一、鸡传染性支气管炎三价活疫苗（论文文献综述）
徐恒立[1]（2021）在《Apg凝集抗原的制备和某IC灭活疫苗对流行菌株的保护效果评价》文中研究表明鸡传染性鼻炎（infectious coryza,IC）是由副鸡禽杆菌（Avibacterium paragallinarum,Apg）引起的一种急性呼吸道疾病,最明显的特征为面部肿胀,鼻腔有分泌物流出和结膜炎,同时可导致生长迟缓以及产蛋量下降。近年来,接种了灭活疫苗的鸡群中,仍然频繁暴发IC,对养禽业造成了巨大的损失。疫苗免疫是预防IC的主要策略,血凝抑制（Hemagglutination inhibition test,HI）抗体效价是评价疫苗免疫效果的重要指标,但是目前还缺乏商品化的凝集抗原。本研究一方面研制了 Apg血凝抑制试验抗原,另一方面用制备的凝集抗原评价了灭活疫苗对当前流行菌株的免疫保护效果。1.Apg血凝抑制试验抗原的制备本研究首先通过Apg标准菌株221（A型）、Spross（B型）、H-18（C型）分别优化并建立了针对A、B、C型Apg血凝抑制试验抗原制备方法。血清A型菌株不需要特殊处理即有血凝性,透明质酸酶处理前后血凝价没有差异。B型菌株最佳处理条件为5 U/mL透明质酸酶37℃条件下反应2 h。C型菌株最佳反应条件为添加10 U/mL透明质酸酶37℃条件下反应2 h。进一步在A、B、C三个血清型的流行菌株中筛选并获得血凝价高,稳定性好的菌株,其中分离株2019/JS15（A型）HA效价为28,2019/JS37（B型）HA效价为27,2020/JS80（C型）HA效价为27。同时制备了冻干Apg血凝抑制试验抗原,血清A型Apg冻干血凝抑制试验抗原在-20℃条件下HA效价可稳定保持4个月以上,血清B、C型Apg冻干血凝抑制试验抗原保存条件仍需进一步探索。2.灭活疫苗对流行菌株的免疫保护效果评价本研究通过动物试验的方法,旨在验证IC三价灭活疫苗（印度尼西亚美迪安有限公司）对目前Apg流行菌株的免疫保护效果。将100只试验鸡分为一免组（A1、B1、C1）、二免组（A2、B2、C2）、攻毒对照组（A3、B3、C3）和空白对照组（D）。二免组于60日龄时进行第一次免疫,110日龄时进行第二次免疫。一免组仅在110日龄时进行免疫。采用上一章制备的凝集抗原通过HI试验检测疫苗免疫后的抗体效价。130日龄时,通过滴鼻接种的方式,分别使用2019/HB65（A型）对A1、A2、A3组进行攻毒,使用2019/HB68（B型）对B1、B2、B3组进行攻毒,使用2020/JS80（C型）对C1、C2、C3组进行攻毒,攻毒剂量均为每只5 × 106 CFU/0.2 mL。A型抗体效价高于B型和C型,二免后第3周HI水平平均值最高可达到13.1 log2,仅一次免疫检测不到B型抗体,而二次免疫第3周的抗体检效价平均值为6.1 log2。C型抗体二免后第3周HI水平均值最高可达到10.2log2。攻毒2020/JS80（C型）的C3组试验鸡发病情况最为严重。所有二免组的临床症状评分均低于一免组,并显着低于攻毒对照组。尤其是2020/JS80（C型）攻毒后,二免组没有任何临床症状。一免组和二免组的试验鸡攻毒后产蛋率略高于攻毒对照组且与空白组差异不显着。攻毒组A3、C3组的试验鸡产蛋率显着下降,但所有免疫组的试验鸡产蛋率无显着性变化。疫苗一免和二免后均能降低攻毒后的排菌量,尤其是二免组。眶下窦拭子重新分离Apg结果显示,攻毒后第7d对照组全部重分离到细菌。除攻毒C型的二免组没有分离到细菌,达到完全保护,其他各免疫都能够重分离到细菌（分离率≥80%）。攻毒后第14 d,所有组重分离率降低,除C组以外,各组之间无差异。综上,本研究制备了效价高稳定性好的凝集抗原,评价了灭活疫苗对分离株的免疫保护效果。免疫后二免组的HI抗体水平显着高于一免组。流行株攻毒后,免疫两次灭活疫苗保护效果优于免疫一次,能够显着降低临床症状、剖检病变和排菌量,尤其是C型分离株攻毒后能够达到完全保护。虽然疫苗免疫组仍有发病,但是体重和产蛋率维持不变。
王秋生,孙银华,程素平,储新生,许秀平[2]（2021）在《鸡传染性鼻炎流行病学调查与防控技术推广》文中认为近年来鸡传染性鼻炎的发病率和复发率较高,造成较严重的经济损失,成为近年禽病中较难防治的主要疾病。2017～2019年由海安市畜牧兽医站牵头,全市各驻镇畜牧兽医站参与组织实施的"鸡传染性鼻炎的流行病学调查与防控技术推广"项目,通过对近年蛋鸡生产中传染性鼻炎发病鸡群流行病学的调查,尤其是进行发病群的病原分型鉴定,广泛开展疫苗免疫跟踪比较试验,加强以进口传染性鼻炎ABC三价灭活疫苗的推广应用,同时配合生物安全防控、开展技术培训、加强冷链系统建设、规范病死家禽无害化处理等综合性防控措施,保护了养鸡业的健康发展,取得了较好的经济效益和社会效益。
王申锋[3]（2020）在《“固元颗粒”免疫增强剂研制及其在鸡疫苗免疫中的应用》文中研究表明中药具有很好的增强免疫力的作用,成为当前替代饲料中抗生素添加的一个重要方向。“固元颗粒”原方出自《新药转正标准》,由黄芪和生晒参芦头配方而成,其功效是益气固本。如果直接将其应用于兽医临床,提高动物的免疫功能,成本偏高,很难在养殖业中推广。但是,人用中药加工过程中产生的一些附属提取物,以及在非贵重药材中提取到的一些有效成分,成本相对较低,具有开发兽医临床用药的潜力。为此,我们以黄芪多糖（Astragalus Polysaccharides,APS）和人参茎叶皂苷（Ginseng Stem-leaf Saponins,GSLS）代替“固元颗粒”配方中的黄芪和生晒参芦头,大幅降低成本,配伍组方,制成可溶性颗粒,称为兽用“固元颗粒”,用于增强动物抗病能力和疫苗免疫效果。本论文研究该制剂工艺、质量标准,并评估其对鸡的安全性、有效性和最适添加量。检测该制剂对免疫抑制条件下鸡和小鼠的免疫调节作用,初步揭示其对蛋鸡淋巴细胞TLR4信号通路的激活及相关细胞因子的分泌机制,并在蛋鸡鸡群进行应用试验,为预防禽病毒性疾病提供新方法。主要结果总结如下:1.优化并确定了“固元颗粒”的制剂工艺。通过制剂成型工艺预实验、辅料选择、润湿剂筛选和验证试验确定了最佳成型工艺。配方为:APS 110 g、GSLS100 g、蔗糖590 g和糊精200 g。制备工艺为:将上述原材料混合均匀,采用75%乙醇为润湿剂,制软材,制粒,60℃烘干,整粒。所得颗粒易成型,颗粒完整,细粉较少。3个试验批次所得颗粒质量一致,该工艺稳定可行。2.建立了“固元颗粒”中人参皂苷Rg1、Re、Rd含量的高效液相色谱测定方法。通过精密度试验、重复性试验、稳定性试验及回收率试验证实,RSD<2%,测定三批“固元颗粒”,每1 g颗粒中Rg1+Re+Rd总量均在30 mg以上。该方法操作简便,测量准确,可作为对该制剂质量控制的内容记入质量标准。3.“固元颗粒”具有良好的安全性和有效性。对鸡按推荐量的1、3、5、10倍（0.05、0.15、0.25和0.5 g/kg体重）剂量混饮,连续7 d,停药后继续饲养2周。记录鸡行为、体重的变化,检测血常规和血液生化指标以及脏器指数,结果均未见异常,表明该制剂对鸡临床用药具有较高的安全性。另外,不同剂量的“固元颗粒”均可有效提高蛋鸡的抗体效价水平、红细胞花环率和生产性能指标,其中50 mg/kg为最适应用剂量。“固元颗粒”对注射新城疫（ND）疫苗的鸡群具有免疫增强作用。使用50mg/kg该颗粒对鸡进行免疫调节试验,测定脏器指数、新城疫抗体效价和脾淋巴细胞转化指数,证实用药2-3周后其体内NDV抗体效价显着高于对照组（P<0.05）。“固元颗粒”对免疫抑制鸡具有免疫调理作用。对经环磷酰胺（Cyclophosphamide,CTX）导致的免疫抑制鸡使用“固元颗粒”后,可使其免疫抑制现象得到显着缓解（P<0.05）。另外,在疫苗免疫后7、14和21d,上述4个给药处理组的脾淋巴细胞经刀豆蛋白A（ConA）和LPS诱导,淋巴细胞刺激指数均显着高于CTX组（P<0.05）。“固元颗粒”对免疫抑制小鼠亦有免疫调节作用。“固元颗粒”中、高剂量组可显着提高免疫抑制小鼠的脾脏指数和胸腺指数（P<0.05）。给药15 d后,免疫抑制小鼠IL-2和IFN-γ含量接近正常小鼠水平,其中“固元颗粒”中剂量组（50 mg/kg）效果最为明显。另外,各剂量组的脾淋巴细胞转化率与CTX组相比较极显着提升（P<0.01）。4.“固元颗粒”促进蛋鸡淋巴细胞TLR4信号通路的激活及相关细胞因子的分泌。分离蛋鸡外周血淋巴细胞,与不同浓度的“固元颗粒”（终浓度200、100、50、25、0μg/mL,阳性对照为浓度100μg/mL的APS）分别培养16 h、24h、32 h、48 h,采用RT-PCR方法检测淋巴细胞中TLR4、MyD88、TRAF-6、TRIF、IRF3、IFN-βmRNA表达量。收集培养24 h的淋巴细胞上清液,用ELISA测定cGMP、cAMP、NO、iNOS和Ca2+的含量。结果显示,“固元颗粒”通过TLR4受体激活MyD88依赖性和TRIF依赖性两条信号通路,还可降低鸡外周淋巴细胞培养上清中cAMP的含量,提高cGMP、Ca2+、NO和iNOS的含量,从而调节蛋鸡的免疫功能。5.“固元颗粒”在鸡群中应用可促进疫苗免疫效果。随机选择2栋鸡舍,分为“固元颗粒”+疫苗免疫组和单独疫苗免疫组,各3100只鸡,按剂量50 mg/kg体重饮水进行临床应用试验。结果显示,与单独疫苗对照组相比,“固元颗粒”试验组的疫苗免疫抗体效价显着提高,发病率和死亡率分别下降0.7和0.8个百分点,表明“固元颗粒”在大群临床试验中,能够有效降低发病率和死亡率,增加养殖收益。综上所述,本研究确定了“固元颗粒”稳定的制备工艺并制定了其质量标准,证实制剂安全有效。初步证实该颗粒制剂可通过TLR4受体激活MyD88和TRIF通路,降低cAMP含量,提高cGMP、Ca2+、NO、iNOS含量,从而调节鸡的免疫应答。“固元颗粒”能够明显提高蛋鸡的疫苗免疫后特异性抗体的分泌水平,降低发病率和死亡率,具有较好的应用前景。
王月欣[4]（2019）在《QX型传染性支气管炎病毒抗体检测方法建立与亚单位疫苗研制》文中研究说明鸡传染性支气管炎（Infectious bronchitis,IB）是由传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus,IBV）引起的一种急性、高度接触性传染病。IBV易发生变异,血清型众多,不同血清型毒株之间交叉保护性弱,研制与流行毒株血清型一致的疫苗并建立配套的免疫效果评价方法非常重要。近年来,QX型已成为当前亚洲和欧洲流行的优势血清型,在我国分离鉴定的流行毒株中占比超过70%。因此,本研究的目的就是研制一种针对QX型IBV亚单位疫苗,建立起与之相配套的检测QX型IBV抗体的间接ELISA方法,并与本实验室研制的鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗（La Sota株+QXL87株）配合,为QX型IBV的免疫防控提供全面的解决方案。1 QX型IBV抗体的间接ELISA方法建立通过Protean软件对QX型IBV CK/CH/JS/2010/12毒株（以下简称QXL株）的S1蛋白抗原性进行分析,选取该蛋白抗原性较强的5个部位,对应的基因片段分别命名为S1-A（61-525bp）、S1-B（454-933bp）、S1-C（835-1299bp）、S1-D（1453-1620bp）、S1-E（277-882bp）。S1蛋白氨基酸序列与IBV血清型分型密切相关,S1-A～S1-E5个多肽均位于S1蛋白高变区,利用Megalign软件将多肽氨基酸序列分别与6个疫苗毒株（H120、H52、MA5、M41、W93、4/91）的S1蛋白氨基酸序列进行比对,以S1-E多肽的变异率最高,与Mass型疫苗株及4/91疫苗株相比,变异率分别达到25%、20.3%,推测S1-E多肽是建立ELISA方法的最佳包被抗原。利用PCR方法扩增这5个基因片段,将5个基因片段分别克隆至pET-32a（+）载体进行原核表达,SDS-PAGE鉴定结果显示S1-A～S1-E这5个多肽均成功表达,大小与预期相符,分别为36.9kD、37.7kD、37.2kD、26.4kD、42.2kD。利用Ni-NTA亲和层析介质分别纯化出这5种多肽作为包被抗原,同时检测QX型IBV阳性血清与阴性血清,比较P/N值,结果显示S1-E多肽与阳性血清反应的灵敏度最高。以S1-E多肽作为ELISA包被抗原,经过一系列条件优化,包被抗原按1μ/mL稀释、HRP标记的兔抗鸡抗体按1:10000稀释为最佳工作浓度,除抗原需4℃孵育12 h,显色需37℃避光孵育10min,其余步骤按37℃孵育1 h为最佳工作条件。经测定,该方法与新城疫病毒、禽流感病毒、传染性法氏囊病毒等阳性血清无交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数均小于12%,表明该方法的重复性和特异性良好,可进一步用于QX型IBV疫苗抗体水平的监测。2 QX型IBV S1亚单位疫苗的研制利用PCR扩增QXL株的S1基因,截去信号肽部分,将该基因克隆到pET-32a（+）载体进行原核表达,SDS-PAGE鉴定结果显示蛋白表达形式主要为包涵体且大小与预期相符为70kD,将融合蛋白命名为S1。利用Ni-NTA亲和层析介质纯化变性条件下的S1蛋白,并经过蛋白透析液复性,以纯化复性后的S1蛋白为疫苗水相,白油为佐剂制成油包水剂型亚单位疫苗,每毫升疫苗含100 μg蛋白。3日龄SPF雏鸡随机分为四组:S1亚单位疫苗组、QXL87活疫苗组、QXL87+S1亚单位疫苗组和非免疫攻毒对照组,每组15只。于7日龄时以滴鼻点眼方式免疫QXL87活疫苗,免疫剂量为1羽份（103.5EID50）,于21日龄以胸部肌肉注射方式免疫S1亚单位疫苗,免疫剂量为0.5 mL。亚单位疫苗免疫1周后,QXL87+S1亚单位疫苗组抗体水平显着上升且高于其他组。只免疫亚单位疫苗组的抗体水平在免疫21 d后明显上升。所有试验鸡于49日龄以滴鼻点眼的方式攻毒,所攻毒株为QXL毒株,攻毒剂量为104.0EID5C0/0.1mL。攻毒后观察10日,每日统计各试验组发病和死亡情况。结果显示S1亚单位疫苗组、QXL87活疫苗组和QXL87+S1亚单位疫苗组对QXL株的临床保护效力分别为70%、90%和90%。分别于攻毒后第2d、5 d、7d采取咽喉拭子及泄殖腔拭子,应用实时荧光定量PCR的方法测定各试验组排毒量,结果显示QXL87+S1亚单位疫苗组的排毒量最低,S1亚单位疫苗组的排毒量相较另外两个免疫组较高。攻毒后第10 d将所有试验鸡处死并剖检,分别取气管上中下三段制备成气管环,观察各试验组鸡气管的纤毛活力,结果显示免疫试验组鸡的气管纤毛活力基本在67%～100%之间,纤毛脱落少且活力较好,临床观察结果显示各免疫组试验鸡的气管和肾脏未见明显病变。综合临床保护效力、排毒量和气管纤毛活力这3个指标,单独免疫S1亚单位疫苗对QXL毒株的攻击可提供一定的保护;QXL87活疫苗和S1亚单位疫苗联合免疫时效果最佳,对QXL株的攻击能够达到足够的免疫保护效力。
黄梦姣,张芸,薛春宜,曹永长[5]（2019）在《应对日益严峻的挑战:中国禽传染性支气管炎研究》文中指出自1937年禽传染性支气管炎病毒在美国被首次分离以来,该病毒的传播给世界养禽业带来了严重的经济损失。中国地域辽阔、气候多样,国内该病毒的流行情况十分复杂。本文就传染性支气管炎在国内的病原分离、分子流行病学、检测技术、疫苗及综合防控技术等方面的研究与实践进行总结。目前,该病毒在中国多种类型毒株并存,优势流行毒株为QX基因型毒株。除广泛使用的H120等Mass血清型疫苗外,4/91血清型疫苗和LDT3-A株疫苗也被逐步使用,多采用弱毒疫苗和灭活疫苗联合免疫的方法有效控制了其对养禽业造成的经济损失。
丁丽琼[6]（2017）在《胚胎免疫传染性法氏囊疫苗在肉鸡生产中的优化及应用》文中指出胚胎免疫的目的是降低雏鸡的死亡率、提高家禽的生产性能、降低劳动成本,发挥胚胎免疫的最大生产效益。将该技术应用于肉鸡生产中,对提高肉鸡养殖效益具有积极意义。方法:试验选用罗斯308种蛋入孵化机入孵,分为试验组和对照组。试验组（胚胎免疫）在胚胎孵化至一定胚龄（18-21d）时通过胚胎注射器注射传染性法氏囊疫苗（vHVT-013-16株）0.05 mL/枚（约2000 PFU）入出雏机孵化至21d出雏,对照组（传统免疫）直接落盘后,入出雏机孵化至21d出雏,同时人工注射相同剂量的传染性法氏囊疫苗（vHVT-013-16株）后,试验组和对照组均按照公司免疫程序后,将试验组和对照组白羽肉鸡运输至同一个肉鸡场饲养,按公司原有的免疫程序、饲养管理方法和“全进全出”的模式对试验组和对照组肉鸡进行饲养。试验结果如下:1胚胎免疫与传统免疫的比较在未对胚胎注射器针头、种蛋注射d等相关改进前,肉鸡胚胎免疫法接种氏囊疫苗,通过对比胚胎免疫与传统免疫的效果,可知第1台孵化机胚胎免疫与传统免疫的孵化率分别为86.20%和89.40%;第2台孵化机的胚胎免疫与传统免疫的孵化率分别为为87.10%和88.76%;第3台孵化机胚胎免疫与传统免疫的孵化率分别为87.80%和90.69%,第1台孵化机胚胎免疫与传统免疫的后期死胚率分别为4.46%和1.85%和;第2台孵化机胚胎免疫与传统免疫的后期死胚率分别为3.47%和1.92%;第3台孵化机的胚胎免疫与传统免疫的后期死胚率为3.34%和1.55%;抗体滴度、每周死亡淘汰率、肉鸡体重与传统免疫相近,差异不显着（P>0.05）。2胚胎免疫在生产应用中条件的优化通过对胚胎注射器的参数进行校正,最终确定针头的长度为21.08mm、针头型号为20G。通过对孵化至18.5d、18.75d、19.0d三个落盘（注射）d进行试验,后期死胚率分别为4.99%、2.37%、2.57%;孵化率分别为86.08%、86.52%、89.68%,根据孵化率及后期死胚率,最终确定胚胎免疫的注射d为19.0d。通过对三个不同周期种蛋进行试验,前期种蛋、高峰期种蛋的落盘时间小于20min,后期种蛋的落盘时间大于20min,后期死胚率分别为3.37%、2.94%、4.99%;孵化率分别为88.15%、89.02%、67.59%,因此最适合注射的种蛋生产周龄为产蛋前期和产蛋高峰期种蛋。3胚胎免疫在生产应用中的研究在对注射条件优化后,将胚蛋注射器设备与自动落盘设备对接,投入生产中使用。通过连续3d的自动化落盘注射,可知第1d胚胎免疫前期种蛋的孵化率为91.34%,低于传统免疫,高峰期种蛋的孵化率为90.78%,高于传统免疫,后期种蛋的孵化率为63.90%,高于传统免疫;第2d胚胎免疫前期种蛋的孵化率为89.35%,低于传统免疫,高峰期种蛋的孵化率为89.35%,高于传统免疫,后期种蛋的孵化率为58.89%,低于传统免疫;第3d胚胎免疫前期种蛋的孵化率为89.93%,低于传统免疫、高峰期种蛋的孵化率为89.54%,低于传统免疫,后期种蛋的孵化率均为62.12%,低于传统免疫;抗体滴度、阳性率、每周死亡淘汰率、肉鸡体重与传统免疫相近。以上结果表明胚胎免疫在改进和优化相关参数后,与传统免疫相比对白羽肉鸡肉鸡生产无不良影响,因此胚胎免疫技术可应用与白羽肉鸡肉鸡生产中替代传统人工免疫注射。
毕玉彧[7]（2015）在《活疫苗污染外源性ALV的检测及泛素介导的ALV-J多基因共表达DNA疫苗的构建》文中研究指明禽白血病（Avian leukosis,AL）由反转录病毒科、α反转录病毒属的禽白血病病毒（Avian leukosis virus,ALV）引起,其中J亚群ALV是目前最为普遍、对养殖业危害最为严重的亚群。目前对其防控最为有效的手段是对种鸡群进行净化。为了更好的服务于疫病的净化与防控工作,本课题一方面对部分开展净化工作的种鸡场常用的活疫苗进行外源性ALV的检测,另一方面进行了泛素介导的基于ALV-J多基因串联共表达DNA疫苗的构建。主要内容如下:首先,课题对广西、广东开展ALV净化的4家种鸡场常用的由14家疫苗公司生产的11种类型共计45份的活疫苗进行外源性ALV的检测。采用的方法包括疫苗直接进行PCR的检测以及将疫苗接种DF1细胞进行病毒分离培养。结果在2份活疫苗中检测到了 ALV-J,经过病毒全基因组序列的测定与分析,发现二株病毒的核苷酸同源性为97.5%,与参考毒株的同源性比较发现,2个疫苗毒株与2009年在中国江苏病鸡中分离的JS09GY3株的亲缘关系最近且核苷酸同源性均为95.5%。其次,课题通过PCR方法分别扩增泛素基因与ALV-J HG03毒株的gp85、P27和P10基因,通过各基因之间的酶切位点进行连接,将串联的片段连接到真核表达载体pVAX1上,成功构建了 5个重组质粒即pVAX1-Ub1-gp85、pVAX1-Ub1-gp85-P27、pVAX1-Ub1-gp85-P10、pVAX1-Ub1-gp85-P27-P10和pVAX1-Ub2-P27-P10,然后分别将重组质粒转染DF1细胞,在转染后的12、24、48、72小时,应用gp85的特异性单克隆抗体及鸡抗ALV-A/B、ALV-J亚型阳性血清分别进行间接免疫荧光试验（IFA）以检测目的基因的表达情况。结果显示,构建的携带病毒蛋白的重组质粒均成功在DF1细胞中得到了表达。本课题研究的结果证明,在目前使用的商品活疫苗中检测到了外源性J亚群ALV的污染;成功构建了泛素介导的基于ALV-J多基因共表达的DNA疫苗并在体外培养的细胞上得到了表达。
杨德全[8]（2008）在《传染性支气管炎病毒核蛋白粘膜免疫及ELISA检测方法的研究》文中进行了进一步梳理传染性支气管炎（Infectious bronchitis,IB）是由传染性支气管炎病毒（Infectiousbronchitis virus,IBV）引起的鸡的一种急性、高度接触性传染病。IBV的N蛋白在进化上较为保守,主要与基因组核酸的包裹、RNA的合成和细胞免疫有关,含有大量抗原决定簇,免疫原性仅次于S蛋白,能诱导机体产生交叉保护性抗体。本研究克隆表达了具有高度保守性的N蛋白基因,并将其作为免疫原制备多克隆抗体,建立检测IBV抗原的夹心ELISA法,为该病的早期诊断和控制提供了良好工具。IBV血清型较多,新的变异株在不断出现,且不同型毒株间缺乏交叉保护或仅有部分交叉保护,给免疫防治带来很大困难。本研究尝试利用霍乱毒素B亚基（Cholera toxin B subunit,CTB）的粘膜佐剂作用,将IBV N基因的表达产物与CTB混合或将N基因与CTB融合表达后,鼻腔免疫7日龄肉鸡,以期提高鸡鼻腔、气管和肠粘膜表面抗IBV sIgA的抗体水平,从而达到预防和控制IB的目的。本研究主要研究内容和研究结果如下:1.IBV核蛋白基因（np）与霍乱毒素B亚基基因（ctb）的融合表达将ctb基因和np基因融合后,在大肠杆菌BL21（DE3）中获得了成功表达,产物命名为rCTB-NP。复性后的表达产物经SDS-PAGE检测,出现了分子量大小为72.0kDa和92.0kDa的两条带。Western blot分析表明,融合蛋白rCTB-NP中的N蛋白具有良好的免疫反应性。GM1-ELISA实验结果表明,融合蛋白rCTB-NP中的CTB蛋白具有良好的免疫学活性。2.传染性支气管炎病毒重组核蛋白粘膜免疫效果研究将融合蛋白rCTB-NP,rNP、rNP+rCTB分别免疫7日龄肉鸡,用ELISA法检测血清中的IgG-NP、IgA-NP及鼻、气管和肠粘膜部位的sIgA-NP。结果发现,二免和三免后,血清中均能产生较高水平的IgG-NP抗体,但IgA-NP抗体水平较低;鼻、气管和肠粘膜部位rCTB+rNP组和rCTB-NP组的sIgA-NP抗体水平与NP组比较,前两组显着高于NP组（p＜0.05）;气管粘膜部位sIgA-NP水平表现为rCTB-NP组＞rCTB+rNP组＞rNP组。结果表明,CTB与IBV N蛋白融合表达产物或与该蛋白混合进行鼻腔免疫时,能显着提高鸡鼻腔、气管和肠粘膜表面sIgA的抗体水平。3.检测传染性支气管炎病毒的夹心ELISA方法的建立以鸡抗NP IgG为包被抗体,兔抗IBV IgG为二抗,建立了检测IBV的夹心ELISA法。结果表明,鸡抗IBV IgG的最佳包被浓度为2.5μg/mL,兔抗IBV IgG的最适工作浓度为5μg/mL;该方法比血球凝集试验敏感性高8倍以上,与NDV、AIV、EDS-76V、IBDV等无交叉反应,说明该法特异性和敏感性较高。
严泽华[9]（2007）在《鸡传染性鼻炎三价灭活疫苗的研制》文中认为鸡传染性鼻炎（Infectious Coryza）是由副鸡嗜血（Haemophilus paragallinarum）引起的一种急性上呼吸道传染病。它可以引起生长停滞,增加淘汰鸡数,产蛋率下将10-40%而造成经济上的严重损失,给肉种鸡饲养带来严重的威胁。为有效预防河南地区传染性鼻炎的发生,进行了本项研究。首先,从近几年分离鉴定的结果来看,我国已经出现了B型副鸡嗜血杆菌的感染,这是鸡传染性鼻炎在我国流行的一个新特点。由于我国目前多使用A型单价疫苗和A + C型二价疫苗预防鸡传染性鼻炎,所以B型菌的感染就无法得到控制,已经造成了许多产蛋鸡场的免疫失败。因此,研制符合我国流行特点的预防鸡传染性鼻炎的三价灭活疫苗是非常必要的。然而由于B型菌感染的免疫保护还具有一定的株特异性（这也是造成所有进口三价苗效果不佳的原因） ,不同的分离株免疫原性有很大的差异,所以筛选抗原性强、免疫谱广的B型株对研制疫苗非常重要,也是鸡传染性鼻炎三价疫苗研制的前提和基础。其次,以河南地区鸡场的发病鸡群为病料来源,经细菌形态学鉴定,分离培养,生化试验和致病性试验,又将分离株用血凝抑制试验进行了血清型的鉴定,分离出致病性副鸡嗜血杆菌,结果表明分离菌A型,C型较多,而B型较少,说明我国鸡传染性鼻炎的流行已经出现了新的特点,有相当一部分鸡场的免疫失败是由于B血清型的出现引起的。最后,对B血清型进行鉴定,用B型和A,C型做成三价灭活疫苗。并对试验室制备的传染性鼻炎三价灭活疫苗进行了安全性,免疫效力,免疫持续期,免疫剂量试验和田间试验等,结果表明,该苗各项指标均符合要求,安全可靠,免疫原性强,免疫效果好,7天开始产生免疫力,免疫效力可持续1年。
杨恒东[10]（2007）在《研发和创新能力:兽药业的财富之源》文中提出近年来,我国兽药业虽然取得了长足进步,但是,兽药研发和创新能力还严重不足,具体表现在科研经费投入不足、缺少独立的研发机构、产品结构不合理、生产工艺尚待提高等方面。本文作者着重探讨了新兽药研发的途径,并对新兽药研发提出了相应的建议,有参考价值。
二、鸡传染性支气管炎三价活疫苗（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、鸡传染性支气管炎三价活疫苗（论文提纲范文）
（1）Apg凝集抗原的制备和某IC灭活疫苗对流行菌株的保护效果评价（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 文献综述 鸡传染性鼻炎诊断及防控研究进展 |
| 1 病原学特征 |
| 2 致病性 |
| 3 流行病学 |
| 4 临床症状 |
| 5 病理变化 |
| 6 诊断 |
| 6.1 临床诊断 |
| 6.2 病原分离鉴定 |
| 6.3 分子生物学诊断技术 |
| 6.4 血清型方法 |
| 7 综合防控 |
| 7.1 加强饲养管理 |
| 7.2 药物治疗 |
| 7.3 疫苗预防 |
| 8. 研究目的与意义 |
| 第一章 副鸡禽杆菌凝集抗原的制备 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 菌株 |
| 1.1.2 主要试剂及配制 |
| 1.1.3 主要仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 Apg的标准株的复苏及扩大培养 |
| 1.2.2 Apg血凝抑制试验抗原的制备 |
| 1.2.3 血凝抑制试验抗原菌株的筛选 |
| 1.2.4 Apg冻干血凝抑制试验抗原的制备 |
| 2 结果 |
| 2.1 Apg血凝抑制抗原处理方法的确定 |
| 2.2 血凝抑制试验抗原菌株的筛选 |
| 2.3 Apg冻干血凝抑制试验抗原的制备 |
| 3 讨论 |
| 第二章 鸡传染性鼻炎灭活疫苗对副鸡禽杆菌流行菌株的保护效果评价 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 菌株 |
| 1.1.2 实验动物 |
| 1.1.3 试验用灭活疫苗 |
| 1.1.4 培养基和主要试剂的配制 |
| 1.1.5 主要仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 试验设计 |
| 1.2.2 试验鸡攻毒后的临床症状观察 |
| 1.2.3 应用实时荧光PCR检测方法进行排菌量检测 |
| 1.2.4 眶下窦拭子重新分离试验 |
| 2 结果 |
| 2.1 免疫后HI抗体水平的监测情况 |
| 2.2 试验鸡攻毒后的临床症状 |
| 2.3 眶下窦和气管的剖检病变 |
| 2.4 攻毒后的体重监测 |
| 2.5 攻毒后产蛋率监测 |
| 2.6 排菌量检测 |
| 2.7 重新分离试验 |
| 3 讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（2）鸡传染性鼻炎流行病学调查与防控技术推广（论文提纲范文）
| 1 立项背景和项目来源 |
| 2 项目采取的技术措施 |
| 2.1 开展鸡传染性鼻炎的流行病学调查 |
| 2.2 对不同类型传染性鼻炎疫苗、不同免疫程序的免疫效果进行调查 |
| 2.2.1 未进行传染性鼻炎疫苗免疫 |
| 2.2.2 进行一次传染性鼻炎A型灭活疫苗或A+C型灭活疫苗免疫 |
| 2.2.3 进行二次传染性鼻炎A型灭活疫苗或A+C型灭活疫苗免疫 |
| 2.2.4 进行传染性鼻炎ABC三价疫苗二次免疫 |
| 2.3 发病造成的经济损失 |
| 2.4 做好鸡舍环境控制，加强生物安全措施的落实 |
| 3 推广成效和效益 |
| 3.1 大力推广疫苗免疫，养殖效益显着提高 |
| 3.2 全面净化养殖环境，显着降低疫病风险 |
| 3.3 经济效益 |
| 3.4 社会效益 |
| 4 项目实施的结论 |
（3）“固元颗粒”免疫增强剂研制及其在鸡疫苗免疫中的应用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 中药免疫增强剂的研究进展 |
| 1.1 免疫增强剂的分类 |
| 1.2 中药免疫增强剂概述 |
| 1.3 中药免疫增强剂的有效成分 |
| 1.4 中药免疫增强剂的作用机理 |
| 1.5 人参、黄芪免疫增强作用研究进展 |
| 1.6 中药免疫增强剂在养禽业中的应用 |
| 第二章 中药对TOLL样受体和信号传导的研究进展 |
| 2.1 先天性免疫 |
| 2.2 ToLL样受体 |
| 2.3 中药对TLRs信号传导途径的研究 |
| 2.4 中药对信号转导的影响 |
| 第二篇 试验研究 |
| 第一章 “固元颗粒”制剂工艺研究 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 “固元颗粒”质量标准研究 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 “固元颗粒”的安全性和有效性研究 |
| 3.1 材料 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.3 试验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 “固元颗粒”对蛋鸡TLR4 信号通路及胞内分子的调节 |
| 4.1 材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 “固元颗粒”在蛋鸡疫苗免疫中的应用 |
| 5.1 材料 |
| 5.2 方法 |
| 5.3 结果 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 导师简介 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（4）QX型传染性支气管炎病毒抗体检测方法建立与亚单位疫苗研制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 文献综述 |
| 1 IB病原学 |
| 1.1 病原分类 |
| 1.2 病毒形态与结构 |
| 1.3 病毒基因组结构特征 |
| 1.4 IBV编码的结构蛋白及生物学功能 |
| 1.4.1 S蛋白 |
| 1.4.2 M蛋白 |
| 1.4.3 N蛋白 |
| 1.4.4 E蛋白 |
| 1.5 病毒分型 |
| 2 IBV流行病学 |
| 2.1 美洲 |
| 2.2 亚洲 |
| 2.3 欧洲 |
| 3 传染性支气管炎疫苗的研究进展 |
| 3.1 弱毒疫苗 |
| 3.2 灭活疫苗 |
| 3.3 基因工程疫苗 |
| 3.3.1 亚单位疫苗 |
| 3.3.2 核酸疫苗 |
| 3.3.3 重组疫苗 |
| 4 疫苗免疫评价方法研究进展 |
| 4.1 ELISA在IBV抗体检测技术应用的研究进展 |
| 4.1.1 国内外研究进展 |
| 5 研究目的和意义 |
| 第一章 QX型传染性支气管炎病毒抗体的间接ELISA方法建立 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 载体与菌株 |
| 1.1.2 病毒和血清样品 |
| 1.1.3 主要生物试剂 |
| 1.1.4 主要试剂的配制 |
| 1.1.5 仪器设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 S1-A～S1-E多肽的原核表达 |
| 1.2.2 间接ELISA抗体检测方法的建立 |
| 2 结果 |
| 2.1 S1-A～S1-E氨基酸序列分析结果 |
| 2.2 S1-A～S1-E重组蛋白的表达鉴定 |
| 2.2.1 S1-A～S1-E基因的扩增鉴定 |
| 2.2.2 S1-A～S1-E表达重组质粒的构建及鉴定 |
| 2.2.3 S1-A～S1-E重组质粒的诱导表达鉴定 |
| 2.2.4 S1-A～S1-E多肽的纯化鉴定 |
| 2.3 间接ELISA检测方法的建立 |
| 2.3.1 包被抗原的筛选 |
| 2.3.2 间接ELISA最佳反应条件的确定 |
| 3 讨论 |
| 第二章 QX型鸡传染性支气管炎病毒亚单位疫苗的研制 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 载体与菌株 |
| 1.1.2 病毒、试验动物 |
| 1.1.3 主要生物试剂 |
| 1.1.4 主要试剂的配制 |
| 1.1.5 仪器设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 S1蛋白的原核表达 |
| 1.2.2 S1亚单位疫苗的制备 |
| 1.2.3 油乳剂亚单位疫苗的性状检验 |
| 1.2.4 攻毒保护实验 |
| 2 结果 |
| 2.1 S1蛋白的原核表达 |
| 2.1.1 S1基因的体外扩增鉴定 |
| 2.1.2 S1重组表达质粒的鉴定 |
| 2.1.3 S1重组质粒的诱导表达鉴定 |
| 2.2 油乳剂亚单位疫苗的性状检验 |
| 2.2.1 粘度检验结果 |
| 2.2.2 稳定性检验结果 |
| 2.3 S1亚单位疫苗对QX型流行毒株的免疫保护实验 |
| 2.3.1 试验鸡抗体消长规律 |
| 2.3.2 试验鸡攻毒后临床表现 |
| 2.3.3 气管和肾脏病理变化 |
| 2.3.4 纤毛病理变化及评分 |
| 2.3.5 试验鸡气管及肾脏组织病理学分析 |
| 2.3.6 试验鸡排毒检测 |
| 3 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（5）应对日益严峻的挑战:中国禽传染性支气管炎研究（论文提纲范文）
| 1 禽传染性支气管炎病毒 |
| 2 中国IBV毒株分离与鉴定 |
| 3 IBV分子流行病学研究 |
| 4 IBV检测技术研究 |
| 5 IBV疫苗开发 |
| 6 IBV免疫程序研究 |
| 7 IBV综合防控措施 |
| 8 结语 |
（6）胚胎免疫传染性法氏囊疫苗在肉鸡生产中的优化及应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1 鸡传染性法氏囊病的概述 |
| 2 胚胎免疫的研究进展 |
| 2.1 胚胎免疫概述 |
| 2.2 胚胎免疫的作用机理 |
| 2.3 鸡胚胎免疫研究进展 |
| 2.4 传染性法氏囊疫苗胚胎免疫的作用机理 |
| 3 胚胎免疫在生产应用中的现状 |
| 4 本研究的目的及其意义 |
| 第二章 胚胎免疫与传统免疫的比较 |
| 1 试验材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验动物及处理 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.4 试验数据处理 |
| 2 |
| 2.2 试验结果与分析 |
| 2.2.1 胚胎免疫与传统免疫孵化率的比较 |
| 2.2.2 胚胎免疫与传统免疫后期死胚率(18. 5-21d未出雏的死胚)的比较 |
| 2.2.3 胚胎免疫与传统免疫白羽肉鸡抗体滴度的比较 |
| 2.2.4 胚胎免疫与传统免疫白羽肉鸡死亡淘汰率的比较 |
| 2.2.5 胚胎免疫与传统免疫白羽肉鸡体重的比较 |
| 2.3 讨论 |
| 第三章 胚胎免疫在生产中条件的优化 |
| 1 试验材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验动物及处理 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.4 数据处理 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 注射器设备针头参数对胚胎免疫的影响 |
| 2.2 种蛋落盘(注射)d对胚胎免疫的影响 |
| 2.3 种蛋周期对胚胎免疫的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 注射器设备针头参数对胚胎免疫的影响 |
| 3.2 种蛋落盘(注射)d对胚胎免疫的影响 |
| 3.3 种蛋周期对胚胎免疫的影响 |
| 第四章 胚胎免疫在生产应用中的研究 |
| 1 试验材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验动物及处理 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.4 数据处理 |
| 2 试验结果与分析 |
| 2.1 胚胎免疫对白羽肉鸡孵化率的影响 |
| 2.2 胚胎免疫对白羽肉鸡后期死胚率的影响 |
| 2.3 胚胎免疫对白羽肉鸡抗体滴度的影响 |
| 2.4 胚胎免疫对白羽肉鸡抗体阳性率的影响 |
| 2.5 胚胎免疫对白羽肉鸡死亡淘汰率的影响 |
| 2.6 胚胎免疫对白羽肉鸡体重的影响 |
| 3 讨论 |
| 第五章 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（7）活疫苗污染外源性ALV的检测及泛素介导的ALV-J多基因共表达DNA疫苗的构建（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩写、符号说明 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 禽白血病及其防控的概述 |
| 1.1.1 病原学 |
| 1.1.2 流行病学 |
| 1.1.3 诊断方法 |
| 1.2 商品疫苗中外源性ALV的污染及检测 |
| 1.3 核酸疫苗及其应用 |
| 1.3.1 核酸疫苗的免疫机理 |
| 1.3.2 核酸疫苗的佐剂 |
| 1.3.3 核酸疫苗的优点及存在的问题 |
| 1.3.4 核酸疫苗的免疫方法及途径 |
| 1.4 泛素-蛋白酶体系概述 |
| 1.4.1 泛素-蛋白酶体系 |
| 1.4.2 泛素在增强免疫应答方面的作用 |
| 1.5 本课题研究目的与意义 |
| 第二章 种鸡场使用的部分商品活疫苗中ALV的检测、分离鉴定及全基因序列分析 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 疫苗来源 |
| 2.1.2 主要试剂与细胞 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 疫苗前处理 |
| 2.2.2 直接PCR检测 |
| 2.2.3 细胞培养病毒分离的检测 |
| 2.2.4 病毒分离株全基因序列测定 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 疫苗直接PCR结果 |
| 2.3.2 细胞培养病毒分离后的检测结果 |
| 2.3.3 疫苗直接PCR与病毒分离后PCR的结果比较 |
| 2.3.4 分离株A1、D2全基因序列分析 |
| 2.4 小结与讨论 |
| 2.4.1 活疫苗中检测出ALV-J |
| 2.4.2 待检疫苗的预处理 |
| 2.4.3 疫苗中分离毒株基因序列分析 |
| 2.4.4 使用污染外源性ALV的疫苗对净化的影响 |
| 2.4.5 活疫苗中外源性ALV作为传播途径的可能性 |
| 2.4.6 疫苗直接PCR与病毒分离后PCR结果的分析 |
| 第三章 泛素介导的ALV-J多基因串联表达DNA疫苗的构建 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 毒株、菌株、细胞、质粒及单克隆抗体 |
| 3.1.2 载体 |
| 3.1.3 主要试剂 |
| 3.1.4 主要仪器 |
| 3.1.5 常用试剂的配制 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 引物设计 |
| 3.2.2 目的基因的扩增 |
| 3.2.3 重组克隆载体的构建及鉴定 |
| 3.2.4 真核表达载体的构建及鉴定 |
| 3.2.5 重组质粒转染DF1细胞 |
| 3.2.6 间接免疫荧光试验检测目的蛋白表达 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 目的基因的扩增 |
| 3.3.2 重组克隆载体的构建与鉴定 |
| 3.3.3 真核表达载体的构建及鉴定 |
| 3.3.4 间接免疫荧光试验检测目的蛋白的表达 |
| 3.4 小结与讨论 |
| 3.4.1 重组质粒的成功构建 |
| 3.4.2 泛素介导的ALV-J多基因共表达DNA疫苗的应用前景 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 攻读硕士学位期间参与的科研项目及论文发表情况 |
（8）传染性支气管炎病毒核蛋白粘膜免疫及ELISA检测方法的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 禽传染性支气管炎研究进展 |
| 1.1 IBV的病原学 |
| 1.1.1 IBV的分类地位 |
| 1.1.2 IBV的理化特性 |
| 1.1.3 生物学特性 |
| 1.1.3.1 血凝性 |
| 1.1.3.2 对新城疫病毒复制的干扰性 |
| 1.1.3.3 血清型 |
| 1.2 鸡传染性支气管炎流行病学、临床症状和病理学特征 |
| 1.2.1 流行病学 |
| 1.2.2 临床病变类型 |
| 1.2.2.1 呼吸型 |
| 1.2.2.2 生殖道型 |
| 1.2.2.3 肾型 |
| 1.2.2.4 肠型 |
| 1.2.2.5 腺胃型 |
| 1.2.2.6 肌肉型 |
| 1.3 传染性支气管炎的检测方法 |
| 1.3.1 IBV的分离鉴定 |
| 1.3.2 血清学诊断 |
| 1.3.2.1 沉淀反应 |
| 1.3.2.2 血凝(HA)和血凝抑制试验(HI) |
| 1.3.2.3 酶联免疫吸附试验(ELISA) |
| 1.3.2.4 中和试验(VN) |
| 1.3.2.5 荧光抗体技术(FA) |
| 1.3.2.6 斑点免疫金测定法(DIGFA) |
| 1.3.3 分子生物学检测技术 |
| 1.3.3.1 逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR) |
| 1.3.3.2 核酸探针技术 |
| 1.3.3.3 限制性片段长度多态性分析(RFLP) |
| 1.3.3.4 寡核苷酸指纹图谱分析 |
| 1.4 传染性支气管炎疫苗的研究进展 |
| 1.4.1 活疫苗 |
| 1.4.2 灭活疫苗 |
| 1.4.3 基因工程疫苗 |
| 1.4.3.1 IB亚单位疫苗 |
| 1.4.3.2 IB核酸疫苗 |
| 1.4.3.3 IB重组疫苗 |
| 1.4.3.4 IB转基因植物疫苗 |
| 1.5 IBV的分子生物学 |
| 1.5.1 IBV的基因组结构 |
| 1.5.2 IBV的转录机制 |
| 1.5.3 IBV的结构蛋白及其生物学功能 |
| 1.5.3.1 纤突蛋白的结构与功能 |
| 1.5.3.2 膜蛋白的结构和功能 |
| 1.5.3.3 核蛋白的结构和功能 |
| 1.5.3.4 E蛋白 |
| 1.5.3.5 非结构域 |
| 1.5.4 IBV的复制 |
| 1.5.5 IBV的变异 |
| 1.5.5.1 IBV遗传变异的研究状况 |
| 1.5.5.2 IBV遗传变异的机理 |
| 2 粘膜免疫研究进展 |
| 2.1 家禽粘膜免疫研究进展 |
| 2.1.1 家禽粘膜系统 |
| 2.1.1.1 家禽粘膜系统的组成 |
| 2.1.1.2 家禽粘膜免疫系统的特点 |
| 2.1.1.3 家禽粘膜免疫系统的功能 |
| 2.1.2 家禽粘膜免疫反应 |
| 2.1.3 家禽粘膜免疫在抗感染中的作用 |
| 2.1.3.1 家禽粘膜免疫抗感染机制 |
| 2.1.3.2 家禽粘膜免疫抗感染作用 |
| 2.1.4 家禽粘膜免疫系统与sIgA |
| 2.1.4.1 sIgA是粘膜免疫系统的主要体液防御因子 |
| 2.1.4.2 sIgA在粘膜免疫应答中的作用 |
| 2.1.5 疫苗与粘膜免疫的关系 |
| 2.1.6 早期粘膜免疫对免疫器官的激活和启动作用 |
| 2.1.7 母源抗体与粘膜免疫 |
| 2.2 经鼻免疫及其佐剂的研究进展 |
| 2.2.1 鼻内免疫 |
| 2.2.2 鼻粘膜免疫相关佐剂 |
| 2.2.3 霍乱毒素B亚单位研究进展 |
| 2.2.4 CTB粘膜佐剂的展望 |
| 第二章 传染性支气管炎病毒核蛋白基因和霍乱毒素B亚基的融合表达 |
| 1 研究目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 质粒及菌株 |
| 2.1.2 酶及主要试剂 |
| 2.1.3 血清 |
| 2.2 主要溶液的配制 |
| 2.2.1 抗生素类 |
| 2.2.2 细菌培养基 |
| 2.2.3 质粒抽提相关溶液 |
| 2.2.4 SDS-PAGE相关溶液 |
| 2.2.5 Western blot相关溶液 |
| 2.2.6 表达提取纯化表达蛋白的相关溶液 |
| 2.2.7 其它试剂 |
| 2.3 方法 |
| 2.3.1 引物设计 |
| 2.3.2 PCR反应体系 |
| 2.3.3 PCR产物的电泳检测 |
| 2.3.4 PCR产物的回收与纯化 |
| 2.3.5 PCR产物的克隆 |
| 2.3.6 大肠杆菌DH5α、BL21感受态的制备(氯化钙法) |
| 2.3.7 质粒的转化 |
| 2.3.8 质粒的小量制备(碱裂解法) |
| 2.3.9 序列测定 |
| 2.3.10 DNA重组技术(DNA酶切、连接) |
| 2.3.11 重组质粒的酶切鉴定 |
| 2.3.12 原核表达载体的构建 |
| 2.3.13 大肠杆菌BL21(DE3)的诱导表达 |
| 2.3.14 包涵体的制备 |
| 2.2.15 包涵体的纯化与复性 |
| 2.3.16 表达蛋白SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定 |
| 2.3.17 表达产物的GM_1结合测定(GM_1-ELISA) |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 ctb、np片段的扩增 |
| 3.2 ctb基因和np基因的克隆与鉴定 |
| 3.3 重组表达质粒pKG-ctb和pKG-np的酶切鉴定 |
| 3.4 重组表达质粒pKGCN的酶切鉴定 |
| 3.5 表达产物的SDS-PAGE结果 |
| 3.5.1 重组蛋白rCTB和rNP表达产物的SDS-PAGE结果 |
| 3.5.2 重组蛋白rCTB-NP表达产物的SDS-PAGE结果 |
| 3.6 重组蛋白rNP和rCTB-NP表达产物的Western-blot检测结果 |
| 3.7 重组蛋白rCTB和rCTB-NP表达产物的GM_1-ELISA检测 |
| 4 讨论 |
| 4.1 表达系统的选择 |
| 4.2 融合蛋白的表达及包涵体的提取 |
| 4.3 GM_1-ELISA |
| 5 小结 |
| 第三章 传染性支气管炎病毒核蛋白粘膜免疫研究 |
| 1 研究目的及意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要溶液的配制 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 动物的免疫 |
| 2.2.2 样品的采集与处理 |
| 2.2.3 样本的ELISA检测 |
| 2.2.3.1 样本IgG-NP抗体的检测 |
| 2.2.3.2 样本IgA-NP抗体的检测 |
| 2.2.4 数据处理 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 免疫前后血清IgG-NP、IgA-NP的ELISA检测结果 |
| 3.2 免疫前后鼻腔洗液、气管洗液、肠腔洗液中sIgA-NP的ELISA检测结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 重组CTB的免疫佐剂活性 |
| 4.2 免疫途径 |
| 4.3 不同部位的sIgA含量 |
| 4.4 CTB与外源抗原的使用方式与粘膜免疫效果的关系 |
| 4.5 CTB佐剂作用与实验对象的关系 |
| 4.6 IB的防制 |
| 5 小结 |
| 第四章 鸡传染性支气管炎ELISA检测方法的初步建立 |
| 1 研究目的和意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 病毒及微生物材料 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 ELISA试剂的配制 |
| 2.1.4 主要实验器材 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 包被抗体(Ab1)和第二抗体(Ab2)最佳工作浓度测定 |
| 2.2.2 敏感性试验及临界点的确定 |
| 2.2.3 特异性交叉试验 |
| 2.2.4 特异性阻断叉试验 |
| 2.2.5 重复性试验 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 包被抗体(Ab_1)和兔抗AIV抗体(Ab_2)最佳工作浓度测定结果 |
| 3.2 临界值的确定 |
| 3.3 敏感性试验 |
| 3.4 交叉性试验 |
| 3.5 特异性阻断试验 |
| 3.6 重复性试验结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 IBV检测方法的选择 |
| 4.2 影响ELISA特异性的因素 |
| 4.3 夹心ELISA的应用前景 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（9）鸡传染性鼻炎三价灭活疫苗的研制（论文提纲范文）
| 内容提要 |
| 引言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 鸡传染性鼻炎病原学的研究进展 |
| 1 形态与染色特征 |
| 2 培养特性 |
| 3 生化反应 |
| 4 抵抗力 |
| 5 血清型及抗原特性 |
| 第二章 鸡传染性鼻炎流行病学的研究进展 |
| 1 流行病学 |
| 2 临床症状 |
| 3 病理变化 |
| 4 临床诊断 |
| 5 防治 |
| 第三章 鸡传染性鼻炎灭活疫苗的研究进展 |
| 1. 传染性鼻炎二价油乳剂灭活疫苗的研究 |
| 2. B 型变异株的一种新型传染性鼻炎四价疫苗研究进展 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 鸡传染性鼻炎血清型的分离 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结与讨论 |
| 第二章 鸡传染性鼻炎血清 B 型的鉴定 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结与讨论 |
| 第三章 鸡传染性鼻炎三价灭活疫苗的研制 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结与讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 致谢 |
| 导师简介 |
| 作者简介 |
| 英文简历 |
（10）研发和创新能力:兽药业的财富之源（论文提纲范文）
| 一兽药行业的整体现状 |
| 二兽药研发的现状及面临的问题 |
| 三新兽药的研发途径 |
| 1仿制与创新相结合 |
| 2从基因水平发现和筛选新药 |
| 3注重兽药设计、合成与构效关系的研究 |
| 4组合化学和高通量筛选技术的应用 |
| 5开发新复方兽药 |
| 6兽药新剂型的研究 |
| 7新型疫苗的研制 |
| 四对新兽药研发的建议 |
| 1建立兽药创新研发体系 |
| 2加强科技队伍建设和基础理论研究 |
| 3适时申报专利 |
| 五新兽药监测期期限 |
| 六近年来批准的新兽药 |
四、鸡传染性支气管炎三价活疫苗（论文参考文献）
- [1]Apg凝集抗原的制备和某IC灭活疫苗对流行菌株的保护效果评价[D]. 徐恒立. 扬州大学, 2021
- [2]鸡传染性鼻炎流行病学调查与防控技术推广[J]. 王秋生,孙银华,程素平,储新生,许秀平. 中国畜禽种业, 2021(01)
- [3]“固元颗粒”免疫增强剂研制及其在鸡疫苗免疫中的应用[D]. 王申锋. 吉林大学, 2020(08)
- [4]QX型传染性支气管炎病毒抗体检测方法建立与亚单位疫苗研制[D]. 王月欣. 扬州大学, 2019(06)
- [5]应对日益严峻的挑战:中国禽传染性支气管炎研究[J]. 黄梦姣,张芸,薛春宜,曹永长. 微生物学通报, 2019(07)
- [6]胚胎免疫传染性法氏囊疫苗在肉鸡生产中的优化及应用[D]. 丁丽琼. 福建农林大学, 2017(01)
- [7]活疫苗污染外源性ALV的检测及泛素介导的ALV-J多基因共表达DNA疫苗的构建[D]. 毕玉彧. 广西大学, 2015(05)
- [8]传染性支气管炎病毒核蛋白粘膜免疫及ELISA检测方法的研究[D]. 杨德全. 华中农业大学, 2008(02)
- [9]鸡传染性鼻炎三价灭活疫苗的研制[D]. 严泽华. 吉林大学, 2007(05)
- [10]研发和创新能力:兽药业的财富之源[J]. 杨恒东. 中国禽业导刊, 2007(03)
标签：鸡传染性支气管炎论文; 抗原抗体反应论文; 抗原决定簇论文; 血清蛋白论文; 抗原抗体论文;