活并引发一系列DNA聚合及循环放大过程,同时利用氧化石墨烯对DNA探针和产物双链的不同吸附作用及对荧光染料的猝灭作用降低背景信号,实现对组氨酸的灵敏检测。组氨酸激活核酸酶8-17 DNAzyme的切割活性,释放出一段DNA片段,该片段可以触发一个循环聚合反应,产生大量的双链DNA;而剩下的DNA酶残基可以作为模板链,与体系中加入的另一引物相结合,并在聚合酶的作用下发生聚合反应并释放组氨酸进入循环,同时该反应能产生大量双链DNA。然后向体系中加入氧化石墨烯片层,吸附带有单链的DNA反应物以及单链引物。最后加入赛博绿Ⅰ荧光染料,该染料与溶液中游离的双链DNA作用而产生荧光信号;嵌入被石墨烯吸附的DNA双链部分中的染料分子的荧光则被GO所猝灭,使得体系的背景信号降低,以此实现灵敏测定组氨酸含量的目的。本传感器对于L-组氨酸检测的灵敏度达到了1.73 pM。同时,由于采用了能够特异性识别L-组氨酸并且进行高效剪切的HD3型8-17 DNAzyme,提高了方法的选择性和可靠性。
廖苏奇[5]（2016）在《基于点击化学反应和核酸信号放大技术的荧光分析新方法及应用研究》文中提出生物传感技术在对生物分子进行分析检测方面具有灵敏度高、选择性好、操作简单、分析成本低、可进行原位测定等优点,在制药、食品分析、临床诊断、生物医学、环境监测方面有广泛的应用。核酸信号放大技术利用聚合扩增、酶切循环等手段,能够显着提高检测的灵敏度。构建基于核酸信号放大技术的生物传感分析方法,对改善体系的分析检测性能具有重要意义。点击化学反应具有反应条件温和、产率高、几乎无副产物生成、不需要特定的纯化过程等诸多优点。在药物发现、聚合物合成、DNA化学连接、细胞成像等领域呈现出广阔的应用前景。纳米材料具有独特的光学和电化学等性质,将纳米材料与点击化学反应相结合应用于光学生物传感分析为构建新型生物传感体系提供了新的思路。本研究论文利用核酸信号放大作用和DNA模板点击化学反应,发展了三种荧光生物传感分析新方法用于核酸和金属铜离子的定量分析检测。具体内容如下:1.将DNA模板点击化学反应和链置换信号放大技术相结合,建立一种简单便捷的荧光检测方法,实现了对Cu2+的快速检测。在体系中加入Cu2+后,引发DNA模板点击化学反应而使得发夹探针H1末端连接并保持结构稳定,信号探针H2与荧光分子ThT结合后产生强的荧光信号;而无Cu2+存在时,发夹探针H1经过循环链置换反应与信号探针H2杂交,H2的G4结构被破坏后不能与ThT结合,大大降低了背景信号。在最佳的实验条件下,该方法分析速度快、选择性好,对Cu2+检测的线性范围为5.0×10-7 mol/L～2.O×10-5 mol/L,检测下限为2.23×10-7mol/L（S/N=3）。此外,将所建立的方法用于实际河水中Cu2+含量的测定,实验结果令人满意。2.基于DNA模板点击化学反应与二氧化硅纳米粒子信号放大技术,建立了一种新型、简单的荧光偏振方法用于Cu2+的高灵敏、高特异性检测。在Cu2+存在时,Cu2+被抗坏血酸钠还原成Cu+,并催化DNA探针P1-P2双链上的末端炔烃和叠氮基团发生CuAAC连接反应,通过链置换反应与生物素修饰的P3互补杂交形成P1-P2-P3复合物,通过链霉亲和素与生物素的特异性作用将P1-P2-P3结合到SA-Si02,产生较强的荧光偏振信号;而无Cu2+时,P1和P2不能连接,与P3进行链置换反应后,FAM-P2游离在溶液中,偏振信号较弱。在优化的实验条件下,实现了对Cu2+的高灵敏和特异性检测,检测下限为1.78 × 1 0-8 mol/L。3.基于核酸酶辅助信号放大技术并结合G-四链体/ThT荧光信号增强作用,建立了一种简单、免标记、超灵敏的微小RNA检测新方法。本章选择miRNA-261作为模型分析靶标,并精心巧妙设计发夹探针和模板探针。当靶标与发夹探针杂交打开其环状结构后,才能够与模板探针杂交。并通过核酸聚合酶和内切酶的辅助作用,引发连续等温循环链置换反应,释放出大量的靶标类似物和G-四链体序列。在钾离子的辅助作用下,信号分子ThT与G-四链体序列作用形成稳定的G-四链体/ThT复合物,增强了 ThT的荧光信号。根据荧光强度的变化实现了对miRNA的超灵敏检测,检测下限为5.6× 10-15 mol/L。同时,该方法具有较高的特异性和复杂环境适用性,在生物医学研究和临床诊断领域有着潜在的应用价值。
赵燕芳,岳太星,金玲仁,刘金芝[6]（2013）在《卟啉显色剂在分光光度法测定铅中的应用》文中研究说明卟啉类显色剂剂由于其特殊的光学性能而成为一种很有发展前途的有机显色剂,已广泛应用于金属离子的痕量分析;本文综述了近几年卟啉类显色剂在分光光度法中测定重金属离子铅的应用,最后并对其应用进行了前景展望。
杨丹,程振,王翠,田富容[7]（2010）在《卟啉类显色剂在铅光度分析中的研究进展》文中研究说明介绍了近十年来卟啉试剂在铅的光度分析当中的研究进展,总结了目前国内显色体系改善方法,简述了卟啉试剂的合成现状,同时展望了卟啉试剂在铅的光度分析当中的发展方向。
韩颜颜[8]（2010）在《甲氧基卟啉的合成及在金属离子和蛋白质分析中的应用》文中提出卟啉及金属卟啉化合物广泛存在于自然界和生命体,在生命活动中起着非常重要的作用。卟啉作为显色剂已经广泛应用于单一金属离子的测定;卟啉化合物还可作为过氧化物模拟酶催化化学发光反应用于生物大分子的检测。本文首先详细叙述了卟啉化合物基本的合成方法及卟啉化合物在金属离子和生物大分子分析中的应用。论文主要包括以下几个方面:一、采用4-甲氧基苯甲醛、苯甲醛、吡咯为原料,通过经典的Alder-Longo合成法,得到了不对称甲氧基卟啉化合物及其金属配合物,并合成了Meso-四-（3-甲氧基-4-羟基苯基）卟啉及其锌、锰、铽金属配合物。产物经过红外、紫外、核磁等表征,确定其结构并将部分化合物应用到分析测定中。二、5,10-二苯基-15,20-二（4-甲氧基苯基）卟啉作为显色剂,结合光谱拟合软件对吸收光谱进行二阶求导,利用导数分光光度法同时测定了铜、镉、铅三种金属离子,考察了同时测定的最佳条件;铜、镉、铅三种金属离子分别在0.05 - 0.80、0.01 - 0.56、0.12 - 1.66μg·mL-1线性范围内符合朗伯-比尔定律,摩尔吸光系数分别为2.10×105、3.95×105、3.36×105 L·mol-1·cm-1,并将该方法用于实际样品中多种金属离子的同时测定。三、建立了Meso-四（3-甲氧基-4-羟基苯基）卟啉（[T-（3-MO-4-HP）P]）作为显色剂分光光度法同时测定铜、锌、镉、汞、铅的方法,考察了各个条件对测定的影响,铜、锌、镉、汞、铅五种金属离子分别在0 - 0.60、0 - 0.60、0 - 0.40、0 - 0.80、0 - 0.48μg·mL-1线性范围内符合朗伯-比尔定律,显色体系的摩尔吸光系数分别为1.38×105、1.01×105、3.24×105、1.07×105、1.29×105 L·mol-1·cm-1;并将其应用于多种实际样品中金属离子的同时测定。四、采用流动注射化学发光法以5-（4-甲氧基苯基）-10,15,20-三苯基锌卟啉为过氧化物模拟酶测定牛血清白蛋白,在最佳条件下,绘制牛血清白蛋白的工作曲线,线性范围为0.05 - 25.0μg·mL-1,检测限为2.73 ng·mL-1。初步从理论上探讨了其作用机理,并采用荧光光谱研究了该锌卟啉与牛血清白蛋白之间的相互作用力、猝灭机理及其卟啉化合物对蛋白质构型变化的影响等。五、采用流动注射化学发光法以Meso-四（3-甲氧基-4-羟基苯基）锰卟啉为过氧化物模拟酶测定转铁蛋白,探讨该发光反应的最佳实验条件,在最佳条件下,绘制转铁蛋白的工作曲线,线性范围为0.04 - 20.0μg·mL-1,检测限为1.62 ng·mL-1。并成功地将所建立的方法应用于血清样品中转铁蛋白含量的测定。
丁静,孙舒婷,张诺,韩颜颜,陈欣,魏琴[9]（2008）在《卟啉类显色剂在重金属离子分析中的研究及应用》文中提出卟啉类试剂由于其特殊的光学性能而成为一种很有发展前途的有机显色剂,已广泛应用于金属离子的痕量测定.就国内外近年来卟啉类试剂在重金属离子分析中的研究及应用情况作了较系统的总结.主要介绍分光光度法、荧光光度法和高效液相色谱法3种分析方法在此方面的应用,列举了分析过程中出现的问题以及解决方法,并展望了卟啉类试剂在重金属离子分析中的发展方向.
王文元[10]（2008）在《现代光度分析法测定食品中痕量铅的研究与应用》文中认为对现代光度分析法,主要是普通光度法、胶束增溶分光光度法、固相光度法、催化光度法、流动注射光度法、荧光光度法等测定食品中痕量铅的研究进展作一综述。
二、铅(Ⅱ)与T(3-HP)P显色反应的研究及其应用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、铅(Ⅱ)与T(3-HP)P显色反应的研究及其应用（论文提纲范文）
（1）基于多功能DNA探针构建光学生物传感器及其应用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 DNA探针概述 |
| 1.1.1 分子信标探针 |
| 1.1.2 DNA酶探针 |
| 1.1.3 核酸适配体探针 |
| 1.1.4 其他DNA探针 |
| 1.2 核酸信号放大技术 |
| 1.2.1 酶辅助信号放大 |
| 1.2.2 无酶信号放大 |
| 1.3 光学生物传感器 |
| 1.3.1 比色生物传感器 |
| 1.3.2 荧光生物传感器 |
| 1.3.3 共振瑞利散射生物传感器 |
| 1.4 本文的研究思路 |
| 第2章 基于C-Ag~+-C发卡探针和目标诱导催化发夹自组装策略构建比率传感器可视化检测人类免疫缺陷病毒基因 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 材料与仪器 |
| 2.2.2 凝胶电泳成像 |
| 2.2.3 HIV DNA的可视化检测 |
| 2.2.4 血清样品的制备 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 HIV DNA可视化检测原理 |
| 2.3.2 可行性分析 |
| 2.3.3 实验条件的优化 |
| 2.3.4 HIV DNA的检测 |
| 2.3.5 选择性和稳定性测试 |
| 2.3.6 血清样品中HIV DNA的检测 |
| 2.4 本章小结 |
| 第3章 基于发卡DNA探针构建双链DNA纳米桥增强结晶紫/G-四链体复合物荧光检测铅离子和结晶紫 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 材料和仪器 |
| 3.2.2 结晶紫的检测 |
| 3.2.3 Pb~(2+)的检测 |
| 3.2.4 实际水样中Pb~(2+)的检测 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 双链DNA增强结晶紫/G-四链体复合物荧光 |
| 3.3.2 Pb~(2+)的检测原理 |
| 3.3.3 可行性分析 |
| 3.3.4 实验条件的优化 |
| 3.3.5 Pb~(2+)的检测 |
| 3.3.6 选择性分析 |
| 3.3.7 分子逻辑与门的创建 |
| 3.3.8 实际水样中Pb~(2+)的检测 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 基于Co~(2+)-DNA酶探针和CoOOH纳米片构建荧光、共振瑞利散射双模式生物传感器用于碱性磷酸酶的活性检测 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 材料与仪器 |
| 4.2.2 CoOOH纳米片的合成 |
| 4.2.3 ALP的检测 |
| 4.2.4 抑制作用的评估 |
| 4.2.5 血清样品中ALP的检测 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 材料的选择 |
| 4.3.2 CoOOH纳米片的表征 |
| 4.3.3 ALP的检测原理 |
| 4.3.4 可行性分析 |
| 4.3.5 实验条件的优化 |
| 4.3.6 传感器的灵敏度研究 |
| 4.3.7 选择性分析 |
| 4.3.8 ALP的抑制评估 |
| 4.3.9 血清中ALP的检测 |
| 4.4 本章小结 |
| 第5章 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者部分相关论文题录 |
（2）菊非药用部位多糖类物质干预炎症性肠病的效应机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语 |
| 前言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 菊属药用植物多糖类物质化学结构及生物活性研究 |
| 参考文献 |
| 第二节 药用植物多糖类物质对肠道功能调节及机理研究进展 |
| 参考文献 |
| 第三节 本课题立项依据和研究思路 |
| 第二章 菊非药用部位多糖类物质的资源价值发现 |
| 第一节 多糖类物质免疫调节和抑制肿瘤细胞生长活性研究 |
| 一、对免疫低下小鼠的免疫调节作用研究 |
| 参考文献 |
| 二、对结肠癌细胞体外增殖抑制作用研究 |
| 参考文献 |
| 第二节 结肠炎模型的建立及多糖类物质的效应评价 |
| 一、TNBS诱导结肠炎模型的建立及多糖类物质的效应评价 |
| 二、DSS诱导结肠炎模型的建立及多糖类物质的效应评价 |
| 参考文献 |
| 第三章 菊非药用部位多糖类物质干预炎症性肠病的效应机制研究 |
| 第一节 多糖类物质对结肠炎大鼠肠道微生态的调节作用研究 |
| 一、对结肠炎大鼠肠道菌群多样性的影响 |
| 参考文献 |
| 二、对结肠炎大鼠肠道中短链脂肪酸代谢的影响 |
| 参考文献 |
| 第二节 多糖类物质干预炎症性肠病的分子机制研究 |
| 一、对结肠炎大鼠肠黏膜组织紧密连接蛋白的影响 |
| 参考文献 |
| 二、对结肠炎大鼠肠黏膜组织炎症信号通路的影响 |
| 参考文献 |
| 三、对结肠炎大鼠内源性生物标志物及代谢通路的影响 |
| 参考文献 |
| 第四章 菊非药用部位均一多糖分离纯化及结构表征研究 |
| 第一节 菊非药用部位均一多糖的分离纯化制备 |
| 第二节 菊非药用部位均一多糖的结构表征 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 攻读学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（3）Myostatin基因编辑梅山猪的制备与表型分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第一章 引言 |
| 1.1 Myostatin的研究进展 |
| 1.1.1 Myostatin基因的发现与分子特点 |
| 1.1.2 Myostatin的表达与调控 |
| 1.1.3 Myostatin的生物学功能 |
| 1.1.4 Myostatin的应用 |
| 1.2 锌指核酸酶技术简介 |
| 1.3 梅山猪的种质特性及应用 |
| 1.4 研究意义和目标 |
| 第二章 MSTN基因编辑梅山猪的制备 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 仪器与试剂 |
| 2.1.3 锌指核酸酶的设计与合成 |
| 2.1.4 胎儿成纤维细胞的分离培养 |
| 2.1.5 细胞转染实验 |
| 2.1.6 锌指核酸酶打靶效率检测 |
| 2.1.7 单细胞克隆的培养与基因型鉴定 |
| 2.1.8 猪体细胞克隆 |
| 2.1.9 ZFN脱靶及载体片段整合分析 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 锌指核酸酶质粒的设计与合成 |
| 2.2.2 梅山猪胎儿成纤维细胞的获得 |
| 2.2.3 锌指核酸酶质粒转染效率及打靶效率检测 |
| 2.2.4 MSTN基因编辑单细胞克隆的筛选 |
| 2.2.5 MSTN基因编辑梅山猪的成功制备与繁育 |
| 2.2.6 ZFN脱靶及载体片段整合分析结果 |
| 第三章 MSTN基因编辑梅山猪的表型分析 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验动物 |
| 3.1.2 仪器与试剂 |
| 3.1.3 胴体性状检测及组织样品采集 |
| 3.1.4 RT-PCR及荧光定量PCR |
| 3.1.5 Western Blot检测 |
| 3.1.6 ELISA检测 |
| 3.1.7 血液生理生化指标检测 |
| 3.1.8 组织学检测分析 |
| 3.1.9 肌纤维数目与横街面积的分析 |
| 3.1.10 肌肉肉质的检测 |
| 3.1.11 数据分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 MSTN基因编辑猪靶基因mRNA及氨基酸序列变化情况 |
| 3.2.2 MSTN基因编辑猪的靶基因转录及表达情况 |
| 3.2.3 MSTN基因编辑猪的胴体性状检测结果 |
| 3.2.4 MSTN基因编辑猪的肌纤维变化情况 |
| 3.2.5 MSTN基因编辑猪脊椎组成情况 |
| 3.2.6 MSTN基因编辑猪的血液生理生化指标检测结果 |
| 3.2.7 MSTN基因编辑猪内脏组织病理学检测结果 |
| 3.2.8 MSTN基因编辑猪的肉质及营养成分检测结果 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 针对MSTN基因编辑猪特点及安全性的讨论 |
| 4.2 针对肌纤维表型的讨论 |
| 4.3 针对胸腰椎模式变化的讨论 |
| 4.4 针对肉质性状检测结果的讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 作者简历 |
（4）基于目标循环放大及背景抑制策略构建灵敏的DNA荧光生物传感器的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 DNA生物传感器 |
| 1.1.1 DNA |
| 1.1.2 生物传感器 |
| 1.1.3 DNA荧光型生物传感器的优点及应用 |
| 1.2 赛博绿 Ⅰ 荧光染料 |
| 1.2.1 赛博绿 Ⅰ 荧光染料简介 |
| 1.2.2 赛博绿 Ⅰ 荧光染料在DNA荧光传感器中的应用 |
| 1.3 提高DNA传感器灵敏度的方法 |
| 1.3.1 DNA传感器的信号放大策略 |
| 1.3.2 DNA传感器的背景抑制策略 |
| 1.4 本文的研究思路 |
| 第2章 基于toehold链置换反应驱动的目标循环放大以及外切酶 Ⅲ 辅助背景信号降低原理构建荧光传感器用于突变DNA序列的检测 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 试剂及材料 |
| 2.2.2 仪器装置 |
| 2.2.3 DNA传感过程 |
| 2.2.4 荧光测定过程 |
| 2.2.5 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 |
| 2.2.6 在血清样品中进行回收率试验 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 机理及其验证 |
| 2.3.2 实验条件的优化 |
| 2.3.3 灵敏度的研究 |
| 2.3.4 检测目标DNA的选择性和重复性探究 |
| 2.3.5 实际应用前景的探究 |
| 2.4 结论 |
| 第3章 基于toehold链置换反应驱动的目标循环放大以及外切酶 Ⅲ 辅助背景信号降低原理构建荧光传感器用于凝血酶的检测 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 试剂及材料 |
| 3.2.2 仪器装置 |
| 3.2.3 DNA传感过程 |
| 3.2.4 荧光测定过程 |
| 3.2.5 在血清样品中进行回收率试验 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 机理及其验证 |
| 3.3.2 实验条件的优化 |
| 3.3.3 灵敏度的研究 |
| 3.3.4 检测凝血酶的选择性探究 |
| 3.3.5 实际应用前景的探究 |
| 3.4 结论 |
| 第4章 基于脱氧核酶和Klenow Fragment, Exo- 聚合酶的双重信号循环放大和氧化石墨烯辅助的背景信号降低策略检测L-组氨酸 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 试剂及材料 |
| 4.2.2 仪器装置 |
| 4.2.3 DNA传感过程 |
| 4.2.4 荧光测定过程 |
| 4.2.5 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 |
| 4.2.6 在血清样品中进行回收率试验 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 机理及其验证 |
| 4.3.2 实验条件的优化 |
| 4.3.3 灵敏度的研究 |
| 4.3.4 检测L-组氨酸的选择性探究 |
| 4.3.5 实际应用前景的探究 |
| 4.4 结论 |
| 参考文献 |
| 硕士期间发表的论文 |
| 致谢 |
（5）基于点击化学反应和核酸信号放大技术的荧光分析新方法及应用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 荧光分析技术简介 |
| 1.2.1 荧光光谱在生物传感分析中的应用 |
| 1.2.1.1 荧光光谱在核酸分析中的应用 |
| 1.2.1.2 荧光光谱在蛋白质分析中的应用 |
| 1.2.1.3 荧光光谱在细胞分析及成像中的应用 |
| 1.2.2 荧光偏振在生物传感分析中的应用 |
| 1.2.2.1 基于生物大分子增强荧光偏振值 |
| 1.2.2.2 基于纳米材料增强荧光偏振值 |
| 1.3 CuAAC点击化学反应在生化分析中的应用 |
| 1.3.1 CuAAC点击化学反应在药物研究中的应用 |
| 1.3.2 CuAAC点击化学反应在蛋白质分析中的应用 |
| 1.3.3 CuAAC点击化学反应在核酸连接中的应用 |
| 1.4 信号放大技术在生化分析中的应用 |
| 1.4.1 基于纳米材料信号放大技术在生化分析中的应用 |
| 1.4.2 核酸信号放大技术在生化分析中的应用 |
| 1.4.2.1 基于核酸酶作用的信号放大技术在生化分析中的应用 |
| 1.4.2.2 无酶核酸信号放大技术在生化分析中的应用 |
| 1.5 本论文的主要研究工作 |
| 参考文献 |
| 第二章 基于DNA模板点击化学与核酸链置换信号放大荧光方法用于Cu~(2+)的检测 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 主要仪器与试剂 |
| 2.2.2 溶液配制 |
| 2.2.3 Cu~(2+)的荧光光谱检测 |
| 2.2.4 凝胶电泳试验 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 方法设计及实验原理 |
| 2.3.2 可行性实验 |
| 2.3.3 实验条件优化 |
| 2.3.3.1 点击化学反应时间对体系荧光信号的影响 |
| 2.3.3.2 点击化学反应温度对体系荧光信号的影响 |
| 2.3.3.3 pH值对体系荧光信号的影响 |
| 2.3.3.4 抗坏血酸钠的浓度对体系荧光信号的影响 |
| 2.3.3.5 ThT的浓度对体系荧光信号的影响 |
| 2.3.3.6 K~+的浓度对体系荧光信号的影响 |
| 2.3.4 校准曲线、线性范围及灵敏度 |
| 2.3.5 特异性考察 |
| 2.3.6 河水样品分析 |
| 2.4 结论 |
| 参考文献 |
| 第三章 基于DNA模板点击化学和二氧化硅纳米粒子信号放大荧光偏振方法用于Cu~(2-)的检测 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 主要仪器与试剂 |
| 3.2.2 溶液配制 |
| 3.2.3 Cu~(2-)的荧光偏振检测 |
| 3.2.4 凝胶电泳试验 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 方法设计及实验原理 |
| 3.3.2 可行性实验 |
| 3.3.3 实验条件优化 |
| 3.3.3.1 点击化学反应时间对△FP值的影响 |
| 3.3.3.2 点击化学反应温度对△FP值的影响 |
| 3.3.3.3 抗坏血酸钠的浓度对△FP值的影响 |
| 3.3.3.4 体系pH值对△FP值的影响 |
| 3.3.3.5 SA-SiO_2的浓度对△FP值的影响 |
| 3.3.4 校准曲线、线性范围及灵敏度 |
| 3.3.5 特异性考察 |
| 3.3.6 河水样品分析 |
| 3.4 结论 |
| 参考文献 |
| 第四章 基于等温核酸信号放大的荧光传感平台用于miRNA的超灵敏检测 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 主要仪器与试剂 |
| 4.2.2 溶液配制 |
| 4.2.3 miRNA-261的荧光光谱检测 |
| 4.2.4 凝胶电泳试验 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 方法设计及实验原理 |
| 4.3.2 可行性实验 |
| 4.3.3 实验条件优化 |
| 4.3.3.1 发夹探针茎部碱基数目及其浓度对体系荧光强度的影响 |
| 4.3.3.2 引物序列碱基数目及其浓度对体系荧光强度的影响 |
| 4.3.3.3 聚合切割反应时间对体系荧光强度的影响 |
| 4.3.3.4 ThT的浓度对体系荧光强度的影响 |
| 4.3.4 校准曲线、线性范围及灵敏度 |
| 4.3.5 特异性考察 |
| 4.3.6 人血清样品分析 |
| 4.4 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间已发表的论文 |
| 致谢 |
（7）卟啉类显色剂在铅光度分析中的研究进展（论文提纲范文）
| 1 卟啉试剂与铅的显色反应 |
| 2 卟啉试剂合成现状 |
| 3 测定方法的发展 |
| 3.1 流动注射技术 |
| 3.2 导数分光光度法 |
| 3.3 荧光分析法 |
| 3.4 色谱分析法 |
| 4 展 望 |
（8）甲氧基卟啉的合成及在金属离子和蛋白质分析中的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 卟啉化合物的合成 |
| 1.1.1 Rothemund 合成法 |
| 1.1.2 Alder-Longo 合成法 |
| 1.1.3 Lindsey 合成法 |
| 1.1.4 其他方法 |
| 1.2 卟啉化合物的应用 |
| 1.2.1 卟啉化合物在金属离子分析中的应用 |
| 1.2.2 卟啉化合物在生物大分子分析中的应用 |
| 1.3 本论文研究内容及创新性 |
| 1.3.1 主要研究内容 |
| 1.3.2 创新性 |
| 第二章 甲氧基卟啉及其金属配合物的合成、表征 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 试剂与仪器 |
| 2.2.1 主要试剂 |
| 2.2.2 主要仪器 |
| 2.3 甲氧基卟啉及其金属配合物的合成 |
| 2.3.1 Meso-(3-甲氧基-4-羟基苯基)卟啉的合成 |
| 2.3.2 不对称甲氧基卟啉的合成 |
| 2.3.3 甲氧基金属卟啉配合物的合成 |
| 2.4 产物表征 |
| 2.4.1 红外光谱表征 |
| 2.4.2 立体构型优化及极性计算 |
| 2.4.3 紫外-可见吸收光谱 |
| 2.4.4 核磁分析 |
| 第三章 不对称甲氧基卟啉导数分光光度法同时测定铜、镉、铅的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 试剂与仪器 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 吸收光谱 |
| 3.3.2 酸度的选择 |
| 3.3.3 金属离子结合顺序的研究 |
| 3.3.4 显色剂用量的选择 |
| 3.3.5 加热时间的影响 |
| 3.3.6 介质种类和用量的选择 |
| 3.3.7 试剂加入顺序的选择 |
| 3.3.8 干扰离子的影响 |
| 3.3.9 工作曲线 |
| 3.3.10 测定结果比较 |
| 3.3.11 样品的测定 |
| 3.4 结论 |
| 第四章 对称型甲氧基卟啉导数分光光度法同时测定铜、锌、镉、汞、铅的研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 试剂与仪器 |
| 4.2.2 实验方法 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 吸收光谱 |
| 4.3.2 酸度的选择 |
| 4.3.3 卟啉用量的选择 |
| 4.3.4 介质种类和用量的选择 |
| 4.3.5 试剂加入顺序的选择 |
| 4.3.6 加热时间的影响 |
| 4.3.7 干扰离子的影响 |
| 4.3.8 工作曲线 |
| 4.3.9 样品测定 |
| 4.4 结论 |
| 第五章 不对称型甲氧基锌卟啉作为过氧化物模拟酶在化学发光测定牛血清白蛋白中的应用 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 实验 |
| 5.2.1 试剂与仪器 |
| 5.2.2 实验方法 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 BSA 对锌卟啉催化化学发光反应的影响 |
| 5.3.2 锌卟啉浓度的选择 |
| 5.3.3 酸度的选择 |
| 5.3.4 鲁米诺浓度的选择 |
| 5.3.5 过氧化氢浓度的选择 |
| 5.3.6 主泵转速的选择 |
| 5.3.7 副泵转速的选择 |
| 5.3.8 工作曲线 |
| 5.3.9 共存物质的影响 |
| 5.3.10 样品测定 |
| 5.3.11 锌卟啉催化鲁米诺化学发光机理的探讨 |
| 5.4 荧光光谱法研究卟啉与牛血清白蛋白的结合机理 |
| 5.4.1 实验方法 |
| 5.4.2 结果与讨论 |
| 第六章 鲁米诺-四(3-甲氧基-4-羟基)苯基锰卟啉-过氧化氢发光体系在转铁蛋白测定中的应用研究 |
| 6.1 前言 |
| 6.2 实验 |
| 6.2.1 试剂与仪器 |
| 6.2.2 实验方法 |
| 6.3 结果与讨论 |
| 6.3.1 转铁蛋白对卟啉催化化学发光反应的影响 |
| 6.3.2 锰卟啉浓度的选择 |
| 6.3.3 酸度的选择 |
| 6.3.4 鲁米诺浓度的选择 |
| 6.3.5 过氧化氢浓度的选择 |
| 6.3.6 主泵转速的影响 |
| 6.3.7 副泵转速的影响 |
| 6.3.8 工作曲线 |
| 6.3.9 共存物质的影响 |
| 6.3.10 样品测定 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录A 在校期间发表论文及获奖情况 |
| 附录B 核磁谱图 |
（9）卟啉类显色剂在重金属离子分析中的研究及应用（论文提纲范文）
| 1 在分光光度分析中的应用 |
| 2 在荧光分析中的应用 |
| 3 在高效液相色谱分析中的应用 |
| 4 结束语 |
（10）现代光度分析法测定食品中痕量铅的研究与应用（论文提纲范文）
| 1 现代光度分析法测定食品中痕量铅的研究进展 |
| 1.1 普通光度法[1, 2] |
| 1.2 胶束增溶光度法 |
| 1.3 固相分光光度法 |
| 1.4 催化光度法 |
| 1.5 流动注射光度法 |
| 1.6 荧光光度法 |
| 2 发展趋势 |
四、铅(Ⅱ)与T(3-HP)P显色反应的研究及其应用（论文参考文献）
- [1]基于多功能DNA探针构建光学生物传感器及其应用研究[D]. 周娇. 西南大学, 2021(01)
- [2]菊非药用部位多糖类物质干预炎症性肠病的效应机制研究[D]. 陶金华. 南京中医药大学, 2017(08)
- [3]Myostatin基因编辑梅山猪的制备与表型分析[D]. 钱丽丽. 中国农业大学, 2016(08)
- [4]基于目标循环放大及背景抑制策略构建灵敏的DNA荧光生物传感器的研究[D]. 陈红果. 西南大学, 2016(02)
- [5]基于点击化学反应和核酸信号放大技术的荧光分析新方法及应用研究[D]. 廖苏奇. 广西师范大学, 2016(05)
- [6]卟啉显色剂在分光光度法测定铅中的应用[A]. 赵燕芳,岳太星,金玲仁,刘金芝. 2013中国环境科学学会学术年会论文集（第四卷）, 2013
- [7]卟啉类显色剂在铅光度分析中的研究进展[J]. 杨丹,程振,王翠,田富容. 广州化工, 2010(08)
- [8]甲氧基卟啉的合成及在金属离子和蛋白质分析中的应用[D]. 韩颜颜. 济南大学, 2010(02)
- [9]卟啉类显色剂在重金属离子分析中的研究及应用[J]. 丁静,孙舒婷,张诺,韩颜颜,陈欣,魏琴. 分析测试技术与仪器, 2008(01)
- [10]现代光度分析法测定食品中痕量铅的研究与应用[J]. 王文元. 食品与药品, 2008(03)