一、人胎盘提取物对大鼠伤口愈合的作用(英文)（论文文献综述）
林苗远,李豫皖,刘毅,陈贝,张莉[1]（2022）在《组织工程皮肤的研究热点及应用价值》文中认为背景:组织工程皮肤在促进皮肤组织创面修复、无瘢痕愈合方面具有较好的运用前景。目的:综述目前组织工程皮肤在体内外的研究进展、应用及价值。方法:应用计算机检索CNKI数据库及PubMed数据库中收录的相关文献,中文检索词为"间充质干细胞,生长因子,皮肤,创面,皮肤修复,创面愈合,再生医学,组织工程,支架材料",英文检索词为"mesenchymal stem cells,growth factor,skin,wound,skin repair,wound healing,regenerative medicine,tissue engineering,scaffolds"。查阅国内外近年来关于组织工程皮肤治疗皮肤组织损伤的相关文献,也包括对间充质干细胞、生长因子、支架材料和敷料等新治疗手段的研究进展进行总结。排除与文章主题不相关的文献,最终纳入78篇文献进行结果分析。结果与结论:组织工程皮肤构建涉及到种子细胞的筛选、生长因子的应用以及支架材料多个环节要素的组合。间充质干细胞是组织工程皮肤种子细胞的重要来源之一,生长因子优化组织培养环境,支架材料提供适当的机械支持。因此,如何选择适当的种子细胞、生长因子和支架材料构建组织工程化皮肤治疗创面损伤,加快修复,是未来应探究的重点和研究方向,此外创面敷料材料的开发也是一个新的领域。
宋潇逸,程亮[2]（2021）在《分析外治法在慢性创面愈合中的应用》文中进行了进一步梳理慢性创面为创伤、各种急慢性疾病引起的创面迁延不愈,是国内外临床治疗难题之一,其疗程长,给患者及社会带来巨大负担。创面的愈合分为止血、炎症、增殖修复、重塑4个阶段,其中包含多种细胞、生长因子、炎症介质等的参与。目前慢性创面治疗仍以外治法为主。该文对近年来慢性创面外治方法及其作用机制研究进行综述。为促进创面愈合的应用及研究提供参考。
眭荣春,肖云,胡庭国,邓晓军,胡亚军[3]（2021）在《人胎盘提取物药理作用研究进展》文中研究指明健康产妇胎盘提取物具有肝保护、抗炎、抗氧化、促进癌细胞凋亡、改善创伤和促进神经再生等作用,临床主要用于抗疲劳、慢性肝病和癌症辅助治疗等。本文对人胎盘提取物药理作用研究进展进行了综述。
张千振[4]（2021）在《ADSCs-exo对大鼠肝I/R合并部分切除损伤保护作用的研究》文中进行了进一步梳理肝脏缺血再灌注（Ischemia reperfusion,I/R）损伤是肝切除和肝移植手术中不可避免的病理生理过程,是导致术后肝功能障碍的主要因素。目前尚未完全认识肝I/R损伤的发病机制,缺乏有效的治疗措施和干预药物,如何减轻肝I/R损伤是兽医和医学领域亟待解决的问题。脂肪间充质干细胞（Adipose derived mesenchymal stem cells,ADSCs）具有自我更新和多向分化的潜能,具有促进损伤组织修复与再生的特性。研究发现ADSCs通过旁分泌作用发挥的生物学功能,且外泌体是旁分泌物质的主要成分。近年来,发现ADSCs来源的外泌体（ADSCs derived exosomes,ADSCs-exo）在神经系统疾病、心肌损伤、肺损伤、肾损伤中具有促进损伤组织修复的功能,但在肝损伤中的保护作用与机制研究较少。因此,本研究旨在探究ADSCs-exo对大鼠肝I/R合并部分切除损伤的保护作用及相关机制。主要研究内容如下:（1）建立理想的大鼠肝I/R合并部分切除试验模型:将72只雄性SD大鼠随机分为三组,假手术组（Sham组）、肝缺血60 min再灌注合并部分切除组（I60R+PH组）和肝缺血30min再灌注合并部分切除组（I30R+PH组）。Sham组的大鼠仅暴露第一肝门,不阻断血供。I60R+PH组的大鼠肝中叶与肝左叶缺血60 min,并切除左外叶。I30R+PH组的大鼠肝中叶与肝左叶缺血30 min,并切除左外叶。再灌注6 h、24 h、72 h、168 h检测肝脏组织病理学、肝功能、血常规、氧化应激、炎症反应、Caspase活性及ATP含量的变化,进而优选出最佳模型组进行下一步试验。（2）探究ADSCs和ADSCs-exo对大鼠肝损伤的保护作用及相关机制:将24只雄性SD大鼠随机分为四组,假手术组（Sham组）、肝缺血30 min再灌注合并部分切除组（I30R+PH组）、脂肪间充质干细胞组（ADSCs组）和脂肪间充质干细胞来源外泌体组（ADSCs-exo组）。Sham组的大鼠仅暴露第一肝门,不阻断血供,术后即刻通过尾静脉注射600μL PBS。I30R+PH组、ADSCs组和ADSCs-exo组建立大鼠肝缺血30 min再灌注合并部分切除损伤模型,I30R+PH组术后即刻通过尾静脉注射600μL PBS,ADSCs组术后即刻通过尾静脉注射含有2×106个ADSCs的600μL PBS混合液,ADSCs-exo组术后即刻通过尾静脉注射含有100μg ADSCs-exo的600μL PBS混合液。再灌注24 h观察肝组织显微结构和超微结构的变化,检测氧化应激与炎症反应相关因子的变化,检测细胞凋亡、线粒体功能、线粒体生物合成、线粒体动力学及内质网应激相关指标的表达情况,对比分析ADSCs和ADSCs-exo对大鼠肝I/R合并部分切除损伤的影响。试验结果如下:（1）缺血时间对大鼠肝I/R合并部分切除损伤的影响I60R+PH组与I30R+PH组相比,再灌注6 h和24 h ALT水平显着升高,再灌注6 h SOD与GSH-px活性显着降低,再灌注6 h Caspase-9活性与再灌注6 h、24 h Caspase-3活性显着升高,炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量变化不显着,ATP含量变化不显着;再灌注6 h和24 h肝组织病理损伤较大,可见肝细胞坏死,I60R+PH组肝细胞坏死程度高于I30R+PH组;表明大鼠肝I/R合并部分切除损伤在再灌注24 h内较严重,肝缺血时间延长,肝损伤加重。由此可见,经过试验优化I30R+PH组为本实验的最佳模型。（2）ADSCs-exo对大鼠肝I/R合并部分切除损伤的保护作用1)肝功能检测结果:I30R+PH组ALT、AST、TBIL、ALP、LDH水平显着升高。ADSCs和ADSCs-exo干预后ALT、AST、TBIL、ALP、LDH水平显着降低,促进肝功能的恢复。2)肝组织显微结构与超微结构观察结果:I30R+PH组可见多处坏死灶,炎性细胞浸润,肝细胞严重肿胀;透射电镜观察可见细胞核皱缩,染色质边缘化聚集,线粒体明显肿胀,内质网严重扩张。ADSCs和ADSCs-exo干预后可见炎性细胞浸润和肝细胞肿胀程度减轻,细胞核轻微皱缩,改善了线粒体损伤与内质网扩张程度。3)氧化应激水平检测结果:I30R+PH组肝组织中抗氧化酶SOD、CAT、GSH-px活性显着降低,MDA、ROS含量显着升高。ADSCs和ADSCs-exo干预后抗氧化酶活性显着升高,肝组织中MDA、ROS含量显着降低。4)炎症指标检测结果:I30R+PH组血液中WBC、NE、LY数量显着增加,肝组织中促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6和抗炎因子IL-10含量显着升高。ADSCs和ADSCs-exo干预后WBC数量显着减少,肝组织中促炎因子含量显着降低,抗炎因子含量显着升高。5)细胞凋亡检测结果:I30R+PH组肝细胞凋亡数量显着增多,促凋亡因子Bax、Cleaved Caspase-9、Cleaved Caspase-3蛋白表达显着升高,Bax、Caspase-9和Caspase-3 m RNA表达显着升高,抗凋亡因子Bcl-2 m RNA与蛋白表达显着降低。ADSCs和ADSCs-exo干预后肝细胞凋亡数量显着减少,并抑制促凋亡因子的表达,促进抗凋亡因子的表达。6)线粒体功能检测结果:I30R+PH组肝组织中ATP含量显着降低,ADSCs和ADSCs-exo干预后显着升高ATP含量。7)线粒体生物合成检测结果:I30R+PH组PGC-1α、Nrf1和Tfam m RNA与蛋白表达显着降低,ADSCs和ADSCs-exo干预后PGC-1α、Nrf1和Tfam m RNA与蛋白表达显着升高。8)线粒体动力学平衡检测结果:I30R+PH组Drp1、Fis1 m RNA与蛋白表达显着升高,Mfn1、Mfn2和Opa1 m RNA与蛋白表达显着降低。ADSCs和ADSCs-exo干预后Drp1、Fis1m RNA与蛋白表达显着降低,Mfn1和Opa1 m RNA表达显着升高,Mfn1、Mfn2和Opa1蛋白表达显着升高。9)内质网应激检测结果:I30R+PH组GRP78、p-PERK/PERK、ATF-6、p-IRE1α/IRE1α、p-e IF2α/e IF2α、ATF-4、CHOP、XBP1s、p-JNK/JNK、Cleaved Caspase-12蛋白表达显着升高,GRP78、ATF-6、IRE1α、ATF-4、CHOP、XBP1、JNK、Caspase-12 m RNA表达显着升高。ADSCs和ADSCs-exo干预后上述m RNA与蛋白表达显着降低。综上所述,大鼠尾静脉注射ADSCs和ADSCs-exo能够抑制氧化应激与炎症反应,改善肝组织的显微结构与超微结构,促进肝功能的恢复。ADSCs与ADSCs-exo可调控线粒体生物合成、促进线粒体融合、抑制线粒体分裂、改善线粒体功能障碍、抑制内质网应激与细胞凋亡,对大鼠肝I/R合并部分切除损伤起到保护作用。因此,促进线粒体生物合成、维持线粒体动力学平衡及减轻内质网应激可为防治肝I/R合并部分切除损伤提供新的策略。ADSCs-exo与ADSCs干预效果无显着差异,表明ADSCs-exo可能是一种替代ADSCs治疗肝I/R合并部分切除损伤安全有效的手段。
王宏宇[5]（2021）在《hucMSC-exo不同移植途径对小鼠皮肤创面愈合的比较研究》文中研究指明
苏炜良[6]（2021）在《人尿源干细胞外泌体对髓核细胞抗压力诱导凋亡作用及机制的研究》文中研究说明目的:本研究旨在确定人尿源性干细胞来源外泌体（USCs-exos）对髓核细胞（NPCs）干预后,对压力诱导条件下NPCs凋亡、椎间盘退变（IDD）的作用及作用机制的初步探索。方法:从健康成人尿液中获取人尿源性干细胞（USCs）,应用倒置显微镜、三系分化实验、流式细胞分析对所获取细胞进行鉴定;使用透射显微镜、纳米粒径分析、WB对提取的外泌体进行鉴定并观察NPCs对外泌体的摄取。从腰椎间盘突出症患者术中获取NPCs,使用WB、q RT-PCR检测压力条件下NPCs的ER应激水平。设对照组、48H组以及USCs-exos组,其中对照组不做处理,48H组压力培养48H,USCs-exos组压力培养48H并加入USCs-exos进行干预。采用WB、q RT-PCR、TUNEL分析对压力条件下及外泌体干预后内质网应激情况进行测定;并对AKT、ERK通路进行部分检测。结果:人尿源性干细胞呈短梭形或纺锤形;可成功进行成骨、成脂、成软骨分化;流式细胞分析CD29,CD44,CD73表达阳性;USCs-exos在透射电镜下表现为中心凹陷类圆形,结合纳米粒径分析测量出其直径在50-100nm;WB显示CD63、Tsg101呈高表达,Calnexin低表达或不表达;外泌体可被髓核细胞摄取。压力培养后髓核细胞中ER应激标志物GRP78、CHOP随时间延长而增加（P<0.05）。USCs-exos能够改善ER应激并减少由此导致的UPR的过度活化及细胞凋亡（P<0.05）。USCs-exos可通过AKT和ERK信号通路抑制ER应激的发生,减少细胞凋亡（P<0.05）。结论:USCs-exos在改善压力诱导条件下NPCs的凋亡及椎间盘退变方面效果显着,对内质网应激的抑制以及AKT和ERK通路的激活可能发挥了重要的作用,可成为椎间盘退变疾病的新的研究方向和治疗方式。
张文君[7]（2021）在《EFEMP1与IZUMO1的相互作用及对受精的影响》文中研究表明哺乳动物在有性生殖的过程中发生受精作用,其中最关键的步骤是精子与卵子细胞膜的融合。精卵膜融合以精子和卵子表面的多个蛋白质分子相互作用为基础。目前已知精卵膜融合所需的蛋白质相互作用中,最重要的是精子表面的IZUMO1和卵子表面的JUNO之间的相互作用。但仅有IZUMO1和JUNO间的相互作用还不足以促使精卵完成细胞膜融合,这一过程应该还需要许多相关分子与IZUMO1和JUNO相互作用。为了鉴定同IZUMO1和JUNO存在相互作用的蛋白及其对精卵融合的影响,本文用酵母双杂交技术和免疫共沉淀技术鉴定了大鼠EFEMP1与IZUMO1的相互作用,通过间接免疫荧光技术观察了EFEMP1在小鼠睾丸、卵巢、精子和卵子中的定位,以及与IZUMO1在大鼠和小鼠精子上的共定位,最后利用体外授精技术测定了经EFEMP1抗体处理后小鼠精卵的受精率改变,评估EFEMP1在精卵膜融合过程中的作用。首先克隆了大鼠efemp1的cDNA,构建pGAD-efemp1酵母表达载体,分别与实验室保存的p GBK-Izumo1以及p GBK-juno酵母表达载体进行酵母双杂交,结果表明EFEMP1与IZUMO1存在相互作用,与JUNO不存在相互作用。构建p CMV-Flag-efemp1真核表达载体,与实验室保存的p CMV-HA-Izumo1真核表达载体共转染293 T细胞,进行免疫共沉淀实验,结果表明EFEMP1与IZUMO1存在相互作用。构建pET-28a-efemp1原核表达载体,转化E.coli BL21（DE3）感受态细胞,诱导表达并分离纯化EFEMP1-HIS融合蛋白,免疫昆明白小鼠,获得小鼠抗EFEMP1-HIS腹水多克隆抗体,并验证其特异性。以自制的EFEMP1-HIS腹水多克隆抗体作为一抗进行间接免疫荧光实验,观察EFEMP1在睾丸、卵巢、精子和卵子中的定位;以自制的EFEMP1-HIS腹水多克隆抗体和实验室保存的兔抗IZUMO1-GST血清多克隆抗体共同作为一抗进行间接免疫荧光实验,观察EFEMP1和IZUMO1在大鼠精子和小鼠精子中的共定位。结果表明,EFEMP1表达于小鼠睾丸组织肌样细胞的细胞质和各发育阶段精子细胞的细胞质中,表达于小鼠卵巢组织中卵泡细胞的细胞质中以及卵子的细胞质中和细胞膜上;EFEMP1定位于顶体反应前后大鼠精子和小鼠精子的头部和尾部前半段,小鼠MII期卵母细胞的细胞膜上和细胞质中;EFEMP1和IZUMO1共定位于顶体反应后大鼠精子的头部以及顶体反应前小鼠精子的头部。通过体外授精实验观察并对比不做处理的小鼠精卵、经小鼠腹水处理后小鼠精卵以及经EFEMP1腹水多克隆抗体处理后小鼠精卵的受精率。结果表明,经EFEMP1腹水多克隆抗体处理后,小鼠精卵的受精率略低于经小鼠腹水处理后小鼠精卵的受精率,两者均略低于不做处理的小鼠精卵的受精率,但这三组的精卵受精率的差异不显着。本文验证发现EFEMP1与IZUMO1存在相互作用,EFEMP1与JUNO不存在相互作用;发现EFEMP1在小鼠的睾丸组织、卵巢组织以及在顶体反应前后大鼠精子和小鼠精子中的定位,以及EFEMP1和IZUMO1在顶体反应后大鼠精子和顶体反应前小鼠精子的头部存在共定位;经EFEMP1抗体处理后小鼠精卵的受精率略有下降,但其受到的影响不显着。
胡祺柯[8]（2021）在《卵巢脱细胞外基质对物理性损伤卵巢修复的研究》文中研究表明脱细胞外基质（Decellularized Extracellular Matrix,DECM）已经被广泛地应用于治疗非功能性组织损伤及再生。本论文研究了原位移植卵巢DECM对物理性损伤卵巢组织修复的作用及其作用机制。本论文先采用0.2%SDS溶液成功制备了CD1小鼠的卵巢DECM。随后将372只4周龄CD1小鼠随机分为3组,实验组小鼠在每侧卵巢切除1/2时,同时各植入一个DECM;对照组小鼠则进行与实验组相同的卵巢切除手术,但不植入DECM;正常组小鼠不进行任何操作。三组小鼠分别于术后第2、4、7、14、30、60、90天回收卵巢组织,采用组织学、免疫组织化学染色和分子生物学等方法检测了卵巢组织的修复情况,并对其作用机制进行了探究。实验结果表明,实验组小鼠动情周期基本正常,而对照组小鼠发情周期出现了不规律性;在卵巢的组织结构方面,实验组与对照组小鼠间无差异。但是,卵泡计数结果显示实验组小鼠卵巢原始卵泡数显着高于对照组（p<0.05）;胶原染色分析结果显示实验组小鼠的卵巢上皮胶原厚度显着低于对照组（p<0.05）;Caspase-3免疫组化染色表明实验组小鼠的卵巢颗粒细胞凋亡数量低于对照组,但是差异不显着;α-SMA免疫组化染色结果表明,在术后2天、4天和7天的实验组卵巢组织中,α-SMA阳性细胞在卵巢中的占比显着高于对照组与正常组（p<0.05）;流式细胞分析结果显示,在术后2天、4天、7天,实验组卵巢组织中的F4/80+CD11b+巨噬细胞数量显着高于对照组和正常组（p<0.05）,CD86+M1细胞的比例显着高于正常组（p<0.05）;术后30天,CD206+M2细胞显着增高（p<0.05）。在对照组中,M2型细胞在术后2天和4天显着高于正常组（p<0.05）。本论文的实验结果证明原位移植的卵巢DECM可以调控物理性损伤卵巢募集成纤维细胞和激活巨噬细胞、促进组织修复、抑制卵巢纤维化、改善卵巢组织微环境、抑制颗粒细胞凋亡、防止卵泡闭锁、维持卵巢的生殖力等。该研究将卵巢DECM直接应用于卵巢组织的修复,为临床治疗物理性损伤的卵巢组织修复开拓了新途径。
吴迪[9]（2021）在《人羊膜来源上皮细胞调节主动脉内皮细胞血管生成及其分子机制的探究》文中研究说明目的:动脉粥样硬化如今已成为危害人类健康的重要疾病,血管内皮受损是其始动因素。血管内皮细胞是是一层有活性的细胞,其完整性及生理特性对人体至关重要。除了动脉粥样硬化过程,血管内皮细胞还参与血管生成、血管收缩与舒张、凝血功能、炎症反应调控、内分泌功能、物质交换等重要的生理和病理过程。血管生成（Angiogenesis）指从毛细血管后微静脉出芽形成新的毛细血管网络,过程极其复杂,其中血管内皮细胞的激活、增殖、迁移、重建形成新的血管和血管网是非常重要的环节,是促进血管生成因子和抑制血管生成因子相互协调作用的结果。正常情况下二者处于平衡状态,一旦平衡打破就会激活血管系统,使血管生成过度或抑制,导致病理性事件。干细胞在血管生成方面的作用一直是研究热点,但是作用机制始终未能完全明确,特别是干细胞通过旁分泌功能对靶细胞的调控作用备受关注。人羊膜来源上皮细胞是干细胞的一种,能够旁分泌大量的生长因子及趋化因子等生物活性因子,旁分泌是其对靶细胞功能进行调控的重要方式之一。本研究的目的是:（1）建立人羊膜来源上皮细胞（hAECs）的体外分离、培养方法,并对其进行表型鉴定和纯度分析。（2）检测人羊膜上皮细胞条件培养液（hAEC-CdM）中的细胞因子,并对其相关信号通路进行富集分析。（3）观察不同浓度的人羊膜上皮细胞条件培养液对体外培养的人主动脉内皮细胞（hAoECs）增殖、迁移及血管生成作用的影响。（4）探究人羊膜上皮细胞条件培养液调节人主动脉内皮细胞相关生理作用的分子机制。研究方法:（1）采用胰蛋白酶消化法分离、体外培养人羊膜上皮细胞,应用免疫荧光染色分析其表型特征。（2）将收集的hAEC-CdM进行液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）检测,并对结果进行GO富集分析和KEGG信号通路分析。（3）实验分组情况:我们设计用ECM培养hAoECs为对照组,标记为Control组;在ECM中加入0.5倍、1倍及2倍浓度的hAEC-CdM设为3个实验组,标记为0.5×CdM组、1×CdM组、2×CdM组,分别用四种培养液培养hAoECs,然后进行相关实验验证hAoECs功能的变化。抑制剂干预实验分组:ECM组（Control）、1×CdM组、抑制剂组（SB431542或K02288）、CdM+抑制剂组。（4）经hAEC-CdM处理24小时、48小时及72小时后,通过CCK-8实验观察不同浓度hAEC-CdM对hAoECs增殖能力的影响。（5）经hAEC-CdM处理12小时及24小时后,通过细胞划痕实验评估不同浓度hAEC-CdM对hAoECs迁移能力的影响。（6）基质胶血管生成实验验证不同浓度hAEC-CdM对hAoECs管腔形成能力的影响。（7）Western Blot检测不同浓度hAEC-CdM对hAoECs TGF-β通路活化的影响。结果:（1）消化下来的人羊膜上皮细胞贴壁后呈多角形,长满后呈现上皮细胞特有的铺路石样,可在体外大量扩增。上皮细胞传至第2代用于细胞鉴定及实验。免疫荧光结果显示:上皮细胞高表达上皮细胞标志物角蛋白CK19,不表达间充质细胞标志物Vimentin,纯度在90%以上。（2）本次质谱分析鉴定蛋白273种,参与信号通路88种。GO富集分析结果显示:人羊膜上皮细胞条件培养液主要调节靶细胞的代谢过程、内吞作用和磷酸化进程;KEGG信号通路分析结果显示:羊膜上皮细胞条件培养液主要影响靶细胞的PI3K-Akt通路、mTOR通路和TGF-β通路。（3）CCK-8实验结果:在24小时节点,不同浓度实验组的hAoECs增殖能力与对照组相比均无显着差别（p>0.05）;在48小时节点,0.5×CdM组的hAoECs增殖能力与对照组相比无明显差别（p>0.05）,1×CdM组和2×CdM组的hAoECs增殖能力均明显高于对照组（p<0.05）;在72小时节点,不同浓度实验组hAoECs增殖能力均明显高于对照组（p<0.05）。根据以上结果可知:hAEC-CdM促进hAoECs增殖,随着hAEC-CdM浓度增加,其对hAoECs增殖的促进作用增强。（4）划痕实验结果:在12小时节点,0.5×CdM组细胞迁移能力与对照组无显着差别（p>0.05）,1×CdM组和2×CdM组细胞迁移能力显着高于对照组（p<0.05）;在24小时节点,不同浓度实验组细胞迁移能力均明显高于对照组（p<0.05）。根据以上结果可知:hAEC-CdM促进hAoECs迁移,随着hAEC-CdM浓度增加,其对hAoECs迁移的促进作用增强。（5）基质胶血管生成实验结果:对照组hAoECs在6小时开始逐渐形成管腔结构,0.5×CdM组和1×CdM组hAoECs在6小时形成管腔结构多于对照组,且1×CdM组形成的管腔结构多于0.5×CdM组。但是2×CdM组在6小时几乎没有形成管腔结构。根据以上结果可知:低浓度hAEC-CdM促进hAoECs管腔形成。（6）加入不同浓度hAEC-CdM刺激后的Western Blot结果:（1）ALK5-Smad3-Snail-Postn通路相关蛋白的表达:0.5×CdM组、1×CdM组和2×CdM组的ALK5和Smad3蛋白表达水平与对照组相比无显着差异（p>0.05）,0.5×CdM组和1×CdM组p-Smad3、Snail和Postn蛋白表达水平明显高于对照组（p<0.05）,但2×CdM组p-Smad3、Snail和Postn蛋白表达水平明显低于于对照组（p<0.05）。（2）ALK1-Smad5-Snail-Postn通路相关蛋白的表达:0.5×CdM组、1×CdM组和2×CdM组的ALK1和Smad5蛋白表达水平与对照组相比无显着差异（p>0.05）,0.5×CdM组和1×CdM组p-Smad5、Snail和Postn蛋白表达水平明显高于对照组（p<0.05）,但2×CdM组p-Smad5、Snail和Postn蛋白表达水平明显低于于对照组（p<0.05）。（7）加入抑制剂后的Western Blot结果:（1）加入SB431542后p-Smad3及其下游相关蛋白的western blot结果:加入抑制剂SB431542后,相较于对照组Smad3的蛋白表达水平无显着差异（p>0.05）,p-Smad3、Snail和Postn的蛋白表达水平显着降低（p<0.05）。1×CdM组p-Smad3、Snail和Postn的表达水平相较于对照组显着升高（p<0.05）,说明1×CdM促进了上述蛋白的表达;加入SB431542后,（CdM+SB）组p-Smad3、Snail和Postn的蛋白表达水平显着降低（p<0.05）,说明SB431542一定程度上抑制了1×CdM对hAoECs上述蛋白表达的促进作用。（2）加入K02288后p-Smad5及其下游相关蛋白的western blot结果:加入抑制剂K02288后,相较于对照组Smad5的蛋白表达水平无显着差异（p>0.05）,p-Smad5、Snail和Postn的蛋白表达水平显着降低（p<0.05）。1×CdM组p-Smad5、Snail和Postn的表达水平相较于对照组显着升高（p<0.05）,说明1×CdM促进了hAoECs的上述蛋白的表达;在加入K02288后（CdM+K02288组）p-Smad5、Snail和Postn的蛋白表达水平显着降低（p<0.05）,说明K02288在一定程度上抑制了1×CdM对hAoECs上述蛋白表达的促进作用。（8）加入抑制剂后的血管生成实验结果:（1）使用1×CdM预培养主动脉内皮细胞24小时后进行基质胶血管生成实验,对照组细胞在6小时开始逐渐形成管腔结构,1×CdM组细胞形成的管腔结构明显多于对照组。（2）加入SB431542抑制Smad3磷酸化后,在6小时节点,SB431542组未见管腔结构形成,而（CdM+SB431542）组形成管腔数目明显少于1×CdM组,说明抑制Smad3磷酸化水平确实可以抑制hAEC-CdM促hAoECs血管生成的能力。（3）加入K02288抑制Smad5磷酸化后,在6小时节点,K02288组未见管腔结构形成,而（CdM+K02288）组形成管腔数目明显少于1×CdM组,说明抑制Smad5磷酸化水平确实可以抑制hAEC-CdM促hAoECs血管生成的能力。结论:（1）成功分离培养人羊膜上皮细胞,高表达CK19,不表达Vimentin,纯度在90%以上,在体外培养条件下快速增殖。（2）本次质谱分析鉴定蛋白273种,参与信号通路88种。GO富集分析结果提示人羊膜上皮细胞条件培养液主要调节靶细胞的代谢过程、内吞作用和磷酸化进程;KEGG信号通路分析结果提示人羊膜上皮细胞条件培养液主要影响靶细胞的PI3K-Akt通路、mTOR通路和TGF-β通路。（3）hAEC-CdM促进hAoECs增殖及迁移。（4）低浓度hAEC-CdM激活TGF-β信号通路促进hAoECs管腔形成的能力,而高浓度hAEC-CdM的抑制作用可能与其抑制hAoECs的Snail和Postn表达相关。
刘云[10]（2021）在《hESC衍生和组织来源间充质干细胞慢病毒转导GFP基因的特性分析》文中研究表明目的:1.用pLVX-IRES-Puro-GFP慢病毒转导人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞,流式细胞仪分析慢病毒对三种不同来源人间充质干细胞的转导效率。2.将成功标记绿色荧光蛋白基因的人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞继续传代培养,分析传代培养对绿色荧光蛋白基因阳性的细胞形态及荧光表达的影响。3.测定荧光蛋白标记前后的人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞的增殖、分化及细胞表型,分析慢病毒介导的绿色荧光蛋白转导对人间充质干细胞增殖、分化及细胞表型的影响,为后续干细胞体内示踪奠定基础。方法:1.用相同MOI值pLVX-IRES-Puro-GFP慢病毒转导人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞,流式细胞仪检测三种不同来源人间充质干细胞的慢病毒转导效率。2.将标记有绿色荧光蛋白基因的人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞继续培养传代,观察细胞形态的变化和绿色荧光蛋白基因的表达,流式细胞仪检测细胞增殖10代后绿色荧光蛋白阳性细胞的比例。3.对绿色荧光蛋白标记前后的细胞用CCK-8法测定细胞增殖情况,用定向诱导分化培养液进行成脂、成骨、成软骨诱导分化,油红O、茜素红、阿利新蓝染色液分别对分化后的细胞染色,流式细胞仪测定标记前后细胞表面抗原CD73、CD90、CD105、CD34、CD11b、CD19、CD45和HLA-DR的表达。结果:1.p LVX-IRES-Puro-GFP慢病毒转导人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞的效率存在明显差异,且差异具有显着统计学意义（P<0.01）。结果显示,人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞慢病毒转导效率最高,其次是人脐带间充质干细胞,人脂肪间充质干细胞转导效率最低。2.标记有绿色荧光蛋白基因的人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞继续培养繁殖10代,倒置荧光显微镜下仍然可见几乎所有细胞均带有绿色荧光。自然光线下可见细胞贴壁成梭形,胞质丰富,细胞整体成漩涡状生长,均保持了正常良好的细胞形态,与同代数未转导干细胞比较无明显差异。3.标记有绿色荧光蛋白的人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞的增殖曲线和未标记细胞相近,在450nm波长下测得的OD值无统计学差异（P>0.05）,人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞和人脐带间充质干细胞标记绿色荧光蛋白基因后依然能分化成脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞,流式细胞仪测定表面抗原CD73、CD90、CD105阳性比例均在95%以上,CD34、CD11b、CD19、CD45和HLA-DR几乎不表达（<0.2%）。与同代数未转导干细胞表面抗原表达结果一致。结论:1.p LVX-IRES-Puro-GFP慢病毒转导人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞的效率有显着差异（P<0.01）,分析可能与间充质干细胞来源的不同或细胞增殖力差异等有关。2.标记有绿色荧光蛋白基因的人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞继续培养繁殖10代后细胞形态正常,且绿色荧光蛋白的表达未衰减,提示绿色荧光蛋白基因可在细胞内长期稳定表达,适用于干细胞的长期标记。3.慢病毒GFP基因转导对人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞的生长增殖、分化及细胞表型无不良影响,表明慢病毒介导的绿色荧光蛋白转导对细胞无毒害,且可在细胞内稳定表达,是一种理想的干细胞标记方法。
二、人胎盘提取物对大鼠伤口愈合的作用(英文)（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、人胎盘提取物对大鼠伤口愈合的作用(英文)（论文提纲范文）
（1）组织工程皮肤的研究热点及应用价值（论文提纲范文）
| 文章快速阅读： |
| 文题释义： |
| 0引言Introduction |
| 1 资料和方法Data and methods |
| 1.1 资料来源 |
| 1.2 入选标准 |
| 1.3 资料提取 |
| 1.4 文献证据提炼 |
| 2 结果Results |
| 2.1 间充质干细胞 |
| 2.1.1 骨髓间充质干细胞 |
| 2.1.2 脂肪间充质干细胞 |
| 2.1.3 人脐带间充质干细胞 |
| 2.1.4 人脐血间充质干细胞 |
| 2.1.5 人羊膜间充质干细胞 |
| 2.1.6 人胎盘间充质干细胞 |
| 2.1.7 外周血间充质干细胞 |
| 2.2 生长因子 |
| 2.2.1 转化生长因子β |
| 2.2.2 表皮生长因子 |
| 2.2.3 血管内皮生长因子 |
| 2.2.4 血小板衍生生长因子 |
| 2.2.5 成纤维细胞生长因子 |
| 2.3 支架材料 |
| 3 总结与展望Conclusions and prospects |
（2）分析外治法在慢性创面愈合中的应用（论文提纲范文）
| 1 创面愈合机制 |
| 2 中医疗法 |
| 2.1 外用中药制剂 |
| 2.2 中药提取物的应用 |
| 2.3 灸法及针刺治疗 |
| 2.4 创面敷料的应用 |
| 2.5 生物制剂的应用 |
| 2.6 其他药物 |
| 2.7 手术治疗 |
（3）人胎盘提取物药理作用研究进展（论文提纲范文）
| 1 药理作用 |
| 1.1 肝保护作用，改善肝功能 |
| 1.2 抗炎症作用 |
| 1.3 抗氧化 |
| 1.4 伤口愈合 |
| 1.5 神经，血管生成 |
| 1.6 癌细胞凋亡、阻滞细胞周期、抑制细胞增殖及迁移 |
| 1.7 其它 |
| 2 总结与展望 |
（4）ADSCs-exo对大鼠肝I/R合并部分切除损伤保护作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 前言 |
| 1.1 肝脏缺血再灌注损伤概述 |
| 1.1.1 肝I/R损伤发生机制的研究概况 |
| 1.1.2 肝I/R损伤模型的研究进展 |
| 1.1.3 肝I/R损伤的保护措施 |
| 1.2 脂肪间充质干细胞的研究进展 |
| 1.2.1 干细胞的生物学特性与分类 |
| 1.2.2 ADSCs的优势 |
| 1.2.3 ADSCs安全性问题 |
| 1.2.4 ADSCs治疗的作用机制 |
| 1.3 脂肪间充质干细胞来源外泌体的研究进展 |
| 1.3.1 ADSCs-exo的生物学特征 |
| 1.3.2 ADSCs-exo的生物学功能 |
| 1.3.3 ADSCs-exo的分离提取与保存方法 |
| 1.3.4 ADSCs-exo的应用研究 |
| 1.4 目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验动物 |
| 2.2 试验器材 |
| 2.2.1 常规手术器械 |
| 2.2.2 手术耗材及麻醉设备 |
| 2.2.3 主要仪器 |
| 2.3 试验药品及试剂 |
| 2.4 ADSCs及 ADSCs-exo的分离与鉴定 |
| 2.4.1 ADSCs的分离培养 |
| 2.4.2 ADSCs的鉴定 |
| 2.4.3 ADSCs-exo的提取 |
| 2.4.4 ADSCs-exo的蛋白浓度测定 |
| 2.4.5 ADSCs-exo的鉴定 |
| 2.5 试验动物分组及样本采集 |
| 2.5.1 缺血时间对大鼠肝I/R合并部分切除损伤的影响 |
| 2.5.2 ADSCs-exo对大鼠肝I/R合并部分切除损伤的保护作用 |
| 2.6 肝I/R合并部分切除损伤模型的建立 |
| 2.6.1 术前准备 |
| 2.6.2 手术过程 |
| 2.6.3 术后护理 |
| 2.7 检测内容和方法 |
| 2.7.1 肝功能水平的变化 |
| 2.7.2 血常规指标的变化 |
| 2.7.3 肝组织中氧化应激指标的变化 |
| 2.7.4 肝组织中炎症因子含量的变化 |
| 2.7.5 肝组织中ATP含量的变化 |
| 2.7.6 肝组织形态学观察 |
| 2.7.7 肝细胞凋亡水平的检测 |
| 2.7.8 肝脏线粒体生物合成的检测 |
| 2.7.9 肝脏线粒体动力学的检测 |
| 2.7.10 肝脏ERS水平的检测 |
| 2.8 数据统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 缺血时间对大鼠肝I/R合并部分切除损伤的影响 |
| 3.1.1 手术结果 |
| 3.1.2 血常规指标的变化 |
| 3.1.3 肝组织显微结构观察结果 |
| 3.1.4 肝功能指标的变化 |
| 3.1.5 肝组织氧化应激指标的变化 |
| 3.1.6 肝组织炎症因子含量的变化 |
| 3.1.7 肝组织Caspase活性的变化 |
| 3.1.8 肝组织ATP含量的变化 |
| 3.2 ADSCs与 ADSCs-exo的鉴定 |
| 3.2.1 ADSCs的形态学观察 |
| 3.2.2 ADSCs的鉴定 |
| 3.2.3 ADSCs-exo的鉴定 |
| 3.3 ADSCs-exo对血常规指标的影响 |
| 3.4 ADSCs-exo对肝功能指标的影响 |
| 3.5 ADSCs-exo对肝组织氧化应激指标的影响 |
| 3.5.1 肝组织SOD、CAT、GSH-px活性及MDA含量检测结果 |
| 3.5.2 肝组织ROS检测结果 |
| 3.6 ADSCs-exo对肝组织炎症因子的影响 |
| 3.7 ADSCs-exo对肝组织结构的影响 |
| 3.7.1 ADSCs-exo对肝组织显微结构的影响 |
| 3.7.2 ADSCs-exo对肝组织超微结构的影响 |
| 3.8 ADSCs-exo对肝细胞凋亡的影响 |
| 3.8.1 肝组织TUNEL染色结果 |
| 3.8.2 凋亡相关基因检测结果 |
| 3.8.3 凋亡相关蛋白检测结果 |
| 3.9 ADSCs-exo对肝组织ATP含量的影响 |
| 3.10 ADSCs-exo对线粒体生物合成的影响 |
| 3.10.1 线粒体生物合成相关基因检测结果 |
| 3.10.2 线粒体生物合成相关蛋白检测结果 |
| 3.11 ADSCs-exo对线粒体动力学的影响 |
| 3.11.1 线粒体分裂与融合调控基因表达检测结果 |
| 3.11.2 线粒体分裂与融合调控蛋白表达检测结果 |
| 3.12 ADSCs-exo对 ERS的影响 |
| 3.12.1 ERS相关基因表达检测结果 |
| 3.12.2 ERS相关蛋白表达检测结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 动物模型建立及最佳缺血时间选择依据 |
| 4.2 ADSCs-exo对肝功能的影响 |
| 4.3 ADSCs-exo对肝脏显微结构与超微结构的影响 |
| 4.4 ADSCs-exo对肝脏氧化应激的影响 |
| 4.5 ADSCs-exo对肝脏炎症反应的影响 |
| 4.6 ADSCs-exo对肝细胞凋亡的影响 |
| 4.7 ADSCs-exo对肝脏线粒体功能的影响 |
| 4.8 ADSCs-exo对肝脏线粒体生物合成的影响 |
| 4.9 ADSCs-exo对肝脏线粒体动力学的影响 |
| 4.10 ADSCs-exo对肝脏ERS的影响 |
| 4.11 ADSCs-exo在肝损伤中应用前景 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
（6）人尿源干细胞外泌体对髓核细胞抗压力诱导凋亡作用及机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 1.主要试剂、仪器及材料 |
| 1.1. 主要试剂 |
| 1.2. 主要仪器 |
| 1.3. 主要细胞培养基的配制 |
| 2.主要实验方法 |
| 2.1. 原代NPCs及 USCs的提取培养 |
| 2.2. USCs的鉴定 |
| 2.3. USCs-exos提取及鉴定 |
| 2.4. NPCs对 USCs-exos摄取实验 |
| 2.5. 气压加压模型的构建及实验分组 |
| 2.6. 定量实时聚合酶链反应(q RT-PCR)对有关基因测定 |
| 2.7. Western blot检测相关蛋白的表达 |
| 2.8. 脱氧核苷酸转移酶d UTP缺口末端标记(TUNEL)染色 |
| 2.9. 统计学分析 |
| 结果 |
| 1.USCs-exos的鉴定和NPCs对其的摄取 |
| 2.压力培养后NPCs中 ER应激标志物的表达 |
| 3.USCs-exos降低压力诱导的ER应激并改善NPCs的凋亡 |
| 4.在压力培养条件下USCs-exos抑制在NPCs中由ER应激引起的UPR激活 |
| 5.USCs-exos通过AKT和 ERK通路抑制压力诱导的ER应激相关的细胞凋亡 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 干细胞外泌体治疗椎间盘退变的研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 攻读学位期间研究成果 |
| 缩略词表 |
| 致谢 |
（7）EFEMP1与IZUMO1的相互作用及对受精的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略说明 |
| 第一章 EFEMP1 的研究进展 |
| 1 Fibulin家族概述 |
| 2 Fibulin家族成员概述 |
| 2.1 长Fibulin亚类 |
| 2.1.1 Fibulin-1 |
| 2.1.2 Fibulin-2 |
| 2.1.3 Fibulin-6和Fibulin-8 |
| 2.2 短Fibulin亚类 |
| 2.2.1 Fibulin-3 |
| 2.2.2 Fibulin-4 |
| 2.2.3 Fibulin-5 |
| 2.2.4 Fibulin-7 |
| 3 EFEMP1 的基本特性 |
| 3.1 EFEMP1 的结构特征 |
| 3.2 EFEMP1 的表达模式 |
| 3.3 EFEMP1 参与的蛋白质相互作用 |
| 3.3.1 EFEMP1与PDIA3 的相互作用 |
| 3.3.2 EFEMP1与TIMP-3 的相互作用 |
| 3.3.3 EFEMP1与DA41 的相互作用 |
| 3.3.4 EFEMP1 与原弹性蛋白的相互作用 |
| 3.3.5 EFEMP1与ECM1 的相互作用 |
| 3.4 efemp1 基因敲除小鼠模型 |
| 3.4.1 efemp1 基因敲除小鼠的筋膜组织异常 |
| 3.4.2 efemp1 基因敲除小鼠的角膜和Bruch膜异常 |
| 3.4.3 efemp1 基因敲除小鼠嗅觉传导通路的修复功能异常 |
| 3.5 EFEMP1 相关的人类疾病 |
| 3.5.1 腹股沟疝 |
| 3.5.2 Doyne蜂窝状视网膜营养不良 |
| 3.5.3 癌症 |
| 3.6 EFEMP1 在生殖中的作用 |
| 第二章 EFEMP1与IZUMO1 的相互作用及对受精的影响 |
| 1 引言 |
| 2 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验菌种与细胞 |
| 2.1.3 质粒载体 |
| 2.1.4 实验仪器 |
| 2.1.5 实验试剂 |
| 2.1.6 主要溶液配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 大鼠睾丸总RNA的提取 |
| 2.2.2 大鼠睾丸组织cDNA的合成 |
| 2.2.3 大鼠睾丸组织cDNA的检测 |
| 2.2.4 大鼠efemp1 CDS全长的克隆 |
| 2.2.4.1 克隆引物的设计和合成 |
| 2.2.4.2 efemp1 CDS全长克隆 |
| 2.2.4.3 efemp1-T重组载体的构建与鉴定 |
| 2.2.4.4 重组质粒测序结果分析 |
| 2.2.5 酵母双杂实验 |
| 2.2.5.1 efemp1 酵母重组载体亚克隆引物的设计与合成 |
| 2.2.5.2 大鼠efemp1 目的片段的扩增与过渡载体的构建 |
| 2.2.5.3 pGAD-efemp1 重组载体的构建与鉴定 |
| 2.2.5.4 醋酸锂法制备酵母感受态细胞 |
| 2.2.5.5 重组载体转化酵母感受态细胞 |
| 2.2.5.6 酵母双杂交 |
| 2.2.6 免疫共沉淀实验 |
| 2.2.6.1 efemp1 真核重组载体亚克隆引物的设计与合成 |
| 2.2.6.2 pCMV-Flag-efemp1 重组载体的构建与鉴定 |
| 2.2.6.3 293 T细胞的培养 |
| 2.2.6.4 细胞共转染 |
| 2.2.6.5 磁珠法免疫沉淀转染细胞总蛋白 |
| 2.2.7 大鼠EFEMP1 的原核表达纯化及多克隆抗体制备 |
| 2.2.7.1 efemp1 原核重组载体亚克隆引物的设计与合成 |
| 2.2.7.2 pET-28a-efemp1 原核表达载体的构建与鉴定 |
| 2.2.7.3 EFEMP1-HIS融合蛋白的诱导表达 |
| 2.2.7.4 EFEMP1-HIS融合蛋白的SDS-PAGE检测 |
| 2.2.7.5 EFEMP1-HIS融合蛋白的Western blot检测 |
| 2.2.7.6 EFEMP1-HIS融合蛋白的纯化与检测 |
| 2.2.7.7 Bradford法测定纯化后EFEMP1-HIS融合蛋白的浓度 |
| 2.2.7.8 EFEMP1 抗体的制备与检测 |
| 2.2.7.9 大鼠和小鼠肺组织总蛋白对自制多克隆抗体的特异性检测 |
| 2.2.8 间接免疫荧光技术检测EFEMP1 的定位及与IZUMO1 的共定位 |
| 2.2.8.1 EFEMP1 在小鼠睾丸和卵巢中的定位 |
| 2.2.8.2 EFEMP1 在顶体反应前后大鼠精子和小鼠精子中的定位 |
| 2.2.8.3 EFEMP1和IZUMO1 在顶体反应前后大鼠精子和小鼠精子中的共定位 |
| 2.2.8.4 EFEMP1 在小鼠MII期卵母细胞中的定位 |
| 2.2.9 EFEMP1 抗体处理后小鼠精卵的体外授精观察 |
| 3 结果 |
| 3.1 大鼠efemp1的CDS序列克隆 |
| 3.1.1 大鼠睾丸组织cDNA合成产物的检测 |
| 3.1.2 大鼠efemp1 cDNA序列的克隆 |
| 3.1.3 重组载体efemp1-T的双酶切鉴定 |
| 3.2 酵母双杂交实验 |
| 3.2.1 pGAD-efemp1 重组载体的构建与鉴定 |
| 3.2.2 pGAD-efemp1 重组载体转化酵母感受态细胞的菌落PCR鉴定 |
| 3.2.3 酵母双杂交 |
| 3.2.4 营养缺陷培养基上双杂交酵母的生长状况 |
| 3.3 免疫共沉淀鉴定EFEMP1与IZUMO1 的相互作用 |
| 3.3.1 pCMV-Flag-efemp1 重组载体的构建与鉴定 |
| 3.3.2 转染后293 T细胞总蛋白的Western blot检测 |
| 3.3.3 磁珠法免疫沉淀转染细胞总蛋白 |
| 3.4 大鼠EFEMP1 的原核表达纯化及多克隆抗体制备 |
| 3.4.1 pET-28a-efemp1 重组载体的构建与鉴定 |
| 3.4.2 EFEMP1-HIS融合蛋白的诱导表达与鉴定 |
| 3.4.3 EFEMP1-HIS融合蛋白的纯化与检测 |
| 3.4.4 Bradford法测定纯化后EFEMP1-HIS融合蛋白的浓度 |
| 3.4.5 EFEMP1 抗体的制备与检测 |
| 3.4.6 大鼠和小鼠肺组织总蛋白对自制多克隆抗体的特异性检测 |
| 3.5 间接免疫荧光技术检测EFEMP1 的定位及与IZUMO1 的共定位 |
| 3.5.1 EFEMP1 在小鼠睾丸和卵巢中的定位 |
| 3.5.2 EFEMP1 在顶体反应前后大鼠和小鼠精子中的定位 |
| 3.5.3 EFEMP1和IZUMO1 在顶体反应前后大鼠和小鼠精子中的共定位 |
| 3.5.4 EEFMP1 在小鼠MII期卵母细胞中的定位 |
| 3.6 EFEMP1 抗体处理后小鼠精卵的体外授精观察 |
| 4 讨论 |
| 4.1 EFEMP1与IZUMO1 的相互作用 |
| 4.2 EFEMP1 在生殖细胞的定位及其与IZUMO1 的共定位 |
| 4.3 EFEMP1 对受精的影响 |
| 5 小结和创新点 |
| 5.1 小结 |
| 5.2 创新点 |
| 参考文献 |
| 附录1 |
| 致谢 |
| 攻读硕士期间参与的科研项目和发表的论文 |
（8）卵巢脱细胞外基质对物理性损伤卵巢修复的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 第一章 综述 |
| 1.1 细胞外基质成分及功能 |
| 1.1.1 ECM |
| 1.1.2 胶原蛋白 |
| 1.1.3 弹性蛋白 |
| 1.1.4 纤连蛋白 |
| 1.1.5 层黏连蛋白 |
| 1.1.6 透明质酸 |
| 1.2 伤口愈合 |
| 1.3 纤维化 |
| 1.3.1 纤维化基本概念介绍 |
| 1.3.2 不同组织的纤维化 |
| 1.3.2.1 皮肤纤维化 |
| 1.3.2.2 心脏组织纤维化 |
| 1.3.2.3 肺组织纤维化 |
| 1.3.2.4 肝组织纤维化 |
| 1.3.2.5 卵巢纤维化 |
| 1.4 巨噬细胞 |
| 1.4.1 巨噬细胞 |
| 1.4.2 细胞因子和表面抗原 |
| 1.4.3 不同组织中的巨噬细胞 |
| 1.4.3.1 大脑中的巨噬细胞 |
| 1.4.3.2 心脏中的巨噬细胞 |
| 1.4.3.3 肺中的巨噬细胞 |
| 1.4.3.4 肝脏中的巨噬细胞 |
| 1.4.3.5 卵巢中的巨噬细胞 |
| 1.4.4 巨噬细胞在组织再生中的作用 |
| 1.4.4.1 组织再生中M1/ M2 型巨噬细胞 |
| 1.4.4.2 骨骼肌损伤反应中的M1/M2 范式 |
| 1.4.4.3 皮肤伤口愈合过程中的M1/M2 范式 |
| 1.4.4.4 中枢神经系统损伤反应中的M1/ M2 范式 |
| 1.5 组织工程材料与组织修复 |
| 1.5.1 组织工程概念 |
| 1.5.2 组织工程材料介绍 |
| 1.5.2.1 水凝胶 |
| 1.5.2.2 纳米纤维 |
| 1.5.2.3 生物涂层 |
| 1.5.2.4 导电支架 |
| 1.5.2.5 生物3D打印 |
| 1.5.2.6 脱细胞细胞外基质材料(DECM) |
| 1.6 DECM组织在再生医学中的最新研究 |
| 1.6.1 肾脏DECM |
| 1.6.2 肝脏DECM |
| 1.6.3 肺DECM |
| 1.6.4 心脏DECM |
| 1.6.5 卵巢DECM |
| 1.7 本论文创新点 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.1.3 实验试剂 |
| 2.1.4 溶液配置 |
| 2.1.4.1 0.2%SDS(w/v)洗涤剂的配制 |
| 2.1.4.2 10×PBS的配制 |
| 2.1.4.3 Carazzi氏苏木素(1911)的配制 |
| 2.1.4.4 酸性伊红的配制 |
| 2.1.4.5 10%天狼星红饱和苦味酸染液的配制 |
| 2.1.4.6 1%盐酸乙醇 |
| 2.1.4.7 麻醉剂的配制 |
| 2.1.4.8 10%福尔马林生理盐水 |
| 2.1.4.9 柠檬酸钠抗原修复液的配制 |
| 2.1.4.10 FACS缓冲液 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 卵巢ECM的制备 |
| 2.2.2 小鼠手术操作 |
| 2.2.2.1 实验组小鼠卵巢部分切除和卵巢ECM原位移植 |
| 2.2.2.2 对照组小鼠原位损伤 |
| 2.2.3 生殖周期测定 |
| 2.2.4 组织的回收、固定、包埋与切片 |
| 2.2.5 H&E染色 |
| 2.2.6 PSR胶原染色以及评估方法 |
| 2.2.7 Masson三色染色方法 |
| 2.2.8 免疫组化 |
| 2.2.9 小鼠生育力的检测 |
| 2.2.10 卵泡计数 |
| 2.2.11 RNA提取与q PCR |
| 2.2.12 腹膜巨噬细胞提取 |
| 2.2.13 流式细胞术 |
| 2.2.14 α-SMA比例分析方法 |
| 2.2.15 数据分析 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 DECM减少卵巢物理损伤对小鼠生殖的负面影响 |
| 3.1.1 DECM的分析结果 |
| 3.1.2 DECM移植可以维持卵巢损伤小鼠康复期动情周期性稳定 |
| 3.1.3 DECM保护物理损伤卵巢的生殖力 |
| 3.2 DECM促进物理损伤卵巢的康复 |
| 3.2.1 DECM对物理损伤卵巢的重量的影响恢复 |
| 3.2.2 DECM保护物理损伤卵巢的卵泡数量 |
| 3.2.3 DECM降低了物理损伤卵巢的纤维化水平 |
| 3.3 DECM促进物理损伤卵巢恢复机制的探究 |
| 3.3.1 DECM抑制物理损伤卵巢颗粒细胞的凋亡 |
| 3.3.2 DECM通过调控成纤维细胞加速物理损伤卵巢康复 |
| 3.3.3 DECM通过募集巨噬细胞并调控其表型来影响卵巢修复进程 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 1.卵巢生殖力差异性分析 |
| 2.卵巢重量差异性分析 |
| 3.卵泡计数差异性分析 |
| 4.纤维化差异性分析 |
| 5.颗粒细胞凋亡率差异性分析 |
| 6.α-SMA阳性占比差异性分析 |
| 7.巨噬细胞比例差异性分析 |
| 8.M1 型巨噬细胞占比差异性分析 |
| 9.M2 型巨噬细胞占比差异性分析 |
| 10.IL1β差异性分析 |
| 11.IL10 差异性分析 |
| 12.IL6 差异性分析 |
| 13.CCL5 差异性分析 |
| 14.CCL2 差异性分析 |
| 致谢 |
（9）人羊膜来源上皮细胞调节主动脉内皮细胞血管生成及其分子机制的探究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分:人羊膜来源上皮细胞原代提取、条件培养液浓缩物的制备及应用质谱鉴定结果预测人羊膜上皮细胞旁分泌因子及相关的信号通路 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 人羊膜来源上皮细胞原代提取及鉴定 |
| 2.2.2 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 人羊膜来源上皮细胞的原代提取及培养 |
| 3.2 人羊膜来源上皮细胞的鉴定 |
| 3.3 质谱鉴定结果 |
| 3.3.1 质谱鉴定合并Uniprot数据库搜索结果 |
| 3.3.2 血管生成相关蛋白的筛选 |
| 3.4 GO注释及富集分析 |
| 3.4.1 按生物学功能分类 |
| 3.4.2 按分子成分分类 |
| 3.4.3 按分子功能分类 |
| 3.5 KEGG信号通路分析 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分:不同浓度的人羊膜来源上皮细胞条件培养液对主动脉内皮细胞功能的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 人主动脉内皮细胞培养 |
| 2.2.2 条件培养液(Conditioned medium,CdM)的收集及浓缩物的制作 |
| 2.2.3 实验分组方法 |
| 2.2.4 不同浓度hAEC-CdM对主动脉内皮细胞增殖能力的影响 |
| 2.2.5 不同浓度hAEC-CdM对主动脉内皮细胞迁移能力的影响 |
| 2.2.6 不同浓度hAEC-CdM对主动脉内皮细胞血管生成能力的影响 |
| 2.2.7 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 hAEC-CdM促进主动脉内皮细胞增殖 |
| 3.2 hAEC-CdM促进主动脉内皮细胞迁移 |
| 3.3 hAEC-CdM促进主动脉内皮细胞的血管生成能力 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分:人羊膜来源上皮细胞条件培养液调节主动脉内皮细胞血管生成的分子机制探究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 条件培养液的收集及冻干粉的制作 |
| 2.2.2 人主动脉内皮细胞的培养 |
| 2.2.3 实验分组方法 |
| 2.2.4 Western blot |
| 2.2.5 加入抑制剂的血管生成实验 |
| 2.2.6 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 加入不同浓度hAEC-CdM刺激后的western blot结果 |
| 3.1.1 加入不同浓度hAEC-CdM刺激后ALK5和Smad3的western blot结果 |
| 3.1.2 加入不同浓度hAEC-CdM刺激后ALK1和Smad5的western blot结果 |
| 3.2 加入抑制剂后的western blot结果 |
| 3.2.1 加入SB431542后p-Smad3及其下游相关蛋白的western blot结果 |
| 3.2.2 加入K02288后p-Smad5及其下游相关蛋白的western blot结果 |
| 3.3 加入抑制剂后的血管生成实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究的创新性自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 血管再生研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）hESC衍生和组织来源间充质干细胞慢病毒转导GFP基因的特性分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 pLVX-IRES-Puro-GFP慢病毒载体的构建及转导hESC-MSC、hADSC、hUC-MSC |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 pLVX-IRES-Puro-GFP慢病毒的包装 |
| 2.2 慢病毒转导hESC-MSC、hADSC、hUC-MSC的情况 |
| 3 讨论 |
| 3.1 pLVX-IRES-Puro-GFP慢病毒载体的构建 |
| 3.2 慢病毒转导hESC-MSC、hADSC、hUC-MSC的转导效率 |
| 4 结论 |
| 第二部分 GFP+MSCs细胞系的建立及培养与传代 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 GFP+MSCs的形态观察和GFP表达情况 |
| 2.2 GFP+MSCs的培养和传代 |
| 3 讨论 |
| 3.1 GFP+MSCs细胞系的建立 |
| 3.2 GFP+MSCs的传代和培养 |
| 4 结论 |
| 第三部分 hESC-MSC、hADSC、hUC-MSC标记GFP基因前后特性分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 MSCs标记GFP基因前后增殖力比较 |
| 2.2 MSCs标记GFP基因前后体外诱导分化情况 |
| 2.3 MSCs标记GFP基因前后细胞表型鉴定 |
| 3 讨论 |
| 3.1 MSCs标记GFP基因前后增殖力比较 |
| 3.2 MSCs标记GFP基因前后体外诱导分化能力评估 |
| 3.3 MSCs标记GFP基因前后细胞表型的表达情况 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 荧光蛋白法标记在间充质干细胞中的应用进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
四、人胎盘提取物对大鼠伤口愈合的作用(英文)（论文参考文献）
- [1]组织工程皮肤的研究热点及应用价值[J]. 林苗远,李豫皖,刘毅,陈贝,张莉. 中国组织工程研究, 2022(01)
- [2]分析外治法在慢性创面愈合中的应用[J]. 宋潇逸,程亮. 世界复合医学, 2021(11)
- [3]人胎盘提取物药理作用研究进展[J]. 眭荣春,肖云,胡庭国,邓晓军,胡亚军. 海峡药学, 2021(08)
- [4]ADSCs-exo对大鼠肝I/R合并部分切除损伤保护作用的研究[D]. 张千振. 东北农业大学, 2021
- [5]hucMSC-exo不同移植途径对小鼠皮肤创面愈合的比较研究[D]. 王宏宇. 内蒙古医科大学, 2021
- [6]人尿源干细胞外泌体对髓核细胞抗压力诱导凋亡作用及机制的研究[D]. 苏炜良. 青岛大学, 2021
- [7]EFEMP1与IZUMO1的相互作用及对受精的影响[D]. 张文君. 内蒙古大学, 2021(12)
- [8]卵巢脱细胞外基质对物理性损伤卵巢修复的研究[D]. 胡祺柯. 内蒙古大学, 2021
- [9]人羊膜来源上皮细胞调节主动脉内皮细胞血管生成及其分子机制的探究[D]. 吴迪. 中国医科大学, 2021
- [10]hESC衍生和组织来源间充质干细胞慢病毒转导GFP基因的特性分析[D]. 刘云. 山西医科大学, 2021(01)