一、肿瘤坏死因子基因转染对人胆管癌细胞生长的影响（论文文献综述）
季锡清[1]（2009）在《靶向siRNA阻断NF-κB信号通路对胆管癌增殖和侵袭影响实验研究》文中进行了进一步梳理胆管癌早期诊断困难以及其自身临床病理特征,癌细胞容易沿血管及神经鞘浸润扩散,手术虽然是唯一可能获得治愈的手段,但大部分根治手术切除率低术后易复发,且放化疗无助于生存率的提高,寻找确切有效的胆管癌治疗手段具有重要的现实意义。胆管癌发病的高危因素共同病理特征是胆道的慢性炎症。NF-κB作为“炎癌链”的关键调控环节,在多种肿瘤细胞的增殖侵袭调控中发挥中枢性作用,为此本研究以NF-κBp65为潜在的抗肿瘤靶点且进行干预研究,以期阻断胆管癌发生发展进程,达到化学预防和治疗目的。以免疫组化及western blot法检测临床胆管癌石蜡及新鲜标本的NF-κBp65分布表达发现:肿瘤分级程度越低,侵袭性越明显,越伴有淋巴转移,NF-κBp65越趋向细胞核分布,COX-2及iNOS亦表达并与NF-κBp65呈现明显相关性。据此以NF-κBp65为靶点,T7RNA聚合酶体外转录体系设计合成三个靶向siRNA,以RT-PCR、western blot验证三个靶位点对NF-κBp65基因mRNA干扰效果均有效,应用其中之一靶位点siRNA体体内外验证阻断NF-κBp65表达对胆管癌影响效果并探讨了抗肿瘤可能机制。本文包括五部分内容:胆管癌组织中NF-κB表达与COX-2及iNOS蛋白表达的相关性;体外转录合成NF-κBp65靶向siRNA的构建及功能筛选;NF-κBp65靶向siRNA体外抑制胆管癌细胞研究;靶向NF-κB小干扰RNA抑制胆管癌细胞下游COX-2、iNOS基因表达作用;靶向NF-κB的siRNA对胆管癌裸鼠移植瘤影响作用。
韩鹏[2]（2009）在《胆管癌药物的筛选及作用机理的研究》文中提出胆管癌是一种难以治愈的恶性肿瘤。对于胆管癌的治疗，根治性手术是目前唯一有效的办法。但是，胆管癌的早期症状不明显、发现困难，一旦发现多数已进入晚期，很难通过手术方法切除，因此，寻找其他非手术方法治疗胆管癌就变得十分必要。目前临床应用的药物对胆管癌敏感性欠佳，而且存在明显毒副作用。因此，探索更敏感、有效的药物，提高胆管癌药物治疗的疗效就变得十分必要。本论文以体外培养的人胆管癌QBC939细胞为药物筛选模型，选用叶下珠、珠子草、冬青、白英、长春花、三尖杉六种药用植物提取物、淡水贝类河蚬提取物、天然产物化合物、缩氨基硫脲类化合物及常见化疗药物，应用MTT测定法，从天然和化学合成物质中筛选具有抗胆管癌效应的药物。结果表明：珠子草和叶下珠的乙酸乙酯和正丁醇提取物、白英的水提物、长春花总碱、河蚬乙酸乙酯提取物、槲皮素、鞣酸、2-氯苯甲醛缩氨基硫脲和2，4-二氯苯甲醛缩氨基硫脲、三苯氧胺等具有体外抗胆管癌细胞增殖的活性。与胆管癌临床中常用的化疗药物5-氟尿嘧啶和顺铂相比，三苯氧胺表现出了更强的抑制胆管癌细胞的作用。因此，本研究选择三苯氧胺（TAM）进行下一步的深入研究，探讨三苯氧胺体外抗胆管癌作用的机理。通过MTT法、细胞形态观察法、流式细胞术、DNA ladder等方法研究表明：TAM呈时间和剂量依赖性抑制胆管癌QBC939细胞的增殖、使细胞形态发生明显变化、使细胞周期阻滞于G0／G1期、且显着诱导细胞凋亡；通过Western blot等方法研究表明：TAM对Cyclin D1、ERα、C-Myc蛋白表达的抑制、Caspase-3／Caspase-9信号通路的激活、Bax和p53蛋白表达的上调，是TAM发挥抗胆管癌作用的部分机制。为了进一步的探讨TAM抗胆管癌作用的分子机制和药物作用靶点，我们首次应用蛋白质组学技术研究了三苯氧胺对人胆管癌QBC939细胞全蛋白表达谱的影响。最终成功鉴定出热休克蛋白、细胞骨架蛋白、膜联蛋白和代谢相关酶等差异表达的蛋白点。结合这些蛋白的功能，全面系统地分析了三苯氧胺抗胆管癌作用的可能的分子机制。为胆管癌的药物治疗提供了新的线索，为三苯氧胺在临床上应用于胆管癌的治疗提供了基础理论支持，也为三苯氧胺抗胆管癌作用新靶点的阐明提供了新的思路和线索。
巩鹏,王忠裕,赵作伟,谭广,王洪江,李冰[3]（2003）在《逆转录病毒介导人肿瘤坏死因子-α基因抑制胆管癌细胞的生长》文中指出[目的 ]研究逆转录病毒介导的人肿瘤坏死因子α（TNFα）基因转染对人胆管癌细胞生长的抑制作用。 [方法 ]构建逆转录病毒 -TNFα（pLNCX -TNFα）复合体 ,转染人胆管癌细胞得到稳定表达 ,通过聚合酶链式反应 （PCR）、流式细胞仪 （FCM ）、免疫组织化学等方法检测基因表达、细胞生长增殖和细胞凋亡等情况。 [结果 ]pLNCX -TNFα基因转染人胆管癌细胞后 ,pLNCX空质粒转染组、pLNCX -TNFα基因转染组的细胞均能扩增出 70 8bp的基因片断 ,而未转染组则无 ;pLNCX -TNFα基因转染组的细胞克隆抑制率为 6 4% ,与对照组和 pLNCX空质粒转染组相比 ,差异性非常显着 （P <0 .0 1 ） ;转染的人胆管癌细胞G1期比例从 2 9.0 7%增加到 5 4.2 4 % ,G2 -M期和S期比例分别从 5 2 .0 3%下降到 2 .0 2 % ,1 8.32 %下降到 1 0 .34% ;凋亡细胞数从 5 .83%增加到34.76 %。[结论 ]TNFα基因通过诱导胆管癌细胞发生凋亡并导致其发生G1期阻滞抑制胆管癌细胞的生长。
冷怀明[4]（2002）在《《第三军医大学学报》2002年第24卷主题词索引》文中研究说明
崔平[5]（2005）在《PTEN基因联合奥沙利铂对胆管癌细胞生长抑制的研究》文中提出目的 探讨利用脂质体介导的转基因技术将抑癌基因PTEN转入人胆管癌细胞,联合化疗药物奥沙利铂（L-OHP）,分别进行人胆管癌细胞（QBC939）体外培养和体内接种生长、观察、分析该基因对胆管癌细胞生长的抑制情况,探索人类胆管癌的生物治疗的可行性和方法。 方法 1.将携带PTEN基因的真核表达载体pBP-PTEN和不含该基因的空载体pBP-puro转化DH5α大肠杆菌中并扩增,提取和纯化质粒DNA,酶切、电泳测定。用Lipofectamine将pBP-PTEN和pBP-puro质粒转染胆管癌QBC939细胞,嘌呤霉素抗性克隆浓度筛选,挑选阳性细胞克隆、扩增培养。转染细胞分为pBP-PTEN-QBC组、空质粒pBP-QBC组,未转染组QBC细胞为对照组。2.绘制细胞生长曲线及四甲基氮唑盐法酶联光吸试验（MTT）:观察转染PTEN基因前后QBC939细胞的生长情况,并绘制生长曲线。3.免疫组化:运用S-P免疫组化法,检测QBC939细胞转染前后PTEN阳性表达率。4.体外细胞侵袭力抑制试验:区带微孔膜分上下室的6孔培养板,上室分别按每孔细胞数为1×106/ml置入PTEN-QBC组（转染组）、QBC939对照组细胞悬液,并每组随机取两孔加入0.5%/L的奥沙利铂（L-OHP）,下室中加入含趋化因子的无血清培养基,侵袭至膜下表面的细胞行HE染色,选5个400倍显微镜视野,统计各组细胞数,并以侵袭细胞的相对数目表示细胞的侵袭力。5.流式细胞分析仪:取细胞数各为2×107/ml的上述4组细胞,进行流式细胞仪检测,观测各组细胞的周期G1到S期的变化和细胞凋亡情况。6.透射电镜扫描:取QBC939对照组、空质粒pBP-QBC和转基因组PTEN-QBC细胞,分别观察PTEN基因转染前后QBC939细胞的形态及细胞微结构的变化。7.体内肿瘤生长抑制试验:将24只6周龄雌性BALB/c裸鼠随机分为4组,每组6只,分别命名为QBC和PTEN各两组,QBC两组共12只裸鼠,每只右前肢皮下接种细胞数为1×107/ml的对数生长期QBC939细胞,PTEN组12只相同
巩鹏,王忠裕,王洪江,谭广,殷朔[6]（2004）在《肿瘤坏死因子基因转染对人胆管癌细胞生长的影响》文中研究表明目的 研究肿瘤坏死因子 α（TNF α）基因过表达对人胆管癌细胞生长的影响。方法构建逆转录病毒 TNF α（pLNCX TNF α）复合体 ,转染人胆管癌细胞得到稳定表达 ,通过聚合酶链式反应 （PCR）、流式细胞仪 （FCM ）、免疫组织化学等方法检测基因表达、细胞生长增殖和细胞凋亡等情况。结果 pLNCX TNF α基因转染人胆管癌细胞后 ,pLNCX空质粒转染组、pLNCX TNF α基因转染组的细胞均能扩增出 70 8bp的基因片断 ,而未转染组则无 ;pLNCX TNF α基因转染组的细胞克隆抑制率为 64 % ,与对照组和 pLNCX空质粒转染组相比 ,差异性非常显着 （P <0 .0 1） ;转染的人胆管癌细胞G1期比例从 2 9.0 7%增加到 5 4.2 4% ,G2 M期和S期比例分别从 5 2 .0 3 %下降到2 .0 2 %、18.3 2 %下降到 10 .3 4% ;凋亡细胞数从 5 .83 %增加到 3 4.76%。结论 TNF α基因通过诱导肿瘤细胞发生凋亡并导致其发生G1期阻滞在肿瘤基因治疗方面发挥作用。
巩鹏,王忠裕,王洪江,马哲夫,谭广,殷朔[7]（2002）在《PLNCX-TNFα基因转染对人胆管癌细胞生长的影响》文中研究指明目的 研究 L NCX- TNFα基因过表达对人胆管癌细胞的作用。方法 构建 L NCX- TNFα复合体 ,培养人胆管癌细胞 ,L NCX- TNFα转染人胆管癌细胞 ,得到稳定表达 ,通过聚合酶链式反应 （PCR）、流式细胞仪 （FCM）、免疫组织化学等方法检测基因表达、细胞生长增殖和细胞凋亡等情况。结果 重组体 L NCX- TNFα基因转染人胆管癌细胞后 ,能抑制细胞的生长和集落形成 ;流式细胞技术证实 ,L NCX- TNFα能诱导细胞发生凋亡并导致其发生 G1 期阻滞 ,G2 - M期和 S期比例明显下降 ,凋亡细胞数也明显增加。结论 TNFα基因通过诱导肿瘤细胞发生凋亡并导致其发生 G1 期阻滞在肿瘤基因治疗方面发挥作用。
乔京京[8]（2019）在《ROS1基因对胃癌细胞生物学行为的影响及其分子机制的研究》文中提出目的:在全世界范围内,胃癌发病率占恶性肿瘤总发病率的第4位,而死亡率却排在第3位的常见的恶性肿瘤之一。我国是胃癌大国,东南沿海地区是胃癌的高发地区。所以胃癌是严重影响我国国民健康的重大疾病。由于缺乏特异性症状,临床上很难早期发现,临床Ⅲ期、Ⅳ期患者占大多数。目前胃癌内科治疗手段有限,能进行根治性手术的患者比例小,化疗疗效欠佳,靶向治疗也只有曲妥珠单抗和阿帕替尼取得了肯定的临床疗效,但适用人群有限,还存在着治疗耐药问题。当今肿瘤治疗已进入精准医疗时代,需要找到新的治疗靶点,开发新的治疗药物。ROS1是一种是单体型受体酪氨酸激酶,广泛表达于人体肾、小脑、胃肠等多种组织。目前的研究发现在肺癌、卵巢癌、肉瘤、胆管细胞癌和炎性肌纤维母细胞瘤等组织中以基因重排方式激活,是一种癌基因。近年在非小细胞肺癌的临床研究中找到了针对ROS1基因重排的治疗药物克唑替尼。使这一基因成为恶性肿瘤精准治疗研究的重要靶点。已有国内外学者在胃癌临床组织标本中用FISH方法检测到ROS1基因重排,且确定ROS1基因重排与差的临床表型如低分化、淋巴结转移相关。因此虽然ROS1基因重排在胃癌中检出率不高,但已经开发出确定有效的靶向治疗药物,对ROS1在胃癌中的作用机制仍有必要进一步研究。ROS1基因以基因重排的融合基因方式出现,既往的研究主要集中在ROS1融合基因结构和检测方法及融合基因功能的研究方面,然而各融合基因功能并不完全相同。本研究仅以ROS1基因为研究对象,忽略其融合伙伴,并以胃癌细胞为研究对象,探讨ROS1基因本身对胃癌细胞生物学行为的影响和作用机制。为进一步研究以该基因为靶点的治疗提供基础研究数据。研究方法:首先,应用Western blot方法评估四种人胃癌细胞系BGC-823、MGC-803、SGC-7901、HGC-27癌细胞中ROS1蛋白表达量,选取其中表达量最高的两个细胞系为研究对象。构建ROS1基因干扰RNA质粒及无关序列质粒,其基因片段分别为ROS1 sh RNA:5’-GAGGAGACCTTCTTACTTAT-3’;NCsh RNA:5’-GTTCTCCGAACGTGTCACGT-3’。经测序鉴定证实质粒构建成功。用构建成功的两种质粒分别转染两种选定的胃癌细胞系,培养24小时后应用含G418的培养基进行筛选培养。2周后得到稳定转染目的基因的胃癌细胞株。分别应用Real-time PCR方法和Western blot方法从mRNA水平和蛋白水平两个方面进行鉴定,明确基因敲减率,敲减率在70%以上时进行后续实验。第二步,应用MTT法测定胃癌细胞生长曲线,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,明确ROS1基因敲减后胃癌细胞生长、增殖及凋亡能力的变化;用划痕愈合实验及Transwell小室实验检测胃癌细胞迁移和侵袭能力,明确ROS1基因敲减后胃癌细胞侵袭转移能力的变化。第三步,应用Western blot方法检测凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3,cleaved PARP,Bax,bcl-2蛋白表达情况,了解ROS1基因抑制细胞凋亡途径。Western blot方法检测细胞粘附蛋白E-cadherin,N-cadherin及细胞骨架相关蛋白Vimentin表达情况,明确ROS1基因是否参与胃癌细胞EMT过程。Western blot方法检测信号传导通路蛋白p-PI3K/PI3K,p-AKT/AKT蛋白表达情况,明确ROS1基因细胞内信号传导路径。Real-time PCR方法检测上皮间质转化相关基因Snail,Slug,Twist表达情况及MMP9基因表达情况,明确ROS1基因是否通过诱导肿瘤细胞形成EMT促进胃癌细胞侵袭转移。第四步,应用TCGA数据库分析ROS1在胃癌组织中的表达与临床病理因素的关系及其对预后的影响及ROS1基因扩增的情况。qRT-PCR检测ROS1在37例胃癌组织及配对正常胃粘膜中的表达,应用免疫组化方法检测126例胃癌组织切片中ROS1表达情况。结果:1、Western blot方法检测显示BGC-823细胞和SGC-7901细胞ROS1蛋白相对表达量较高,被选为进一步研究对象。转染含ROS1干扰RNA质粒和无关序列质粒之后,得到稳定转染两个目的基因的胃癌细胞株并成功体外传代培养。经Real-time PCR方法和Western blot方法从mRNA表达和蛋白表达两个方面进行鉴定,确认两个稳转胃癌细胞株ROS1基因敲减率均达75%以上,证实ROS1基因稳定敲减的胃癌细胞株构建成功。2、MTT实验发现ROS1基因敲减后的BGC-823-sh ROS1细胞和SGC-7901-sh ROS1分别较各自对照组细胞生长速度减慢,生长率较BGC-823细胞及SGC-7901细胞分别下降了37%和30%（P<0.01）。克隆形成实验显示BGC-823-sh ROS1细胞和SGC-7901-sh ROS1细胞分别较各自的对照组细胞克隆形成数明显减少,克隆形成率分别为19.5%±1.8%vs 37.33%±2.25%、36.17%±1.76%及16.00%±2.00%vs 33.50%±1.50%、31.17%±2.52%（P<0.01）。流式细胞仪检测细胞周期实验显示与BGC-823细胞和SGC-7901细胞比较,BGC-823-sh ROS1细胞和SGC-7901-shROS1细胞G0/G1期细胞比例增高（55.77%±2.70%vs 61.08%±0.87%;55.33%±0.88%vs 67.43%±0.65%）,而S期（20.73%±1.83%vs 12.96%±0.20%;18.98%±074%vs 15.78%±0.27%）和G2期（23.25%±0.61%;24.55%±3.15%vs13.98±0.59）细胞比例明显减少,均有统计学差异（P<0.01）。流式细胞仪检测凋亡发现与BGC-823细胞和SGC-7901细胞比较,BGC-823-sh ROS1细胞和SGC-7901-sh ROS1细胞早期凋亡（2.99%±0.11%vs 15.94%±0.85%;5.78%±0.42%vs16.19%±1.01%）与晚期凋亡（0.42%±0.03%vs 0.42%±0.03%;1.18%±0.09%vs9.13±0.62%）比例明显增高（P<0.01）。Transwell侵袭实验结果显示与BGC-823细胞和SGC-7901细胞比较,BGC-823-sh ROS1细胞和SGC-7901-sh ROS1细胞穿过微孔膜由上室进入下室的细胞数明显减少（21.4±2.07 vs 43.2±4.15;20.60±2.30 vs61.4±5.18）,差异显着（P<0.01）。3、进一步应用Western blot方法检测凋亡相关蛋白,发现与BGC-823细胞和SGC-7901细胞比较,BGC-823-sh ROS1细胞和SGC-7901-sh ROS1细胞cleaved-caspase-3,cleaved PARP蛋白相对表达量明显上升,分别为:3.71±0.27,1.58±0.04及1.49±0.03,1.91±0.08;Bax蛋白相对表达量（1.43±0.13,1.52±0.07）明显上升,bcl-2蛋白相对表达量（0.50±0.02,0.34±0.02）明显下降,P值均<0.01。而细胞粘附蛋白和骨架相关蛋白的检测结果显示,BGC-823-sh ROS1细胞和SGC-7901-sh ROS1细胞E-cadherin表达量明显增加（2.14±0.13,2.52±0.04）,N-cadherin蛋白（0.48±0.04,0.38±0.02）和Vimentin蛋白（0.52±0.04,0.49±0.07）的相对表达量则明显减少,P值均<0.01。在信号传导通路蛋白方面,BGC-823-sh ROS1细胞和SGC-7901-sh ROS1细胞总PI3K蛋白和总AKT蛋白表达量与BGC-823细胞和SGC-7901细胞无统计学差异（P>0.05）;但磷酸化的p-PI3K（0.33±0.04,0.42±0.02）和p-AKT蛋白（0.51±0.01,0.54±0.01）相对表达量明显下降,有统计学差异（P<0.01）。（以上结果均分别以BGC-823细胞和SGC-7901细胞的相应蛋白表达量为“1”计算）。4、用Real-time PCR方法检测胃癌细胞诱导EMT相关基因的结果显示,BGC-823-sh ROS1细胞和SGC-7901-sh ROS1细胞中Twist,Snail,Slug三个基因表达均较BGC-823细胞和SGC-7901细胞明显下降,但不同细胞下降程度不一样。BGC-823-sh ROS1细胞中三个基因相对表达量值分别为:Twist（1.59vs2.36）,Snail（0.43 vs 0.76）,Slug（1.40vs2.06）。SGC-7901-sh ROS1细胞中三个基因相对表达量值分别为:Twist（0.84vs1.00）,Snail（0.84vs1.00）,Slug（0.57vs1.00）。以上结果均有统计学差异,P<0.01。5、用Real-time PCR方法检测胃癌细胞转移相关的MMP9基因表达情况结果为BGC-823-sh ROS1细胞和SGC-7901-sh ROS1细胞中MMP9基因表达量较BGC-823细胞和SGC-7901细胞明显下降,分别为0.97vs 1.29及0.43vs1.00,差异有统计学意义,P<0.01。6、TCGA数据库显示胃癌组织中ROS1 mRNA的表达显着高于癌旁正常组织中的表达（P<0.0001）。ROS1高表达与更高的组织学分级（P=0.014）、更高的T分期、N分期、M分期及TNM分期相关（P均<0.0001）。ROS1高表达预后与其低表达患者比较,预后不良。393例胃癌患者中仅有2例患者检测出ROS1基因扩增。7、qRT-PCR结果显示ROS1在37例胃癌患者中的mRNA表达显着高于其在正常胃粘膜中的表达。8、免疫组化结果显示在126例胃癌组织中仅检测到5例ROS1蛋白高表达,ROS1高表达患者的共同特征为年龄均在60岁以上,均有淋巴结转移,且为Ⅱ期以上的进展期胃癌。结论:1、人胃癌BGC-823和SGC-7901细胞中存在ROS1基因高表达,ROS1基因被敲除后胃癌细胞增殖、侵袭与转移能力被抑制,细胞凋亡显着增加。2、ROS1基因沉默后,胃癌细胞bcl-2/bax比例失衡,激活caspase-PARP途径,导致细胞凋亡增加。ROS1基因通过调节bcl-2/bax比例,抑制caspase-PARP途径活化,抑制胃癌细胞凋亡,促进其增殖。3、ROS1基因通过激活细胞内Twist,Snail,Slug基因,直接或间接下调胃癌细胞E-cadherin表达,促使胃癌细胞发生EMT,促使胃癌MMP9表达增加,增强其侵袭、迁移能力。4、ROS1基因在胃癌内通过激活PI3K/AKT信号传导通路启动肿瘤增殖信号、抑制细胞凋亡,促进胃癌细胞发生EMT。5、TCGA数据资料显示胃癌组织中ROS1mRNA表达显着高于癌旁正常组织,胃癌组织中ROS1mRNA表达与组织学分级、T分期、N分期、M分期、TNM分期相关,胃癌组织中ROS1mRNA高表达与患者不良预后相关。胃癌患者中ROS1基因扩增较为罕见。与正常胃粘膜组织相比,ROS1mRNA在胃癌组织的表达显着升高。6、免疫组化检测结果显示胃癌组织中ROS1蛋白表达为3.97%。
朱健[9]（2019）在《七叶素通过ROS/p38 MAPK信号通路诱导人骨肉瘤细胞凋亡和自噬的机制研究》文中研究说明骨肉瘤是青少年中最恶性的肿瘤之一,并且骨肉瘤通常会产生多药耐药性。七叶素是从欧洲七叶树（七叶树）分离的三萜皂苷的天然混合物,已经在体外和体内显示出有效的抗肿瘤潜力。在本研究中,我们发现七叶素能够以剂量和时间依赖的方式抑制骨肉瘤的增殖。另外,通过检测凋亡蛋白酶相关蛋白的表达增加和凋亡小体的形成证明了七叶素能够诱导骨肉瘤细胞的凋亡。七叶素还诱导骨肉瘤细胞的自噬,增加LC3,ATG5,ATG12和Beclin蛋白的表达水平以及促进骨肉瘤细胞中自噬体的形成。另外我们发现通过抑制七叶素诱导的自噬能够促进细胞凋亡。此外,七叶素能够激活p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和增加活性氧（ROS）的产生。p38 MAPK抑制剂可部分减弱七叶素引发的自噬和细胞凋亡,但ROS清除剂显示出更强的抑制作用。最后,在裸小鼠骨肉瘤原位模型中证明了七叶素对骨肉瘤的治疗效果。总之,七叶素通过激活ROS/p38 MAPK信号通路诱导自噬和细胞凋亡来抑制骨肉瘤,这些发现提示七叶素可能是治疗骨肉瘤的一种有效治疗方法。
张秀华[10]（2018）在《龙葵提取物澳洲茄边碱对人胆管癌细胞生长及转移的影响》文中提出背景:胆管癌约占消化系统肿瘤中的3%,近年发病率呈上升趋势,其死亡率高,5年生存率低。由于胆管癌早期症状不明显,发现多已是晚期,手术治疗效果欠佳,且缺乏有效化疗方案,故从中医中药角度寻求新的治疗方法和药物引起学者们的广泛关注。龙葵为茄科茄属植物（SolanumnigrumL）,具有清解热毒、消肿散结、消炎利尿的传统中医功效。近年来龙葵对恶性肿瘤的治疗作用引起了人们的关注,被列为十大抗肿瘤中草药之一。不少研究表明龙葵中含有多种具有抗肿瘤作用的活性成分,其中澳洲茄边碱作为龙葵的主要活性成分,抗癌作用得到了肯定。但其发挥的作用机制尚不十分清楚。本课题将从细胞生物学角度探讨澳洲茄边碱对人胆管癌细胞的促进凋亡、抑制增殖和转移作用,以期解释龙葵抗胆管细胞癌的部分作用机制,并为临床应用提供理论及实验依据。目的:探讨龙葵提取物澳洲茄边碱对人胆管癌细胞的促进凋亡、抑制增殖和转移作用及其机制。方法:①采用0,2,4,6,8,10 μM浓度的澳洲茄边碱处理对数生长期人胆管癌细胞系QBC939细胞株后,用倒置光学显微镜观察细胞数目、细胞形态的变化;MTT法检测细胞增殖抑制率,选择最佳药物作用时间及药物浓度,探讨澳洲茄边碱对人胆管癌QBC939细胞增殖的影响;②采用上述浓度的澳洲茄边碱处理对数生长期人胆管癌细胞系QBC939后,采用流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率及凋亡分布情况,观察澳洲茄边碱对人胆管癌QBC939细胞凋亡的影响;③采用上述浓度的澳洲茄边碱处理对数生长期人胆管癌细胞系QBC939后,在JC-1染色细胞后用流式细胞术检测肿瘤细胞线粒体膜电位的变化情况;用Q-PCR检测8Bcl-2、Bcl-XL、Bax和XIAP凋亡基因的表达情况;用Western blot方法检测凋亡蛋白Bcl-2与Bax、Caspase-3、XIAP、RARP等蛋白的变化情况,探讨澳洲茄边碱诱导胆管癌QBC939细胞凋亡的作用机制;④采用上述浓度的澳洲茄边碱处理对数生长期人胆管癌细胞系QBC939后,划痕试验、Transwell检测细胞迁移及侵袭能力变化情况;Q-PCR及 Western blot 检测 EMT 相关蛋白 E-cadherin、N-cadherin、Vimentin 及 Snail 的 mRNA 及蛋白的表达变化,Western blot检测PI3K/AKT信号通路的表达变化,探讨澳洲茄边碱对人胆管癌QBC939细胞转移的影响及作用机制。结果:①细胞实验结果表明,澳洲茄边碱作用人胆管癌QBC939细胞后,细胞形态学观察,出现了细胞核皱缩,细胞形态不规则改变及出现凋亡小体等细胞凋亡的表现。MTT检测提示澳洲茄边碱对人胆管癌QBC939细胞具有明显的浓度依赖性抑制增殖作用,且其半抑制浓度（IC50）值为9.81μM;②流式细胞术AnnexinV-FITC和PI标记法对细胞凋亡比例的测定结果显示,澳洲茄边碱可促进人胆管癌QBC939细胞的凋亡,并呈明显的浓度依赖（尤其是浓度>6μM）,细胞早晚期凋亡率均升高,以早期凋亡为主;③用JC-1染色肿瘤细胞后,流式细胞术检测显示肿瘤细胞线粒体膜电位降低。应用Western blot实验显示抑制凋亡的代表基因Bcl-2表达下调,凋亡抑制蛋白XIAP和DNA损伤修复酶PARP表达下调,而Caspase3及Caspase7表达上调,说明细胞处于凋亡状态,而Bax促凋亡基因编码的Bax蛋白增加进一步说明细胞进入凋亡状态;④划痕及Transwell试验检测提示澳洲茄边碱可抑制人胆管癌QBC939细胞迁移及侵袭,进一步检测其机制提示澳洲茄边碱可抑制PI3K/AKT信号通路表达,下调转录因子Snail,促进E-cadherin的表达,抑制N-cadherin和Vimentin的表达。结论:①龙葵提取物澳洲茄边碱可以抑制人胆管癌QBC939细胞增殖,并通过降低肿瘤细胞线粒体膜电位、上调促凋亡蛋白的表达并下调抑凋亡蛋白的表达诱导肿瘤细胞凋亡;②龙葵提取物澳洲茄边碱可抑制人胆管癌QBC939细胞迁移及侵袭,其机制可能是通过抑制PI3K/AKT信号通路表达,下调转录因子Snail,促进E-cadherin的表达,抑制N-cadherin和Vimentin,从而阻断EMT过程来抑制胆管癌细胞转移和侵袭。③澳洲茄边碱能够抑制人胆管癌QBC939细胞生长及转移,提示龙葵提取物澳洲茄边碱可能是胆管癌治疗的有效药物之一。
二、肿瘤坏死因子基因转染对人胆管癌细胞生长的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、肿瘤坏死因子基因转染对人胆管癌细胞生长的影响（论文提纲范文）
（1）靶向siRNA阻断NF-κB信号通路对胆管癌增殖和侵袭影响实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 详细摘要 |
| 主要英文缩写 |
| 绪论 |
| 研究背景 |
| 课题总体设计 |
| 课题的主要内容 |
| 参考文献 |
| 第一部分 胆管癌组织NF-κB、COX-2 与iNOS 蛋白表达 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 体外转录合成NF-κBp65 靶向siRNA 及功能筛选 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 NF-κBp65 靶向siRNA 体外抑制胆管癌细胞研究 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 靶向NF-κB-siRNA 对胆管癌COX-2、iNOS 影响作用 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第五部分 靶向NF-κB-siRNA 对体内胆管癌裸鼠移植瘤影响 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 文献综述 |
| 靶向NF-κB 圈套策略的应用 |
| 综述参考文献 |
| 附件一 在读期间发表论文情况 |
| 附件二 查新证明 |
| 致谢 |
（2）胆管癌药物的筛选及作用机理的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 前言 |
| 1.1 胆管癌基础研究概况 |
| 1.1.1 胆管癌的分类 |
| 1.1.2 胆管癌的流行病学概况 |
| 1.1.3 胆管癌发生的高危因素 |
| 1.1.4 胆管癌发生的过程及分子生物学机制 |
| 1.1.5 胆管癌的临床症状及诊断 |
| 1.1.6 胆管癌的治疗 |
| 1.2 抗癌药物的筛选 |
| 1.2.1 药物筛选模型 |
| 1.2.2 抗癌药物的种类 |
| 1.2.3 抗癌药物作用的靶点 |
| 1.2.4 抗胆管癌药物研究现状 |
| 1.3 三苯氧胺在临床中的作用及作用机制 |
| 1.3.1 三苯氧胺在临床中的作用 |
| 1.3.2 三苯氧胺的作用机制 |
| 1.3.3 雌激素及其受体与胆管癌 |
| 1.4 蛋白质组学技术在胆管癌研究中的应用 |
| 1.5 本论文研究的内容和意义 |
| 2 实验试剂与仪器 |
| 2.1 主要材料和试剂 |
| 2.2 主要实验仪器 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 药用植物的提取 |
| 3.2 河蚬的提取 |
| 3.3 肿瘤细胞的培养 |
| 3.4 MTT法测定细胞增殖率 |
| 3.5 细胞形态的观察 |
| 3.5.1 普通光学显微镜下细胞形态的观察 |
| 3.5.2 荧光显微镜下细胞形态的观察 |
| 3.5.3 透射电镜下细胞超微结构的观察 |
| 3.6 PI单染流式细胞术检测细胞周期变化 |
| 3.7 DNA抽提及琼脂糖凝胶电泳 |
| 3.8 FITC-Annexin V/PI双染流式细胞术 |
| 3.9 Caspase-3活性的测定 |
| 3.10 细胞内活性氧ROS的测定 |
| 3.11 Western blot |
| 3.11.1 细胞的裂解 |
| 3.11.2 免疫印迹 |
| 3.12 蛋白质组学技术方法 |
| 3.12.1 QBC939细胞全蛋白样品制备 |
| 3.12.2 等点聚焦电泳 |
| 3.12.3 SDS-PAGE电泳 |
| 3.12.4 考马斯亮蓝G-250染色 |
| 3.12.5 硝酸银染色 |
| 3.12.6 凝胶扫描和图像处理 |
| 3.12.7 差异蛋白点的胶内酶切与质谱分析 |
| 4 结果 |
| 4.1 抗胆管癌药物的筛选 |
| 4.1.1 药用植物提取物对体外培养的胆管癌QBC939细胞的作用 |
| 4.1.2 淡水贝类河蚬提取物对QBC939细胞增殖及细胞周期的影响 |
| 4.1.3 天然产物化合物对QBC939细胞增殖的影响 |
| 4.1.4 缩氨基硫脲类化合物对QBC939细胞增殖的影响 |
| 4.1.5 化疗药物对QBC939细胞增殖及细胞周期的影响 |
| 4.2 TAM抗胆管癌作用机制的研究 |
| 4.2.1 TAM对胆管癌细胞抑制作用的时间和剂量效应 |
| 4.2.2 TAM对不同肿瘤细胞敏感性的比较 |
| 4.2.3 TAM对胆管癌QBC939细胞形态学的影响 |
| 4.2.4 TAM对胆管癌细胞周期分布及细胞周期蛋白Cyclin D1的影响 |
| 4.2.5 TAM诱导胆管癌细胞凋亡 |
| 4.2.6 TAM激活Caspase-9和Caspase-3 |
| 4.2.7 凋亡相关蛋白对TAM诱导的胆管癌细胞凋亡作用的调控作用 |
| 4.2.8 胆管癌细胞中ERα的表达及TAM作用后ERα表达的变化 |
| 4.2.9 TAM作用后QBC939细胞内活性氧的变化情况 |
| 4.2.10 TAM对QBC939细胞内PKCα蛋白表达的影响 |
| 4.2.11 TAM对QBC939细胞内C-Myc蛋白表达的影响 |
| 4.3 TAM作用后人胆管癌QBC939细胞全蛋白谱的差异表达变化 |
| 5 讨论 |
| 5.1 体外抗胆管癌药物的筛选 |
| 5.1.1 药用植物提取物对胆管癌细胞的影响 |
| 5.1.2 淡水贝类河蚬提取物对胆管癌细胞的影响 |
| 5.1.3 天然产物化合物对胆管癌细胞增殖的影响 |
| 5.1.4 缩氨基硫脲类化合物对胆管癌细胞增殖的影响 |
| 5.1.5 化疗药物对胆管癌细胞的影响 |
| 5.2 TAM体外抗胆管癌机制的研究 |
| 5.2.1 TAM对呈时间和剂量依赖性抑制QBC939细胞的增殖 |
| 5.2.2 胆管癌细胞较其他肿瘤细胞对TAM的作用更为敏感 |
| 5.2.3 TAM阻滞胆管癌细胞周期并诱导细胞凋亡 |
| 5.2.4 TAM下调胆管癌细胞中Cyclin D1蛋白的表达 |
| 5.2.5 TAM通过激活Caspase-9/Caspase-3诱导细胞凋亡 |
| 5.2.6 凋亡相关蛋白对TAM诱导的胆管癌细胞凋亡的调控 |
| 5.2.7 TAM能够抑制胆管癌QBC939细胞中ERα的表达 |
| 5.2.8 TAM诱导胆管癌细胞凋亡的其他非ER途径 |
| 5.3 利用蛋白质组学技术研究TAM抗胆管癌作用的可能分子机制 |
| 5.3.1 热休克蛋白 |
| 5.3.2 细胞骨架蛋白 |
| 5.3.3 代谢相关酶和蛋白 |
| 5.3.4 膜联蛋白 |
| 6 结论 |
| 7 参考文献 |
| 在学期间发表论文 |
| 致谢 |
（3）逆转录病毒介导人肿瘤坏死因子-α基因抑制胆管癌细胞的生长（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材 料 |
| 1.2 pLNCX-TNFα基因转染 |
| 1.3 PCR 对TNFα基因的整合进行鉴定 |
| 1.4 TNFα基因表达的Western分析胰酶-乙二胺四乙酸 (EDTA) 消化, 冰温下超 |
| 1.5 细胞生长增殖能力测定 |
| 1.6 流式细胞仪分析细胞周期及凋亡 |
| 2 结 果 |
| 2.1 pLNCX-TNFα基因转染 |
| 2.2 TNFα基因在细胞内整合和表达 |
| 2.3 pLNCX-TNFα基因转染对细胞克隆形成能力的影响 |
| 2.4 pLNCX-TNFα基因转染对细胞生长增殖能力的影响 |
| 2.5 pLNCX-TNFα基因转染对细胞周期及凋亡的影响 |
| 3 讨 论 |
（5）PTEN基因联合奥沙利铂对胆管癌细胞生长抑制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 引言 |
| 第一部分 脂质体介导PTEN基因对人胆管癌细胞(QBC939)转染的研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 PTEN基因转染后联合奥沙利铂对胆管癌细胞体外生长抑制的研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第三部分 PTEN基因转染后联合奥沙利铂对胆管癌细胞裸鼠体内生长抑制的研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 中文详细摘要 |
| 英文详细摘要 |
| 附录1 中英文缩略词表 |
| 附录2 主要溶液的配制 |
| 致谢 |
| 综述1 |
| 综述2 |
| 在读期间基本情况 |
（6）肿瘤坏死因子基因转染对人胆管癌细胞生长的影响（论文提纲范文）
| 材料和方法 |
| 1.材料: |
| 2.pLNCX-TNF-α基因转染: |
| 3.PCR对TNF-α基因的整合进行鉴定: |
| 4.TNF-α基因表达的Western分析: |
| 5.细胞生长增殖能力测定: |
| 6.流式细胞仪分析细胞周期及凋亡: |
| 结果 |
| 1.pLNCX-TNF-α基因转染: |
| 2.TNF-α基因在细胞内整合和表达: |
| 3.pLNCX-TNF-α基因转染对细胞克隆形成能力的影响: |
| 4.pLNCX-TNF-α基因转染对细胞生长增殖能力的影响: |
| 讨论 |
（7）PLNCX-TNFα基因转染对人胆管癌细胞生长的影响（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 2 方法 |
| 2.1 G418最小致死量试验 |
| 2.2 PLNCX-TNFα基因转染 |
| 2.3 TNFα基因转染的鉴定 |
| 2.4 TNFα基因表达的western-bloting分析 |
| 2.5 克隆形成实验 |
| 2.6 细胞生长增殖能力测定 |
| 2.7 流式细胞仪分析细胞周期及凋亡 |
| 3 结果 |
| 3.1 PLNCX-TNFα基因转染 |
| 3.2 TNFα基因在细胞内整合和表达 |
| 3.3 PLNCX-TNFα基因转染对细胞克隆形成能力的影响 |
| 3.4 PLNCX-TNFα基因转染对细胞生长增殖能力的影响 |
| 3.5 PLNCX-TNFα基因转染对人胆管癌细胞周期及凋亡的影响 |
| 4 讨论 |
（8）ROS1基因对胃癌细胞生物学行为的影响及其分子机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分 :ROS1基因稳定沉默胃癌细胞株的建立 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验细胞 |
| 2.1.2 质粒 |
| 2.1.3 PCR引物 |
| 2.1.4 主要实验仪器 |
| 2.1.5 主要实验试剂 |
| 2.1.6 主要溶液的配置 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 胃癌细胞培养 |
| 2.2.2 RNA干扰质粒的构建 |
| 2.2.3 ROS1 基因稳定沉默胃癌细胞的筛选和培养 |
| 2.2.4 Western blot鉴定胃癌细胞ROS1 蛋白的表达 |
| 2.2.5 Real-time PCR方法鉴定ROS1 基因敲减效率 |
| 2.3 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 ROS1 基因在胃癌细胞中的蛋白表达 |
| 3.2 成功建立ROS1 基因稳定沉默的胃癌细胞株 |
| 3.2.1 质粒构建及测序验证 |
| 3.2.2 ROS1 基因稳定沉默胃癌细胞株的建立 |
| 3.3 ROS1 基因敲减效率测定 |
| 3.3.1 应用Real-time PCR方法检测ROS1 基因敲减后胃癌细胞ROS1 mRNA表达减低 |
| 3.3.2 应用Western Blot方法检测ROS1 基因敲减后胃癌细胞ROS1 蛋白表达降低 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 :ROS1基因对胃癌细胞生物学行为的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 胃癌细胞 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 主要溶液配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 MTT法测定各组细胞生长曲线 |
| 2.2.2 克隆形成实验检测胃癌细胞成瘤能力 |
| 2.2.3 流式细胞仪检测细胞周期 |
| 2.2.4 流式细胞仪检测细胞凋亡 |
| 2.2.5 细胞划痕愈合实验检测胃癌细胞迁移能力 |
| 2.2.6 Transwell小室侵袭实验观察胃癌细胞侵袭能力 |
| 2.3 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 ROS1 基因沉默后胃癌细胞生长速度减慢 |
| 3.2 ROS1 基因沉默后胃癌细胞克隆形成数量减少 |
| 3.3 ROS1 基因沉默后细胞周期G1 期比例升高,S/G2 期比例下降 |
| 3.4 ROS1 基因沉默后胃癌细胞凋亡比例增高 |
| 3.5 ROS1 基因沉默后胃癌细胞划痕愈合率减慢 |
| 3.6 ROS1 基因沉默后胃癌细胞穿过小室微孔膜数量减少 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 :ROS1基因影响胃癌细胞生物学行为的分子机制 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 胃癌细胞株 |
| 2.1.2 PCR引物 |
| 2.1.3 主要实验仪器 |
| 2.1.4 主要试剂 |
| 2.1.5 主要溶液配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 Western blot方法检测各组胃癌细胞中凋亡相关蛋白 |
| 2.2.2 Western blot方法检测细胞粘附蛋白及细胞骨架蛋白表达 |
| 2.2.3 Western blot方法检测胃癌细胞中信号传导通路蛋白表达 |
| 2.2.4 Real-time PCR方法检测胃癌细胞调控上皮间质转化相关转录因子 |
| 2.2.5 Real-time PCR方法检测胃癌细胞转移相关基因MMP9 表达情况 |
| 2.3 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 ROS1 基因沉默后胃癌细胞凋亡相关因子变化 |
| 3.2 ROS1 基因沉默后细胞粘附蛋白及细胞骨架蛋白的变化 |
| 3.3 ROS1 基因沉默后胃癌细胞信号传导通路蛋白变化 |
| 3.4 ROS1 基因沉默后胃癌细胞上皮间质转化相关转录因子Twist,Snail,Slug表达下降 |
| 3.5 ROS1 基因沉默后胃癌细胞MMP9 基因表达下降 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第四部分 :ROS1在胃癌组织中过表达且与胃癌不良预后相关 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 TCGA数据库中胃癌组织中ROS1 mRNA的表达与临床病理因素及患者预后的关系以及ROS1 基因扩增情况 |
| 2.1.2 组织标本 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 主要试剂 |
| 2.1.5 主要试剂溶液配置 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 qRT-PCR法检测ROS1 mRNA在37 例胃癌及其配对正常胃粘膜组织中的表达 |
| 2.2.2 免疫组织化学染色检测胃癌组织中ROS1 蛋白表达 |
| 3 结果 |
| 3.1 TCGA数据库ROS1 mRNA在胃癌组织中高表达 |
| 3.2 TCGA数据库ROS1 mRNA表达与胃癌临床病理特征的关系及意义 |
| 3.3 ROS1 mRNA表达与胃癌总生存率的关系 |
| 3.4 TCGA数据中ROS1 基因扩增 |
| 3.5 qRT-PCR方法检测ROS1 mRNA在37 例胃癌组织中高表达 |
| 3.6 免疫组织化学染色检测ROS1 蛋白在胃癌及正常胃粘膜组织中的表达 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）七叶素通过ROS/p38 MAPK信号通路诱导人骨肉瘤细胞凋亡和自噬的机制研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略词表 |
| 1. 绪论 |
| 1.1 骨肉瘤的概述 |
| 1.2 七叶素 |
| 1.3 细胞凋亡 |
| 1.4 细胞自噬 |
| 1.5 MAPK通路 |
| 1.6 活性氧 |
| 2. 第一章 七叶素通过凋亡抑制骨肉瘤细胞 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料和试剂 |
| 2.3 步骤与方法 |
| 2.4 结果 |
| 2.5 讨论与小结 |
| 3. 第二章 七叶素通过自噬抑制骨肉瘤 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和试剂 |
| 3.3 步骤和方法 |
| 3.4 结果 |
| 3.5 讨论与小结 |
| 4. 第三章 七叶素通过ROS/p38 MAPK途径介导凋亡和自噬抑制骨肉瘤 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料和仪器 |
| 4.3 步骤与方法 |
| 4.4 结果 |
| 4.5 讨论与小结 |
| 5. 第四章 七叶素体内抑制骨肉瘤的研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与试剂 |
| 5.3 实验步骤与方法 |
| 5.4 结果 |
| 5.5. 讨论与小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者简介及研究生期间科研情况 |
（10）龙葵提取物澳洲茄边碱对人胆管癌细胞生长及转移的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1 胆管癌诊治的相关理论概述 |
| 1.1 胆管癌的流行病学 |
| 1.2 胆管癌的危险因素及发病机制 |
| 1.3 胆管癌的分型与分期 |
| 1.4 胆管癌的诊断与治疗现状 |
| 1.5 胆管癌治疗瓶颈问题及展望 |
| 2 凋亡蛋白与胆管癌发生发展的相关性 |
| 2.1 Bcl-2和Bax与胆管癌 |
| 2.2 Caspase与胆管癌 |
| 2.3 XIAP与胆管癌 |
| 2.4 PARP与胆管癌 |
| 3 EMT与胆管癌侵袭和转移 |
| 3.1 EMT相关分子标志物与肿瘤侵袭转移 |
| 3.2 PI3K/AKT信号通路轴与胆管癌侵袭转移 |
| 4 中医药对胆管癌的相关认识 |
| 4.1 中医药对胆管癌病因病机的认识 |
| 4.2 中医药对胆管癌的证治近况 |
| 5 龙葵及其提取物澳洲茄边碱抗肿瘤作用 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 1 实验目的 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 药物 |
| 2.2 细胞株 |
| 2.3 试剂及溶液配制 |
| 2.4 仪器及耗材 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 细胞复苏、冻存、传代与培养 |
| 3.2 细胞活力测定实验 |
| 3.3 流式细胞术 |
| 3.4 划痕实验 |
| 3.5 Transwell实验 |
| 3.6 线粒体膜电位的检测 |
| 3.7 Q-PCR检测相关蛋白mRNA的表达 |
| 3.8 Western blotting检测 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 澳洲茄边碱对人胆管癌细胞QBC939增殖的影响 |
| 4.2 澳洲茄边碱诱导人胆管癌细胞株QBC939凋亡 |
| 4.3 澳洲茄边碱诱导胆管癌人QBC939细胞凋亡的作用机制 |
| 4.4 澳洲茄边碱抑制人胆管癌细胞株QBC939转移 |
| 5 讨论 |
| 5.1 中药龙葵对胆管癌具有一定的疗效作用 |
| 5.2 澳洲茄边碱具有抑制人胆管癌QBC939增殖,促进凋亡作用分析 |
| 5.3 澳洲茄边碱阻断人胆管癌QBC939细胞EMT过程,抑制转移作用及机制阐述 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 附录一 英文缩略词表 |
| 附录二 综述一 |
| 参考文献 |
| 附录三 综述二 |
| 作者简介 |
| 攻读博士学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
四、肿瘤坏死因子基因转染对人胆管癌细胞生长的影响（论文参考文献）
- [1]靶向siRNA阻断NF-κB信号通路对胆管癌增殖和侵袭影响实验研究[D]. 季锡清. 第二军医大学, 2009(10)
- [2]胆管癌药物的筛选及作用机理的研究[D]. 韩鹏. 厦门大学, 2009(11)
- [3]逆转录病毒介导人肿瘤坏死因子-α基因抑制胆管癌细胞的生长[J]. 巩鹏,王忠裕,赵作伟,谭广,王洪江,李冰. 大连医科大学学报, 2003(04)
- [4]《第三军医大学学报》2002年第24卷主题词索引[J]. 冷怀明. 第三军医大学学报, 2002(12)
- [5]PTEN基因联合奥沙利铂对胆管癌细胞生长抑制的研究[D]. 崔平. 昆明医学院, 2005(03)
- [6]肿瘤坏死因子基因转染对人胆管癌细胞生长的影响[J]. 巩鹏,王忠裕,王洪江,谭广,殷朔. 中华实验外科杂志, 2004(01)
- [7]PLNCX-TNFα基因转染对人胆管癌细胞生长的影响[J]. 巩鹏,王忠裕,王洪江,马哲夫,谭广,殷朔. 肝胆外科杂志, 2002(03)
- [8]ROS1基因对胃癌细胞生物学行为的影响及其分子机制的研究[D]. 乔京京. 中国医科大学, 2019(04)
- [9]七叶素通过ROS/p38 MAPK信号通路诱导人骨肉瘤细胞凋亡和自噬的机制研究[D]. 朱健. 浙江大学, 2019(03)
- [10]龙葵提取物澳洲茄边碱对人胆管癌细胞生长及转移的影响[D]. 张秀华. 南京中医药大学, 2018(12)