一、谷氨酰胺二肽对生长期大鼠蛋白质代谢的作用（论文文献综述）
杜宝龙[1]（2021）在《亮氨酸-亮氨酸肽介导的肉仔鸡小肠上皮细胞调控通路研究》文中研究说明肠道是动物消化吸收养分的重要场所,也是机体重要的免疫屏障,维护肠道健康对于保障动物的生长发育具有极其重要的意义。小肽既是营养物质,又是生物活性分子,对机体具有营养和生理双重调节作用。为了阐明小肽对肉仔鸡IEC生长、增殖和凋亡的影响及其分子机理,本试验选用人工合成的亮氨酸（L-Leu）和亮氨酸-亮氨酸肽（L-Leu-L-Leu）为试验材料,利用鸡小肠上皮细胞体外培养技术研究L-Leu-L-Leu对IEC细胞生长、增殖和凋亡的影响,并结合转录组（RNA-seq）和蛋白组（Lable-free）测序技术,筛选与IEC细胞生长、增殖和凋亡相关的候选基因、蛋白以及通路,以期为初步阐明小肽介导的IEC调控通路,完善小肽营养理论体系和建立小肽营养调控技术提供理论依据。获得结果如下:（1）分离原代肠上皮细胞经免疫荧光鉴定纯度均达到90%以上,细胞传代经药物干预之后结果发现,L-Leu-L-Leu组对IEC细胞的生长和增殖均具有明显的促进作用,对IEC的凋亡有明显的抑制作用,且效果优于L-Leu组和对照组。（2）分别对对照组、L-Leu组、L-Leu-L-Leu组的9个样本构建的c DNA文库进行转录组测序,结果显示:与对照组相比,L-Leu组中的差异表达基因有34个,其中23个显着上调,11个显着下调;L-Leu-L-Leu组中有29个差异表达基因,其中19个显着上调,10个显着下调。与L-Leu组相比,L-Leu-L-Leu组中有26个差异表达基因,其中12个显着上调,14个显着下调。通过对细胞生长增殖和凋亡的相关候选基因筛选发现,与对照相比,L-Leu组筛选到CCL20、IL8L1、IL8、IL6 4个候选基因分别参与细胞因子受体相互作用通路,Toll样受体信号通路,NOD样受体信号通路,细胞衰老,RIG-I样受体信号通路等免疫调节的通路,L-Leu-L-Leu组筛选到IL8 1个候选基因参与Toll样受体信号通路,NOD样受体信号通路,细胞衰老,细胞因子-细胞因子受体相互作用等免疫调节通路;与L-Leu组相比,L-Leu-L-Leu组筛选到IL6、RGN 2个候选基因参与细胞因子受体相互作用,Toll样受体信号通路,NOD样受体信号通路,细胞衰老等免疫途径和磷酸戊糖（能量代谢）途径。（3）非定量蛋白组学标记测序结果显示,与对照组相比,L-Leu组总共筛选出90个差异表达蛋白,其中34个差异蛋白显着上调,56个差异蛋白显着下调,L-Leu-L-Leu总共筛选出221个差异表达蛋白,其中130个显着上调,81个显着下调;与L-Leu相比,L-Leu-L-Leu组中总共筛选出47个差异表达蛋白,21个显着上调,26个显着下调。通过对细胞生长增殖和凋亡的相关候选蛋白和通路筛选发现,与对照组相比,L-Leu组中发现1个候选蛋白PGM3参与到氨基糖和核苷酸糖代谢中,L-Leu-L-Leu组中发现3个候选蛋白RPS17、RPS11、RPL23参与核糖体通路;与L-Leu组相比,L-Leu-L-Leu组发现两个蛋白GPX4、PDPK1参与谷胱甘肽代谢和T细胞受体信号通路。本研究发现L-Leu-L-Leu可促进IEC细胞的生长、增殖,同时还能抑制IEC的凋亡。结合转录组和蛋白组测序技术,发现了多个免疫和能量相关调控信号通路与IEC细胞的生长、增殖和凋亡有关;鉴定出了IL8、IL6、RGN 3个候选基因,RPS17、RPS11、RPL23、GPX4、PDPK1 5个相关候选蛋白参与细胞的生长、增殖和凋亡。研究结果为初步阐明小肽介导的IEC调控通路、完善小肽营养理论体系和建立小肽营养调控技术提供了有价值的数据。
邓利玲[2]（2020）在《桑叶魔芋复配粉干预老年小鼠动物源性高蛋白膳食消化代谢作用及机理研究》文中研究指明全球人口老龄化的加剧,老年健康问题受到高度关注。老年人随着年龄增长,身体机能退化、营养不平衡,需要摄入比人体推荐量更多的蛋白以满足机体的正常功能。并且,高蛋白膳食有助于改善肥胖、糖尿病等疾病。但过高的蛋白摄入会影响老年人肝肾和胃肠道正常的代谢功能。如何在提高老年人高蛋白摄入的同时,保证其充分的消化吸收而不影响正常的健康,显得极为重要。本课题组创新性将桑叶（Morus alba L.）和魔芋（Amorphophallus rivieri）两种天然、安全的农产食品原料结合,开发了一种以魔芋和桑叶为主要原料复配的固体饮料（本文中简称―复配粉‖）,该产品能有效改善老年人对动物源性高蛋白膳食的消化,但其作用效果和机理还未明确。为了探讨上述科学问题,以15月龄BALB/c老年小鼠为受试动物,以饲喂AIN-93M标准日粮为正常对照,饲喂动物源性高蛋白（以AIN-93M标准日粮为基础,用动物蛋白替代部分玉米淀粉构成,蛋白质含量达50%以上。本文中简称―高蛋白‖）饲料的同时分别灌胃消食片和不同剂量的复配粉,探究复配粉对高蛋白膳食代谢作用的影响机理,为老年人群蛋白质科学膳食提供理论指导和实际应用。主要研究结果如下:（1）复配粉对高蛋白膳食老年小鼠蛋白质代谢作用的影响首先测定各试验组动物体重、摄食量、脏器指数、粪便和盲肠内容物的含水量及pH值,再采用生化试剂盒测定动物粪便的蛋白质表观消化率及与蛋白质代谢相关的血清生化指标,进而通过氨基酸靶标代谢组学和多肽组学,测定动物粪便中25种氨基酸含量和多肽序列,研究不同剂量复配粉对蛋白质消化性及其代谢产物的影响。结果表明,各试验组动物体重和脏器指数无显着性差异,摄食量随时间的延长高蛋白组有降低趋势。复配粉使高蛋白膳食老年小鼠盲肠内容物和粪便含水量增大,pH降低。蛋白质表观消化率在复配粉干预后均显着提高,高牛肉蛋白组表观消化率由86.70%提高到92.92%以上,且呈剂量关系;高鱼肉蛋白组由89.60%提高到96.78%以上。血清中GPT、GOT活性和氨基酸水平在复配粉干预下均提高,血清尿素氮含量降低,且效果优于消食片组。复配粉和消食片的干预显着性降低了高蛋白膳食粪便中氨基酸含量,特别是BHD组总氨基酸含量为2084 nmol/g,与NC组含量2049 nmol/g无显着性差异,提示复配粉促进了机体蛋白质的吸收,且对高鱼肉蛋白膳食的影响更明显。消食片虽能促进蛋白质的消化,但大部分以尿素氮的形式排出体外。粪便多肽鉴定结果表明,牛肉蛋白组共鉴定到1326条肽段,肽段分子量在3000 Da以下占93%,主要分布在10001500 Da,各试验组特有肽段数量分别为48、154、123、78、70、62条。鱼肉蛋白组共鉴定到194条肽段,分子量在3000 Da以下占93%,主要分布在10001500 Da,各试验组特有肽段数分别为14、24、15、14、15、17条。复配粉干预使各组特有肽段数减少,说明蛋白质降解更为彻底。通过肽段序列定位分析及功能预测发现,鉴定到的高丰度肽段主要源自肌动蛋白、肌球蛋白和少量的肌红蛋白、组蛋白。这4种蛋白大部分氨基酸在序列末端保守性较强,大多数肽段被鉴定出来,且可信度较高,C端以赖氨酸、苏氨酸等极性氨基酸为主要,N端以蛋氨酸、丙氨酸等非极性氨基酸和少量半胱氨酸、天冬氨酸等极性氨基酸为主,导致其不易被消化。以上结果说明复配粉促进了高蛋白膳食老年小鼠蛋白质消化代谢作用。（2）复配粉对高蛋白膳食老年小鼠胃及肠道组织形态的影响从动物肠道内环境结构入手,采用全肠道病理切片观察技术,就复配粉对高蛋白膳食老年小鼠胃及肠道健康的影响进行全面探索。包括胃和全肠道（小肠:十二指肠、空肠、回肠;大肠:盲肠、结肠、直肠）切片观察及小肠质构、小肠（十二指肠、空肠、回肠）粘膜组织（绒毛高度、绒毛宽度、隐窝深度、肌层厚度）、血清细胞因子、LBP、LPS、盲肠SCFA含量的测定,为复配粉在改善胃肠道结构和内环境健康方面的作用提供科学依据。结果表明,高蛋白膳食对老年小鼠肠道结构不利,复配粉干预显着性提高了高蛋白膳食老年小鼠小肠的坚实度、弹性、断裂力和断裂距离,改善高蛋白膳食老年小鼠胃肠道组织形态和结构,且对高牛肉蛋白组的改善效果更显着。消食片对高蛋白膳食组老年小鼠肠道改善效果不明显。复配粉降低了高蛋白膳食老年小鼠促炎性细胞因子（TNF-α、IL-1β）含量,提高了抗炎性细胞因子（IL-10）含量。LBP、LPS显着性降低。肠道SCFA含量显着增加,并呈量效关系,且对高鱼肉蛋白膳食组胃肠道改善效果更明显。（3）复配粉对高蛋白膳食老年小鼠肠道酶活性的影响及分子机制借助通路分析和基因、蛋白表达水平,就老年小鼠蛋白质代谢和酶活性在分子层面的比较,研究高蛋白膳食代谢的具体情况和可能的代谢酶、代谢通路情况。通过对高牛肉蛋白组和高鱼肉蛋白组蛋白质代谢通路KEGG预测,发现复配粉的干预能够促进氨基酸代谢途径。进而通过蛋白质代谢相关酶活性测定,发现复配粉能够提高高牛肉蛋白和高鱼肉蛋白膳食老年小鼠胃蛋白酶活性,提高高鱼肉蛋白膳食老年小鼠胰蛋白酶和肠肽酶活性,而竞争性降低高牛肉蛋白膳食组胰蛋白酶和肠肽酶的活性。进一步通过RT-qPCR和Western blot分子生物学技术探究蛋白质代谢关键酶在mRNA和蛋白水平表达量,发现复配粉干预上调了高蛋白膳食老年小鼠APN、PepT1、GDH关键酶在转录和翻译水平的活性。（4）复配粉对高蛋白膳食老年小鼠肠道菌群的影响对各试验组老年小鼠盲肠内容物肠道菌群16S rRNA的V3-V4区域高通量测序,分别进行了Alpha多样性分析、Beta多样性分析、群落结构分析、肠道菌群和代谢组学联合相关性分析。结果发现,高蛋白膳食降低了老年小鼠厚壁菌门（Firmicutes）水平,增加了拟杆菌门（Bacteroidetes）水平;而复配粉的干预增加了厚壁菌门（Firmicutes）水平,降低了拟杆菌门（Bacteroidetes）水平,且F/B增大,呈量效关系。进一步对相对丰度前20属水平物种分析发现,复配粉干预后,乳杆菌属（Lactobacillus）显着增多。最后通过肠道菌群和代谢产物中25种氨基酸相关性分析进一步证明了上述结论,即复配粉通过调节高蛋白膳食老年小鼠肠道菌群的种类和数量,增加乳杆菌属（Lactobacillus）和某些非优势菌但与氨基酸代谢相关、且对人体健康有利的菌群的丰度,如产粪甾醇真菌属（Eubacterium coprostanoligenes）、布劳特氏菌（Blautia）等,进而竞争性降低有害菌群的丰度,保护肠道屏障,促进肠道健康,提高了蛋白质的消化性。
宋燕[3]（2020）在《酶解大豆蛋白对生长中期草鱼生长性能和肌肉品质的影响及机制研究》文中研究指明本论文首先通过动物试验,在生长中期草鱼蛋白需要量28%的日粮基础上降低2%蛋白后添加不同水平的酶解大豆蛋白,考察其对生长中期草鱼生长性能和肌肉品质的影响;其次,通过动物试验,研究了酶解大豆蛋白对生长中期草鱼肌肉抗氧化酶活和基因表达、Nrf2信号通路相关基因和蛋白表达的影响;通过体外细胞试验,研究了酶解大豆蛋白效应物对草鱼肌管细胞抗氧化能力的影响及作用机制,探索了酶解大豆蛋白对生长中期草鱼肌肉抗氧化能力的影响及其机制;第三,通过动物试验,研究了酶解大豆蛋白对生长中期草鱼肌纤维组织学特性、肌纤维发育相关基因和蛋白表达、ERK1/2信号通路相关基因表达、TOR和FoxO1信号通路相关基因和蛋白表达的影响;通过体外细胞试验,研究了酶解大豆蛋白效应物对草鱼成肌细胞增殖、分化和蛋白质合成的影响及作用机制,探索了酶解大豆蛋白对生长中期草鱼肌纤维发育的影响及其机制。主要内容和结果如下:1.酶解大豆蛋白对生长中期草鱼生长性能和肌肉品质的影响试验选取健康草鱼540尾,初重为325.72±0.60 g,随机分为6个处理,每个处理3个重复,每个重复30尾鱼,进行56d的生长试验。各处理组中的鱼分别饲喂日粮1（28%粗蛋白,28%CP）、日粮2（26%CP）和日粮3-6（分别在日粮2基础上添加0.8、1.2、1.6和2.0%酶解大豆蛋白）,考察了酶解大豆蛋白对生长中期草鱼生长性能和肌肉品质的影响。结果表明:（1）28%CP日粮基础上降低2%蛋白,FBW、PWG、SGR和FI显着降低（P<0.05）。肌肉水分含量显着增加（P<0.05）,蛋白质含量显着降低（P<0.05）;蒸煮损失、剪切力和p H无显着影响（P>0.05）。肌肉中饱和脂肪酸棕榈酸（C16:0）和硬脂酸（C18:0）含量显着增加（P<0.05）,亚麻酸（LA,C18:3n-3）和二十二碳六烯酸（DHA,C22:6 n-3）含量以及总不饱和脂肪酸和饱和脂肪酸之比显着降低（P<0.05）。肌肉中游离天冬氨酸、谷氨酸和组氨酸以及肌苷酸含量显着降低（P<0.05）。以上结果表明,低蛋白日粮导致生长中期草鱼生长性能和肌肉品质（营养价值、保健功能和风味）下降。（2）当在26%CP日粮基础上添加0.8-1.2%的酶解大豆蛋白,FBW、PWG、SGR、FI和FE显着提高（P<0.05）。肌肉中水分含量、蒸煮损失和剪切力显着降低（P<0.05）;蛋白质和脂肪含量以及p H显着增加（P<0.05）;棕榈酸（C16:0）和硬脂酸（C18:0）含量显着降低（P<0.05）;油酸（C18:1）、亚麻酸（C18:3n-3）和二十二碳六烯酸（DHA,C22:6 n-3）含量以及总不饱和脂肪酸和饱和脂肪酸含量之比显着提高（P<0.05）;游离天冬氨酸、谷氨酸、组氨酸、蛋氨酸和肌苷酸含量显着增加（P<0.05）。以上结果表明,在26%CP日粮基础上添加0.8-1.2%酶解大豆蛋白改善了生长中期草鱼的生长性能和肌肉品质。2.酶解大豆蛋白对生长中期草鱼肌肉抗氧化能力的影响及其机制2.1酶解大豆蛋白对生长中期草鱼肌肉抗氧化能力的影响及可能机制在生长中期草鱼蛋白需要量28%日粮基础上降低2%蛋白后添加不同水平的酶解大豆蛋白,考察其对肌肉抗氧化能力的影响及可能机制。结果表明:（1）在28%CP日粮基础上降低2%蛋白,肌肉中的丙二醛（MDA）和蛋白羰基（PC）的含量显着增加（P<0.05）;GSH含量以及抗氧化酶（Cu/Zn-SOD、Mn SOD、CAT、GPx、GST和GR）活力显着降低（P<0.05）,表明日粮蛋白水平从28%降低到26%降低了生长中期草鱼肌肉抗氧化能力。（2）当在26%CP日粮基础上添加0.8-1.6%酶解大豆蛋白,肌肉中MDA和PC含量显着降低（P<0.05）;GSH含量以及抗氧化酶活力显着增加（P<0.05）。以上结果表明,酶解大豆蛋白可能通过增加生长中期草鱼肌肉GSH含量和抗氧化酶活性,提高肌肉抗氧化能力。（3）当在26%CP日粮基础上添加0.8-1.6%酶解大豆蛋白,显着提高了肌肉中抗氧化酶活和GCL mRNA水平以及Nrf2 mRNA水平和蛋白表达水平（P<0.05）,并显着下调了肌肉中Keap1b mRNA水平（P<0.05）。以上结果表明,酶解蛋白可能通过下调Keap1b mRNA水平促进Nrf2核移位,进一步上调抗氧化酶mRNA水平,最后提高抗氧化酶活性。2.2酶解大豆蛋白效应物（Glu-Tyr和Ala-Phe二肽）对草鱼肌管细胞抗氧化能力的影响及作用机制通过体外细胞试验,考察酶解大豆蛋白效应物Glu-Tyr和Ala-Phe二肽对草鱼肌管细胞抗氧化能力的影响及作用机制。试验共设4个处理,每个处理6个重复,分别为对照组（0 mg/L二肽）、二肽添加组、Nrf2抑制剂组和二肽+Nrf2抑制剂组。结果表明:（1）与对照组相比,Glu-Tyr或Ala-Phe二肽均可以显着降低草鱼肌管细胞中MDA和PC含量（P<0.05）,显着提高肌管细胞中抗氧化酶活性（P<0.05）。表明,Glu-Tyr或Ala-Phe二肽都可以降低草鱼肌管细胞氧化损伤、增加抗氧化酶活力,从而提高其抗氧化能力。（2）与对照组相比,Glu-Tyr或Ala-Phe二肽处理都可以显着提高草鱼肌管细胞中Nrf2蛋白表达（P<0.05）,说明Glu-Tyr或Ala-Phe二肽可能通过Nrf2信号通路调控肌管细胞的抗氧化能力。与单独添加Glu-Tyr或Ala-Phe二肽组相比,Glu-Tyr或Ala-Phe二肽+Nrf2抑制剂组中Nrf2蛋白表达以及大部分抗氧化酶活性显着降低（P<0.05）,MDA和PC含量显着提高（P<0.05）。表明,Glu-Tyr或Ala-Phe二肽可以通过激活Nrf2信号通路提高肌管细胞的抗氧化能力。3.酶解大豆蛋白对生长中期草鱼肌纤维发育的影响及其机制3.1酶解大豆蛋白对生长中期草鱼肌纤维发育的影响及可能机制3.1.1酶解大豆蛋白对生长中期草鱼肌纤维组织学特性的影响试验设计同试验2.1,在生长中期蛋白需要量水平28%基础上降低2%蛋白后添加不同水平的酶解大豆蛋白,考察其对肌纤维组织学特性的影响。结果显示,在生长中期草鱼蛋白需要量28%基础上降低2个百分点蛋白,草鱼肌纤维直径显着下降（P<0.05）,肌纤维密度显着增加（P<0.05）,说明低蛋白日粮抑制了生长中期草鱼肌纤维发育。当在26%CP日粮基础上添加0.8-1.2%酶解大豆蛋白,肌纤维直径显着增加（P<0.05）,肌纤维密度显着降低（P<0.05）,表明在低蛋白日粮中添加适宜水平的酶解大豆蛋白可以促进生长中期草鱼肌纤维发育。3.1.2酶解大豆蛋白对生长中期草鱼成肌细胞增殖和分化的影响及可能机制在生长中期蛋白需要量水平28%基础上降低2%蛋白后添加不同水平的酶解大豆蛋白,考察其对草鱼成肌细胞增殖和分化的影响及可能机制。结果显示:（1）在26%CP日粮基础上添加0.8-1.6%酶解大豆蛋白,成肌细胞增殖相关基因cyclin B、cyclin D、cyclin E、E2F4和PCNA的mRNA水平显着增加（P<0.05）,表明低蛋白日粮中添加适应水平的酶解大豆蛋白可以促进生长中期草鱼成肌细胞增殖。（2）在26%CP日粮基础上添加0.8-1.2%酶解大豆蛋白,成肌细胞分化相关基因My OD、Mrf5、My OG、MRF4和My HC mRNA水平以及My OD、My OG和My HC蛋白水平显着上调（P<0.05）,表明低蛋白日粮中添加适宜水平的酶解大豆蛋白可以促进生长中期草鱼成肌细胞分化。（3）在26%CP日粮基础上添加0.8-1.2%酶解大豆蛋白显着上调了草鱼肌肉中ERK1和ERK2的基因表达（P<0.05）,表明酶解大豆蛋白可能通过激活ERK1/2信号通路,从而促进草鱼成肌细胞增殖和分化。3.1.3酶解大豆蛋白对生长中期草鱼肌肉蛋白质合成的影响及可能机制在生长中期蛋白需要量水平28%基础上降低2%蛋白后添加不同水平的酶解大豆蛋白,考察其对生长中期草鱼肌肉蛋白质合成的影响。结果显示:在26%CP日粮基础上添加0.8-1.2%酶解大豆蛋白,TOR和S6K1 mRNA水平以及p-TOR、T-TOR蛋白水平均显着增加（P<0.05）;4E-BP1、FoxO1a、MURF1和MAFbx mRNA水平显着降低（P<0.05）,说明酶解大豆蛋白可能通过激活生长中期草鱼肌肉中TOR信号通路、抑制FoxO1信号通路,促进蛋白质合成、抑制蛋白质降解,从而增加肌肉中蛋白质含量。3.2酶解大豆蛋白效应物（Glu-Tyr和Ala-Phe二肽）对草鱼成肌细胞增殖、分化和蛋白质合成的影响及作用机制3.2.1酶解大豆蛋白效应物（Glu-Tyr和Ala-Phe二肽）对草鱼成肌细胞增殖的影响及作用机制通过体外细胞试验,考察酶解大豆蛋白效应物Glu-Tyr和Ala-Phe二肽对草鱼成肌细胞增殖的影响及作用机制。试验共设4个处理,每个处理6个重复,分别为对照组（0mg/L二肽）,二肽添加组,ERK1/2抑制剂组和二肽+ERK1/2抑制剂组。结果表明:（1）Glu-Tyr和Ala-Phe二肽都可以促进草鱼成肌细胞增殖,且处理48h时细胞的增殖能力最佳。（2）与对照组相比,Glu-Tyr或Ala-Phe二肽处理48h显着提高了细胞周期调控蛋白（cyclin B、cyclin D、cyclin E和E2F4）以及ERK1和ERK2的基因表达（P<0.05）。表明,Glu-Tyr或Ala-Phe二肽可能通过激活ERK1/2信号通路,上调细胞周期蛋白和转录因子E2F4基因表达,从而促进草鱼成肌细胞增殖。与单独添加Glu-Tyr二肽组相比,Glu-Tyr二肽+ERK1/2抑制剂组中草鱼成肌细胞OD值以及ERK1和细胞周期调控蛋白基因表达显着降低（P<0.05）,ERK2基因表达虽显着降低（P<0.05）但与单独添加U0126组无显着差异（P>0.05）。表明,Glu-Tyr二肽仅通过激活ERK1信号通路（而不是ERK2信号通路）促进草鱼成肌细胞增殖。同时,与单独添加Ala-Phe二肽组相比,Ala-Phe二肽+ERK1/2抑制剂组中草鱼成肌细胞OD值以及ERK1、ERK2和细胞周期调控蛋白基因表达显着降低（P<0.05）。表明,Ala-Phe二肽可以通过激活ERK1和ERK2信号通路促进草鱼成肌细胞增殖。3.2.2酶解大豆蛋白效应物（Glu-Tyr和Ala-Phe二肽）对草鱼成肌细胞分化的影响及作用机制通过体外细胞试验,考察酶解大豆蛋白效应物Glu-Tyr和Ala-Phe二肽对草鱼成肌细胞分化的影响及作用机制。试验设计如3.2.1,结果表明:（1）与对照组相比,Glu-Tyr二肽显着提高了草鱼成肌细胞中生肌调节因子家族成员表达（My OD、Myf5、My OG、MRF4基因表达以及My OD、My OG和My HC蛋白表达）以及My HC和ERK1基因表达（P<0.05）,表明Glu-Tyr二肽可能通过激活ERK1信号通路促进草鱼成肌细胞分化。同时,Ala-Phe二肽显着提高了草鱼成肌细胞中生肌调节因子家族成员表达以及ERK1和ERK2基因表达（P<0.05）,表明Ala-Phe二肽可能通过激活ERK1和ERK2信号通路促进草鱼成肌细胞分化。（2）与单独添加Glu-Tyr二肽组相比,Glu-Tyr二肽+ERK1/2抑制剂组中草鱼成肌细胞生肌调节因子家族成员表达和ERK1基因表达显着降低（P<0.05）。表明,Glu-Tyr二肽可以通过激活ERK1信号通路促进草鱼成肌细胞分化。与单独添加Ala-Phe二肽组相比,Ala-Phe二肽+ERK1/2抑制剂组中生肌调节因子家族成员表达以及ERK1和ERK2基因表达显着降低（P<0.05）。表明,Ala-Phe二肽可以通过激活ERK1和ERK2信号通路促进草鱼成肌细胞分化。3.2.3酶解大豆蛋白效应物（Glu-Tyr和Ala-Phe二肽）对草鱼成肌细胞蛋白质合成的影响及作用机制通过体外细胞试验,考察酶解大豆蛋白效应物Glu-Tyr和Ala-Phe二肽对草鱼成肌细胞蛋白质合成的影响及作用机制。试验共设4个处理,每个处理6个重复,分别为对照组（0 mg/L二肽）,二肽添加组,TOR抑制剂组（或FoxO1激活剂组）以及二肽+TOR抑制剂组（或FoxO1激活剂组）。结果表明:（1）与对照组相比,Glu-Tyr和Ala-Phe二肽处理均可以显着提高草鱼成肌细胞蛋白质合成率（P<0.05）,表明Glu-Tyr和Ala-Phe二肽均可以促进草鱼成肌细胞蛋白质合成。（2）与对照组相比,Glu-Tyr和Ala-Phe二肽处理均可以显着上调TOR基因表达、p-TOR和T-TOR蛋白表达之比,说明Glu-Tyr和Ala-Phe二肽可能通过TOR信号通路促进草鱼成肌细胞蛋白质的合成。与单独添加Glu-Tyr或Ala-Phe二肽组相比,Glu-Tyr或Ala-Phe二肽+TOR抑制剂（Rapamycin）组中草鱼成肌细胞中蛋白质合成率显着降低（P<0.05）,TOR基因表达、p-TOR和T-TOR蛋白表达之比显着下调（P<0.05）。以上结果表明,Glu-Tyr和Ala-Phe二肽能通过激活TOR信号通路提高草鱼成肌细胞蛋白质合成。（3）与对照组相比,Glu-Tyr和Ala-Phe二肽均可以显着降低草鱼成肌细胞培养液中3-甲基组氨酸含量（P<0.05）,表明Glu-Tyr和Ala-Phe二肽都可以降低草鱼成肌细胞蛋白质降解率。与对照组相比,Glu-Tyr二肽处理可以显着下调FoxO1b基因表达（P<0.05）,Ala-Phe二肽处理可以显着下调FoxO1a和FoxO1b基因表达（P<0.05）,说明Glu-Tyr可能通过FoxO1b信号通路抑制草鱼成肌细胞蛋白质的降解,而Ala-Phe二肽可能通过FoxO1a和FoxO1b信号通路抑制草鱼成肌细胞蛋白质的降解。与单独添加Glu-Tyr或Ala-Phe二肽组相比,Glu-Tyr或Ala-Phe二肽+FoxO1激活剂（Wortmannin）组的成肌细胞培养液中3-甲基组氨酸含量着增加（P<0.05）,且Ala-Phe二肽+Wortmannin组的成肌细胞FoxO1b基因表达显着上调（P<0.05）,Glu-Tyr二肽+Wortmannin组的成肌细胞FoxO1a和FoxO1b基因表达显着上调（P<0.05）。以上结果表明,Glu-Tyr二肽可以通过FoxO1b信号通路抑制草鱼成肌细胞蛋白质的降解,而Ala-Phe二肽通过FoxO1a和FoxO1b信号通路抑制草鱼成肌细胞蛋白质的降解。综上所述:（1）在生长中期草鱼蛋白需要量28%的日粮基础上降低2%蛋白,导致其生长性能和肌肉品质下降;在26%CP日粮基础上添加0.8-1.2%的酶解大豆蛋白可以改善其生长性能和肌肉品质。（2）酶解大豆蛋白改善生长中期草鱼肌肉品质与其提高肌肉抗氧化能力有关。酶解大豆蛋白效应物Glu-Tyr或Ala-Phe二肽可以通过激活Nrf2信号通路,提高肌管细胞抗氧化酶活力,从而增强其抗氧化能力。（3）酶解大豆蛋白改善生长中期草鱼肌肉品质还与其促进肌纤维发育有关。酶解大豆蛋白效应物Ala-Phe二肽通过激活ERK1和ERK2信号通路促进草鱼成肌细胞增殖和分化;而Glu-Tyr二肽仅通过激活ERK1信号通路（而不是ERK2信号通路）促进草鱼成肌细胞增殖和分化。此外,Glu-Tyr和Ala-Phe二肽都能通过激活TOR信号通路提高草鱼成肌细胞蛋白质合成;Ala-Phe二肽通过抑制FoxO1a和FoxO1b信号通路抑制草鱼成肌细胞蛋白质的降解,而Glu-Tyr二肽仅通过FoxO1b信号通路抑制成肌细胞蛋白质的降解。
李益民[4]（2020）在《重组微生物全细胞催化高效合成丙谷二肽》文中研究表明丙谷二肽（L-Alanyl-L-glutamine,Ala-Gln）具有溶解度高、热稳定性好及分解速率快等优势,已经成为一种替代谷氨酰胺（L-Glutamine,Gln）的新型营养补充剂,被广泛应用于食品、保健品和医药等领域。α-氨基酸酯酰基转移酶（α-amino acid ester acyl transferase,Aet）能以丙氨酸甲酯盐酸盐（L-alanine methyl ester hydrochloride,AlaOMe）和Gln为底物直接合成Ala-Gln,基于表达Aet的微生物合成法因其原料廉价易得、反应步骤少、反应条件温和、环境污染小且副产物少,可以作为工业化生产Ala-Gln的新方法。然而,Aet催化合成Ala-Gln过程存在反应时间长和底物转化率低等问题,限制了其在Ala-Gln工业化生产中的应用。本论文的研究工作构建了异源表达Sphingobacterium siyangensis来源Aet（SsAet）的重组大肠杆菌和重组酿酒酵母,通过菌体的重复利用及絮凝自固定化技术,解决了上述问题,为实现Ala-Gln安全、绿色且高效生产奠定了基础。取得的主要研究结果如下:首先,构建异源表达SsAet的重组大肠杆菌高效合成Ala-Gln。以最常用的表达型宿主 BL21（DE3）,构建了重组大肠杆菌 BL21（DE3）-pET29a-SsAET（BPA）,发现 BPA表达了大量的包涵体,影响了其催化活性。通过更换有助于蛋白二硫键形成的宿主,提高蛋白的溶解性,其中Origami 2（DE3）-pET29a-SsAET（OPA）的SsAet可溶表达量最高,且催化活性是BPA的1.4倍。进一步优化了 OPA的诱导条件和全细胞催化合成Ala-Gln的反应条件,确定了最佳的诱导条件:温度16℃、诱导OD620=0.25、诱导时间12h及IPTG浓度0.6 mmol/L;最佳的反应条件:温度25℃、pH值8.5、反应溶液硼酸盐缓冲液及底物摩尔配比AlaOMe/Gln=1/2。在最优条件下,以OPA作为合成Ala-Gln的全细胞催化剂,反应过程最短可在5 min内完成,获得最高的底物转化率为94%,而比生产强度可高达1.78 g/L·min-1·OD620-1,是目前国内外文献中报道的最高水平。除此之外,OPA具有良好的重复利用性,经五个循环批次反应仍能维持80%以上的催化活性,实现了循环高效合成Ala-Gln。但是,在相同的细胞浓度和反应时间内,OPA全细胞的催化效率比裂解液降低了 21%,发现了物质扩散阻力的存在。其次,构建表面展示SsAet的重组酿酒酵母。为了克服物质扩散阻力和大肠杆菌表达系统潜在的生物安全问题,以生物安全性的酿酒酵母作为表达宿主,将SsAet以N端和C端锚定两种方式展示在酵母细胞表面,通过免疫荧光实验,证明了 SsAet已成功固定在酵母细胞壁上;综合比较菌株生长情况和催化活性,选择N端锚定作为SsAet在酵母表面展示的方法。在此基础上,通过密码子优化提高了 SsAet表达量,发现经密码子优化的EBY100-pYD1-SsAETs（EPagaAs）在20 min时Ala-Gln合成量是未经密码子优化菌株的1.7倍;反应终点从40 min缩短至30 min,生产效率提高了 33%。但是,EPagaAs合成Ala-Gln的反应时间长,且底物转化率仅为OPA的58%,推测酵母表达系统中蛋白翻译后修饰可能影响了 SsAet的催化活性。然后,针对上述问题,研究了蛋白翻译后修饰对SsAet的影响。以糖基化程度低的毕赤酵母为表达宿主,通过密码子优化,提高蛋白表达量和催化效率,构建了分泌表达SsAet的重组毕赤酵母GS115-pPIC9-SsAETP（GPAP）。以GPAP为研究对象,对重组毕赤酵母的诱导条件和合成Ala-Gln的反应条件进行了优化,确定了最佳的诱导温度为26℃、诱导时间为3d及甲醇补加量（v/v）为1.5%;最佳的反应温度为28℃、反应pH值为8.5、反应底物为AlaOMe及底物摩尔配比AlaOMe/Gln为2/1。在最优条件下,GPAP的底物转化率仅为OPA的71%左右,再次验证了蛋白后修饰作用对SsAet催化活性的影响。在此基础上,构建了胞内和分泌表达SsAet的重组毕赤酵母,发现胞内表达SsAet重组菌株的催化活性明显高于分泌表达的,其中胞内表达且去掉内源信号肽的菌株KM71-pPIC3.5K-SAETP1800（KP3.5KAP1800）合成Ala-Gln的底物转化率最高为80%,能达到OPA的90%左右,比分泌表达的对比菌株提高了 41%,阐述了胞内表达SsAet和去掉内源信号肽是提高酵母表达系统中SsAet催化活性的有效方法。通过SDS-PAGE和Western blotting发现了分泌型SsAet分子量的增加;通过去糖基化酶的切除,证明了分泌型SsAet中糖基化修饰的存在;通过LC-MS证明了糖基化修饰发生在第442位Asn残基上;通过圆二色光谱仪鉴定了胞内和分泌型SsAet的二级结构,发现了两者的显着性差异,证明了糖基化修饰是影响SsAet结构和催化活性的重要因素。最后,基于上述研究结果,构建了自固定化重组酿酒酵母高效合成Ala-Gln。使用高拷贝数质粒构建了胞内表达SsAet且去掉内源信号肽的EBY100-pRS424-SsAETs1800（EP424AS1800）。通过培养和反应条件的优化,EP424AS1800能在5 min内获得高达74%的底物转化率,是表面展示重组菌EPagaAs的1.44倍,能达到OPA的83%以上;反应时间比EPagaAs缩短了 80%以上,生产效率提高了 5倍;比生产强度高达1.28 g/L·min·1·OD600-1。通过导入絮凝基因FLOI,得到了毫米级絮凝颗粒且催化活性不受影响的EP424As1800-FLOI,实现了其在反应器内的自固定化。EP424AS1800-FLO1经过十次循环催化反应后仍能保持稳定的催化活性,实现了连续高效合成Ala-Gln。本论文的研究为Ala-Gln安全、绿色且高效的工业化生产奠定了基础。
贺光祖[5]（2015）在《谷氨酰胺二肽对猪肠上皮细胞更新和蛋白质代谢的调控研究》文中提出本论文旨在探讨谷氨酰胺二肽调控猪肠上皮细胞更新和蛋白质代谢的作用机制,为谷氨酰胺二肽在仔猪营养中的应用提供理论依据,同时为人类肠道营养提供参考。主要通过体外培养猪肠上皮细胞（IPEC-J2）,用等剂量浓度（2.5mM）的Ala-Gln和Gly-Gln替代DMEM-F12培养基中的Gln,采用Edu掺入法、流式细胞分析、同位素示踪、RT-PCR、Western Blot等方法和技术研究谷氨酰胺二肽对细胞增殖、小肽转运载体表达、蛋白质周转及相关信号通路的调控作用。结果表明：体外培养的肠上皮细胞中,与Gln相比,Ala-Gln对细胞增殖和周期均无显着影响,Gly-Gln抑制了细胞增殖；Ala-Gin促进了小肽转运载体PepTl基因表达水平,但对其转录因子Sp1无显着影响；Ala-Gln处理组细胞蛋白质周转与Gln处理组差异不显着,但Gly-Gln显着抑制蛋白质合成而促进蛋白质降解; Ala-Gln组细胞mTOR磷酸化水平、4EBP1磷酸化水平和S6K1蛋白质表达水平比Gln处理组细胞均显着升高, Gly-Gln处理组肠上皮细胞mTOR、磷酸化mTOR和S6K1蛋白质水平显着低于其他处理组细胞; Ala-Gln处理组细胞UBE3B mRNA的表达量显着高于Gln组,而Gly-Gln处理组细胞UBE3B mRNA的表达水平与Gin处理组差异不显着。以上结果提示,在体外培养的肠上皮细胞中,Ala-Gln可以替代Gln,发挥促进细胞增殖和蛋白质合成的作用。
贺光祖,谭碧娥,肖昊,印遇龙,方俊[6]（2015）在《肠道小肽吸收利用机制及其营养功能》文中进行了进一步梳理小肽是动物降解蛋白质过程中的中间产物,是由2个或2个以上的氨基酸以肽键相连的化合物,其吸收在总饲粮蛋白质的吸收中有重要作用。本文综述肠道对小肽的吸收利用及其调控机制,肠道小肽感应与胃肠激素分泌和摄食调控,肠道小肽利用对肠道健康的调控,以及小肽在动物营养中的应用。
叶亚玲[7]（2014）在《Ala-Gln对断奶仔猪体液免疫及肠黏膜细胞免疫的调控作用》文中研究表明本研究以21日龄早期断奶仔猪为试验对象，研究了Ala-Gln对仔猪体液免疫及肠黏膜细胞免疫的调节作用，并以仔猪小肠上皮细胞（IPEC-1）为模型探讨了Ala-Gln对仔猪小肠上皮细胞增殖与凋亡的调控机制。试验一：Ala-Gln对断奶仔猪外周血细胞因子、免疫器官细胞因子及T淋巴细胞亚群的调节作用本试验采用单因子试验设计，选用遗传背景和体重相近（6.7±0.9kg）、21±2日龄断奶的长白×大白去势仔猪100头，按完全随机区组设计分为4处理，每个处理设5个重复，每个重复5头仔猪。各处理仔猪饲粮为在基础饲粮基础上分别添加0%、0.15%、0.30%和0.45%Ala-Gln。试验期为21d。于试验第7、14、21d从每个重复随机选取1头接近平均体重的仔猪进行前腔静脉采血并屠宰。采集外周血液及免疫器官用于测定细胞因子含量和外周T淋巴细胞亚群分布表达以探讨Ala-Gln对断奶仔猪体液免疫的影响。结果显示，（1）饲粮中添加0.15%、0.30%Ala-Gln提高了仔猪断奶后第7d血液中ALB、TP、免疫球蛋白IgA、IgG的含量（P<0.05），降低了COR的含量（P<0.05）；0.30%Ala-Gln组仔猪在断奶后第14d TP、IgA、IgG含量也显着高于对照组（P<0.05），COR的含量则低于对照组（P<0.05）；（2）饲粮中添加不同水平的Ala-Gln均可显着降低血清中细胞因子IL-6水平（P<0.05）；断奶后第7、14d，0.30%Ala-Gln显着提高了仔猪IL-2、TNF-α水平，0.15%Ala-Gln显着降低IL-5的水平（P<0.05）；在断奶后第21d，IL-5水平随Ala-Gln添加量呈二次曲线变化规律，0.45%Ala-Gln组IL-5显着高于对照组（P<0.05）。此外，0.30%Ala-Gln使仔猪脾脏、胸腺中IL-10水平大幅提高（P<0.05），而各Ala-Gln添加组脾脏、胸腺中的TNF-α水平显着低于对照组（P<0.05）。（3）Ala-Gln可在一定程度上增加外周血T淋巴细胞亚群CD4+表达并降低CD8+的表达。各试验处理组仔猪在断奶后第7dCD4+/CD8+比值显着高于对照组（P<0.05）。0.45%Ala-Gln在断奶后第14、21天显着提高仔猪CD4+/CD8+比值（P<0.05）。由此可知，Ala-Gln可提高仔猪血液中免疫球蛋白、抗炎因子的水平同时降低炎性因子的水平，增强仔猪的免疫功能，进而缓解早期断奶应激。试验二：Ala-Gln对断奶仔猪小肠黏膜固有层SIgA浆细胞数量、SIgA及黏膜中细胞因子的含量的影响试验设计同试验一。于试验第7、14、21d，从每个重复选取1头接近平均体重的仔猪屠宰。采集小肠肠段、小肠黏膜以分析小肠黏膜固有层SIgA浆细胞表达及SIgA、黏膜中细胞因子的含量。结果显示，（1）饲粮中添加0.15%0.45%Ala-Gln均显着提高仔猪断奶后第7、14、21d十二指肠以及空肠黏膜固有层SIgA浆细胞数量（P<0.05），尤其是0.30%Ala-Gln组仔猪在断奶第14d空肠SIgA浆细胞数比对照组增加22.6%（P<0.05）。在回肠段，0.30%Ala-Gln显着提高断奶后第7、14d仔猪SIgA细胞数（P<0.05）。（2）断奶仔猪空肠黏膜SIgA含量随着Ala-Gln添加量呈二次曲线增长规律。在断奶后第7天，0.30%Ala-Gln组仔猪SIgA含量与对照组相比极显着提高了70.4%（P<0.01）。在断奶后第14、21天，0.15%Ala-Gln和0.30%Ala-Gln显着提高了SIgA的分泌量（P<0.05）。（3）饲粮中Ala-Gln添加0.15%和0.30%可显着性提高仔猪早期断奶后第7天黏膜细胞因子IL-2、IL-5的水平（P<0.05）；随着日粮中Ala-Gln添加量的增加，各组IL-6的含量呈线性增长趋势，且显着高于对照组（P<0.05）。黏膜TNF-α含量在试验第7、21d随Ala-Gln添加呈线性降低变化，以0.30%和0.45%添加组最低（P<0.05）。由此说明，饲粮中添加适量Ala-Gln可提高肠黏膜固有层SIgA浆细胞数量，黏膜SIgA分泌量及IL-2、IL-6含量，降低TNF-α水平，增强黏膜免疫应答，提高断奶仔猪肠道黏膜细胞免疫。试验三：Ala-Gln对仔猪小肠上皮细胞凋亡的影响本试验以仔猪小肠上皮细胞（IPEC-1）为体外细胞模型，在营养性缺乏Gln条件下体外培养IPEC-1细胞以模拟断奶应激。经含0、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0mMAla-Gln的培养基处理IPEC-1后，用流式细胞仪分析测定IPEC-1的凋亡率，采用Western Blot方法检测Caspase－3激活产物和抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达量，以探讨Ala-Gln对仔猪小肠上皮细胞凋亡的影响及其作用机理。结果显示，（1）各Ala-Gln处理组中IPEC-1细胞凋亡率均显着低于对照组（P<0.05）。随着Ala-Gln添加量的增加，IPEC-1细胞凋亡率表现为先降低后增加的规律，当Ala-Gln的浓度为1.0mM和2.0mM时，IPEC-1细胞凋亡率最低，显着低于对照组（P<0.05），但两处理组之间差异不显着（P>0.05）。（2）经Western Blot未检测到Caspase－3激活产物和Bcl-2的表达。
朱青[8]（2010）在《谷氨酰胺二肽对镜鲤生长、肠道发育及非特异性免疫的影响》文中提出谷氨酰胺（Glutamine,Gln）是机体一些快速分裂细胞的主要能量来源,在维持肠道和免疫系统的正常形态和功能方面有着重要的作用。大量研究证实,补充Gln有助于减少机体的蛋白质分解,改善体内氮平衡,提高机体的抗氧化能力。然而Gln不耐高温,稳定性较差,并且水中溶解度低,这些缺陷可被谷氨酰胺肽克服（Gln peptide）。为探讨不同水平的外源丙氨酰谷氨酰胺（Ala-Gln）对德国镜鲤幼鱼生长、肠道发育、抗氧化力及免疫性能的影响,试验选择体重为12.97±0.18 g健康德国镜鲤幼鱼360尾,随机分成6组,每组设3个重复,每个重复20尾,分别饲喂添加0%, 0.25%, 0.5%, 0.75%, 1.0%和1.5% Ala-Gln的饲料,试验期12周。试验结果如下:⑴日粮添加Ala-Gln能够显着提高增重率（WGR）、蛋白质效率（PER）、蛋白质沉积率（PPV）、鱼体粗蛋白含量及饲料效率（FE）（P<0.05）。表明,添加Ala-Gln促进鱼体蛋白的沉积,促进生长。⑵日粮添加Ala-Gln能显着提高肠Na+, K+-ATP酶（Na+, K+-ATPase）活性、肠蛋白酶活性、肠淀粉酶活性、肠脂肪酶活性、肠皱襞高度、肠道相对重量及肠道相对长度、肝胰脏指数、肝胰脏蛋白含量（P<0.05）。表明,添加Ala-Gln能够促进消化器官的发育,提高消化吸收力。⑶日粮添加Ala-Gln能显着提高肠道和肌肉谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）活性,提高血清、肠道及肌肉超氧化物歧化酶（SOD）活性、还原性谷胱甘肽（GSH）水平,显着降低丙二醛（MDA）含量（P<0.05）。表明,添加Ala-Gln能够提高鱼体的抗氧化能力。⑷日粮添加Ala-Gln能显着提高血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、补体C3、C4水平及溶菌酶（LSZ）活性（P<0.05）,但对血清谷丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶（GOT）及碱性磷酸酶（AKP）活性无影响（P>0.05）。表明,添加Ala-Gln提高鱼体非特异性免疫力,提高鱼体的抗病力。综合试验的结果说明:Ala-Gln能够提高幼镜鲤的生长性能,促进肠道生长发育,提高肠道消化酶活性;Ala-Gln通过提高组织的GPX和SOD活性、增强GSH水平提高鱼体的抗氧化能力;Ala-Gln通过提高血清补体C3、C4含量和血清LSZ活性提高鱼体非特异性免疫力。结果表明,日粮中添加一定量的Ala-Gln能够显着提高幼镜鲤生长性能、抗氧化能力、免疫性能、促进肠道发育。综合生长性能与免疫性能,Ala-Gln推荐添加量为0.75%。
郎淑妮,雷奇[9]（2009）在《谷氨酰胺二肽在动物营养中的生理作用及其在仔猪生产中的应用前景》文中提出早期断奶（Early Weaning,EW）的仔猪,由于仔猪自身的生长发育系统尚未健全,加上环境、日粮、心理等的改变,生理功能会发生很大的变化,因此,断奶仔猪常出现精神状态不佳,食欲降低,消化不良,饲料利用率低,生长迟缓,免疫力下降和易患腹泻等所谓"仔猪早期断奶综合症"。为了解决仔猪早期断奶后出现的问题,国内外的营养学家对这一问题做了大量研究,添加甘氨酰-谷氨酰胺二肽（Glycyl-Glutamine,Gly-Gln）可改善断奶仔猪肠道的发育和免疫功能。本文在此基础上,较系统地阐述了谷氨酰胺二肽在动物营养中的生理作用及其在仔猪生产中的应用前景,为合理配制早期断奶仔猪日粮,提高饲料转化率,降低仔猪断奶后腹泻的发生率和死亡率,增强机体的免疫能力提供理论依据。
王海军[10]（2008）在《过度训练对大鼠肠道免疫功能的影响及谷氨酰胺、大豆多肽的干预作用》文中提出目的:建立大鼠过度训练的模型,探讨过度训练对肠道免疫功能的影响及其机制。并在运动训练的同时,补充谷氨酰胺或大豆多肽,探讨谷氨酰胺及大豆多肽对过度训练大鼠肠道免疫功能的干预作用及其机制。方法:实验大鼠随机分为对照组、过度训练组、谷氨酰胺干预组、大豆多肽干预组。过度训练组大鼠进行每周6次,共9周的力竭性运动训练。谷氨酰胺干预组和大豆多肽干预组大鼠,在大负荷运动之前,分别以500mg/kgBW剂量的补充大豆多肽和1.5g /kgBW剂量补充谷氨酰胺。9周后,检测各组大鼠小肠组织SOD、MDA、Gln、sIgA的含量及小肠CD4+、CD8+T细胞数量和大鼠血清T、C、Hb的含量。结果:①与对照组比较,过度训练组大鼠血清睾酮浓度、T/C比值显着降低,血清皮质酮浓度显着升高,血液中Hb、WBC数量显着降低;补充Gln显着升高大鼠Hb、血睾酮浓度、T/C比值,显着降低血清皮质酮浓度;补充SPI显着升高大鼠Hb、血睾酮浓度、T/C比值。②与对照组比较,过度训练组大鼠小肠组织中sIgA含量、CD4+T细胞数量、CD4+/CD8+比值显着下降,小肠CD8+T细胞数量显着升高;且小肠中SOD活性、Gln含量显着下降,MDA含量显着升高。③与过度训练组相比,Gln干预组小肠组织中sIgA的含量、CD4+T细胞数量、CD4+/CD8+的比值显着升高,CD8+T细胞数量显着降低;虽然SOD活性没有显着性变化,大鼠小肠组织中MDA含量显着降低。④与过度训练组相比,SPI干预组大鼠虽然小肠组织中sIgA含量没有显着差异,但CD4+ T细胞数量、CD4+/CD8+的比值显着升高,CD8+T细胞的数量显着降低;且小肠SOD活性显着升高,小肠MDA含量显着降低。结论:①本研究所建立的大鼠过度训练模型是成功的,在训练过程中补充Gln或SPI可以有效地防止过度训练的发生。②过度训练导致大鼠肠道免疫功能显着下降;过度训练时大鼠小肠Gln水平下降和自由基代谢的增强,可能是过度训练引起肠道免疫功能降低的主要机制。③补充Gln可改善长期大负荷运动训练大鼠肠道免疫功能;Gln的补充防止训练大鼠小肠组织中Gln含量的降低,MDA含量的升高,可能是补充Gln防止训练大鼠肠道免疫功能下降的主要机制。④补充SPI可显着改善长期大负荷运动训练大鼠肠道免疫功能;补充SPI使训练大鼠小肠组织中MDA含量的降低,SOD含量的升高,可能是SPI补充防止训练大鼠肠道免疫功能下降的主要机制。
二、谷氨酰胺二肽对生长期大鼠蛋白质代谢的作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、谷氨酰胺二肽对生长期大鼠蛋白质代谢的作用（论文提纲范文）
（1）亮氨酸-亮氨酸肽介导的肉仔鸡小肠上皮细胞调控通路研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| SUMMARY |
| 中英文缩略表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 小肽的转运吸收机制 |
| 1.1 小肽转运载体 |
| 1.2 单胃动物小肽的吸收机制 |
| 1.3 小肽吸收的特点 |
| 2 小肽的生物学功能 |
| 2.1 抗菌、增强机体免疫力 |
| 2.2 抗氧化作用 |
| 2.3 维护肠道健康 |
| 2.4 促进蛋白质的合成 |
| 2.5 促进矿物质的吸收 |
| 2.6 生理调节作用 |
| 3 小肽在动物生产上的应用 |
| 3.1 小肽在反刍动物上的应用 |
| 3.2 小肽在猪生产中的应用 |
| 3.3 小肽在家禽生产当中的应用 |
| 3.4 小肽在水产动物中的应用 |
| 4 研究目的意义及内容 |
| 5 技术路线 |
| 第二章 亮氨酸-亮氨酸肽对体外培养肉仔鸡IEC生长、增殖和凋亡的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验耗材及主要仪器 |
| 1.2 试验设计 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.3.1 完全培养基及试剂配制 |
| 1.3.2 细胞培养 |
| 1.3.3 原代细胞免疫荧光鉴定 |
| 1.3.4 细胞生长曲线绘制 |
| 1.3.5 细胞分裂指数 |
| 1.3.6 细胞克隆形成率计算 |
| 1.3.7 细胞活力测定 |
| 1.3.8 细胞周期和细胞凋亡测定 |
| 1.4 数据分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 鸡原代IEC鉴定结果 |
| 2.2 IEC生长曲线 |
| 2.3 细胞分裂指数 |
| 2.4 细胞活力与克隆形成率测定 |
| 2.5 细胞凋亡测定 |
| 2.6 细胞周期测定 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 亮氨酸-亮氨酸肽对体外培养肉仔鸡IEC差异基因表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验耗材及主要仪器 |
| 1.2 试验设计 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.3.1 完全培养基配制 |
| 1.3.2 细胞培养 |
| 1.3.3 样品采集 |
| 1.3.4 细胞总RNA提取 |
| 1.3.5 转录组测序 |
| 1.3.6 测序数据质量评估 |
| 1.3.7 参考基因组比对 |
| 1.3.8 差异基因分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 测序质控数据概述 |
| 2.2 参考基因组比对 |
| 2.3 基因表达水平分析 |
| 2.4 小肽对体外培养肉仔鸡IEC基因表达的影响 |
| 2.5 差异表达基因KEGG富集分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四章 亮氨酸-亮氨酸肽对体外培养肉仔鸡IEC中差异蛋白表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验耗材及主要仪器 |
| 1.2 试验设计 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.3.1 完全培养基配制 |
| 1.3.2 细胞培养 |
| 1.3.3 试验处理及试验设计 |
| 1.3.4 样品采集 |
| 1.4 蛋白组学研究 |
| 1.4.1 蛋白抽提检测及定量 |
| 1.4.2 SDS-PAGE电泳 |
| 1.4.3 肽段酶解 |
| 1.4.4 质谱分析鉴定 |
| 1.4.5 下机数据分析 |
| 1.5 生物信息学分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 蛋白组学定性结果 |
| 2.2 蛋白鉴定结果 |
| 2.3 蛋白质定量结果分析 |
| 2.4 差异表达蛋白KEGG通路富集分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第五章 全文总结与展望 |
| 1 全文总结 |
| 2 创新点和有待解决问题 |
| 2.1 本试验创新点 |
| 2.2 有待解决问题 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 在读期间发表论文和研究成果等 |
| 导师简介 |
（2）桑叶魔芋复配粉干预老年小鼠动物源性高蛋白膳食消化代谢作用及机理研究（论文提纲范文）
| 缩写词表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 人口老龄化的研究进展 |
| 1.1.1 人口老龄化现状 |
| 1.1.2 老年人群身体状况及饮食健康问题 |
| 1.1.3 老年人消化道结构的变化 |
| 1.1.4 蛋白质对老年健康的重要性 |
| 1.2 蛋白质体内消化代谢途径及影响因素 |
| 1.2.1 蛋白质体内消化代谢途径 |
| 1.2.2 影响蛋白质体内代谢的因素 |
| 1.2.3 蛋白质代谢的评价方法 |
| 1.3 膳食纤维及桑叶粉魔芋粉复配的性能研究 |
| 1.3.1 膳食纤维 |
| 1.3.2 桑叶粉、魔芋粉复配 |
| 第2章 引言 |
| 2.1 立题的依据及意义 |
| 2.2 主要研究内容 |
| 2.3 预期达到的目的 |
| 2.4 研究的技术路线 |
| 第3章 复配粉对高蛋白膳食老年小鼠蛋白质代谢作用的影响 |
| 3.1 材料与设备 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 试验试剂 |
| 3.1.3 试验仪器 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 复配粉的制备 |
| 3.2.2 牛肉蛋白粉和鱼肉蛋白粉的制备 |
| 3.2.3 饲料的配制 |
| 3.2.4 老年小鼠的选择 |
| 3.2.5 动物分组及干预 |
| 3.2.6 实验动物一般情况观察 |
| 3.2.7 样品收集 |
| 3.2.8 脏器指数计算 |
| 3.2.9 盲肠内容物、粪便的pH值和含水量测定 |
| 3.2.10 体内消化率的测定 |
| 3.2.11 血清生化指标检测 |
| 3.2.12 小鼠粪便上清代谢组学鉴定 |
| 3.2.13 粪便中多肽序列的鉴定 |
| 3.2.14 数据统计与分析 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 动物一般情况 |
| 3.3.2 复配粉对高蛋白膳食老年小鼠摄食量的影响 |
| 3.3.3 复配粉对高蛋白膳食老年小鼠体重的影响 |
| 3.3.4 复配粉对高蛋白膳食老年小鼠脏器指数的影响 |
| 3.3.5 复配粉对高蛋白膳食老年小鼠粪便、盲肠内容物含水量及pH值的影响 |
| 3.3.6 复配粉对高蛋白膳食老年小鼠蛋白质表观消化率的影响 |
| 3.3.7 血清生化指标测定结果 |
| 3.3.8 小鼠粪便上清代谢组学鉴定结果 |
| 3.3.9 粪便中多肽的鉴定结果 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 复配粉对高蛋白膳食老年小鼠胃及肠道组织形态的影响 |
| 4.1 材料与设备 |
| 4.1.1 试验材料 |
| 4.1.2 试验试剂 |
| 4.1.3 试验仪器 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 饲料配制及动物分组 |
| 4.2.2 样品收集 |
| 4.2.3 小肠质构测定 |
| 4.2.4 胃、小肠、大肠切片观察及小肠组织结构测量 |
| 4.2.5 血清细胞因子检测 |
| 4.2.6 血清脂多糖结合蛋白检测 |
| 4.2.7 盲肠内容物短链脂肪酸测定 |
| 4.2.8 数据统计与分析 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 复配粉对高蛋白膳食老年小鼠小肠质构的影响 |
| 4.3.2 复配粉对高蛋白膳食老年小鼠胃组织结构的影响 |
| 4.3.3 复配粉对高蛋白膳食老年小鼠小肠组织形态的影响 |
| 4.3.4 复配粉对高蛋白膳食老年小鼠大肠组织形态的影响 |
| 4.3.5 血清细胞因子测定结果 |
| 4.3.6 血清脂多糖结合蛋白测定结果 |
| 4.3.7 复配粉对高蛋白膳食老年小鼠盲肠内容物SCFA的影响 |
| 4.4 本章小结 |
| 第5章 复配粉对高蛋白膳食老年小鼠肠道酶活性的影响及分子机制 |
| 5.1 材料与设备 |
| 5.1.1 试验材料 |
| 5.1.2 实验试剂 |
| 5.1.3 试验仪器 |
| 5.2 试验方法 |
| 5.2.1 动物饲养 |
| 5.2.2 样品收集 |
| 5.2.3 KEGG通路分析 |
| 5.2.4 胃和小肠内容物酶活性测定 |
| 5.2.5 RT-qPCR测定 |
| 5.2.6 Western blot分析 |
| 5.2.7 数据分析 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 KEGG通路分析 |
| 5.3.2 复配粉对高蛋白膳食老年小鼠胃和肠道酶活性的影响 |
| 5.3.3 APN、PepT1、GDH mRNA表达 |
| 5.3.4 APN、PepT1、GDH蛋白的表达 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 本章小结 |
| 第6章 复配粉对高蛋白膳食老年小鼠肠道菌群的影响 |
| 6.1 材料与设备 |
| 6.1.1 试验材料 |
| 6.1.2 试验试剂 |
| 6.1.3 试验仪器 |
| 6.2 试验方法 |
| 6.2.1 实验动物分组及干预 |
| 6.2.2 样品收集 |
| 6.2.3 肠道菌群16SrRNA序列的测定 |
| 6.2.4 数据统计分析 |
| 6.3 结果与分析 |
| 6.3.1 OTU聚类分析 |
| 6.3.2 各组样本微生物多样性差异分析 |
| 6.3.3 群落结构分析 |
| 6.3.4 代谢组学和微生物组学联合分析 |
| 6.4 本章小结 |
| 第7章 结论与展望 |
| 7.1 结论 |
| 7.2 创新点 |
| 7.3 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间的研究成果 |
| 附录 |
（3）酶解大豆蛋白对生长中期草鱼生长性能和肌肉品质的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略符号表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.前言 |
| 2.文献综述 |
| 2.1 鱼类日粮蛋白水平降低的必要性 |
| 2.2 低蛋白日粮对鱼类生长性能和肉质的影响 |
| 2.3 酶解蛋白 |
| 2.4 酶解蛋白对鱼类生长性能的影响 |
| 2.5 酶解蛋白对鱼类肌肉品质的影响 |
| 2.6 酶解蛋白对鱼类肌肉抗氧化能力的影响 |
| 2.7 酶解蛋白对鱼类肌纤维发育的影响 |
| 3.存在问题 |
| 第二章 研究的目的与意义 |
| 1.研究目的 |
| 2.研究意义 |
| 3.技术路线 |
| 第三章 试验研究 |
| 试验一 酶解大豆蛋白对生长中期草鱼生长性能和肌肉品质的影响 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 酶解大豆蛋白的制备 |
| 2.2 试验设计 |
| 2.3 试验饲粮配方 |
| 2.4 饲养管理 |
| 2.5 样品采集与指标测定 |
| 2.6 数据处理和统计分析 |
| 3.试验结果 |
| 3.1 酶解大豆蛋白对生长中期草鱼生长性能的影响 |
| 3.2 酶解大豆蛋白对生长中期草鱼肌肉品质的影响 |
| 4.讨论 |
| 4.1 低蛋白日粮对生长中期草鱼生长性能和肌肉品质的影响 |
| 4.2 低蛋白日粮中添加酶解大豆蛋白对生长中期草鱼生长性能的影响 |
| 4.3 低蛋白日粮中添加酶解大豆蛋白对生长中期草鱼肌肉品质的影响 |
| 4.4 达到28%CP日粮效果的酶解大豆蛋白添加量以及最适酶解大豆蛋白添加量 |
| 5.小结 |
| 试验二 酶解大豆蛋白对生长中期草鱼肌肉抗氧化能力的影响及作用机制 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 酶解大豆蛋白对生长中期草鱼肌肉抗氧化能力的影响及可能机制 |
| 2.2 生长中期草鱼肌肉中酶解蛋白效应物(Glu-Tyr和Ala-Phe二肽)含量的测定 |
| 2.3 酶解蛋白效应物(Glu-Tyr和Ala-Phe二肽)对草鱼肌管细胞抗氧化能力的影响及作用机制 |
| 3.试验结果 |
| 3.1 酶解大豆蛋白对生长中期草鱼肌肉抗氧化能力的影响 |
| 3.2 酶解大豆蛋白对生长中期草鱼肌肉中酶解蛋白效应物(Glu-Tyr和Ala-Phe二肽)含量的影响 |
| 3.3 酶解大豆蛋白效应物(Glu-Tyr和Ala-Phe二肽)对草鱼肌管细胞抗氧化能力的影响 |
| 4.讨论 |
| 4.1 酶解大豆蛋白对生长中期草鱼肌肉抗氧化能力的影响及可能机制 |
| 4.2 生长中期草鱼肌肉中酶解大豆蛋白效应物(Glu-Tyr和Ala-Phe二肽)含量 |
| 4.3 酶解大豆蛋白效应物(Glu-Tyr和Ala-Phe二肽)对草鱼肌管细胞抗氧化能力的影响及作用机制 |
| 5.小结 |
| 试验三 酶解大豆蛋白对生长中期草鱼肌纤维发育的影响及作用机制 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 酶解大豆蛋白对生长中期草鱼肌纤维组织学特性和肌纤维发育相关基因、蛋白表达的影响 |
| 2.2 酶解大豆蛋白效应物(Glu-Tyr和Ala-Phe二肽)对草鱼成肌细胞增殖和分化的影响及作用机制 |
| 2.3 酶解大豆蛋白效应物(Glu-Tyr和Ala-Phe二肽)对草鱼成肌细胞蛋白质合成的影响及作用机制 |
| 3.试验结果 |
| 3.1 酶解大豆蛋白对生长中期草鱼肌纤维组织学特性和肌纤维发育相关基因、蛋白表达的影响 |
| 3.2 酶解大豆蛋白效应物(Glu-Tyr和Ala-Phe二肽)对草鱼成肌细胞增殖和分化的影响 |
| 3.3 酶解大豆蛋白效应物(Glu-Tyr和Ala-Phe二肽)对草鱼成肌细胞蛋白质合成和降解的影响 |
| 4.讨论 |
| 4.1 酶解大豆蛋白对生长中期草鱼肌纤维组织学特性和肌纤维发育相关基因、蛋白表达的影响 |
| 4.2 酶解大豆蛋白效应物(Glu-Tyr和Ala-Phe二肽)对草鱼成肌细胞增殖和分化的影响及作用机制 |
| 4.3 酶解大豆蛋白效应物(Glu-Tyr和Ala-Phe二肽)对草鱼成肌细胞蛋白质合成的影响及作用机制 |
| 5.小结 |
| 第四章 全文总结和结论、创新点及有待进一步研究的问题 |
| 1.全文总结和结论 |
| 2.本研究的创新点 |
| 3.有待进一步研究的问题 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（4）重组微生物全细胞催化高效合成丙谷二肽（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要符号表 |
| 引言 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 L-谷氨酰胺 |
| 1.1.1 理化性质 |
| 1.1.2 代谢及生理功能 |
| 1.1.3 局限性及替代物 |
| 1.2 丙谷二肽 |
| 1.2.1 理化性质及应用优势 |
| 1.2.2 合成方法及研究进展 |
| 1.2.3 检测方法 |
| 1.3 异源表达系统介绍 |
| 1.3.1 大肠杆菌原核表达系统 |
| 1.3.2 酿酒酵母真核表达系统 |
| 1.3.3 毕赤酵母真核表达系统 |
| 1.4 糖基化修饰 |
| 1.4.1 N-糖基化修饰 |
| 1.4.2 O-糖基化修饰 |
| 1.5 本文主要研究思路 |
| 1.5.1 选题背景及存在问题 |
| 1.5.2 研究内容及技术路线 |
| 2 异源表达SsAet重组大肠杆菌高效合成Ala-Gln |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 菌株和质粒 |
| 2.2.2 试剂和仪器 |
| 2.2.3 培养基和溶液 |
| 2.2.4 引物 |
| 2.2.5 分子操作技术 |
| 2.2.6 分析验证方法 |
| 2.2.7 异源表达SsAet重组大肠杆菌的构建 |
| 2.2.8 异源表达SsAet重组大肠杆菌诱导条件的优化 |
| 2.2.9 全细胞催化合成Ala-Gln反应条件的优化 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 Ala-Gln定性定量方法的确立 |
| 2.3.2 异源表达SsAet重组大肠杆菌的表征 |
| 2.3.3 可溶性表达SsAet重组大肠杆菌的构建及筛选 |
| 2.3.4 OPA催化方式及催化活性差异性的分析 |
| 2.3.5 OPA诱导条件和全细胞催化反应条件的优化 |
| 2.3.6 循环利用OPA全细胞合成Ala-Gln |
| 2.4 本章小结 |
| 3 表面展示SsAet重组酿酒酵母合成Ala-Gln |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 菌株和质粒 |
| 3.2.2 试剂和仪器 |
| 3.2.3 培养基和溶液 |
| 3.2.4 引物 |
| 3.2.5 分子操作技术 |
| 3.2.6 分析验证方法 |
| 3.2.7 表面展示SsAet重组酿酒酵母的构建 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 表面展示方式对SsAet催化活性的影响 |
| 3.3.2 密码子优化对SsAet催化活性的影响 |
| 3.3.3 表面展示SsAet重组酿酒酵母的絮凝化 |
| 3.4 本章小结 |
| 4 糖基化修饰对SsAet结构和催化活性的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 菌株和质粒 |
| 4.2.2 试剂和仪器 |
| 4.2.3 培养基和溶液 |
| 4.2.4 引物 |
| 4.2.5 分子操作技术 |
| 4.2.6 分析验证方法 |
| 4.2.7 异源表达SsAet重组毕赤酵母的构建 |
| 4.2.8 产酶条件和催化反应条件的优化 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 异源表达SsAet重组毕赤酵母的表征 |
| 4.3.2 糖基化修饰对SsAet催化活性的影响 |
| 4.3.3 糖基化修饰的鉴定及对SsAet结构的影响 |
| 4.4 本章小结 |
| 5 胞内表达SsAet重组酿酒酵母的自固定化及高效合成Ala-Gln |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 菌株和质粒 |
| 5.2.2 试剂和仪器 |
| 5.2.3 培养基和溶液 |
| 5.2.4 引物 |
| 5.2.5 分子操作技术 |
| 5.2.6 分析验证方法 |
| 5.2.7 胞内表达SsAet重组酵母的构建 |
| 5.2.8 胞内表达SsAet重组酵母培养条件的优化 |
| 5.2.9 胞内表达SsAet重组酵母全细胞催化反应条件的优化 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 胞内表达SsAet重组酵母的催化活性 |
| 5.3.2 胞内表达SsAet重组酵母的条件优化 |
| 5.3.3 胞内表达SsAet重组酵母的自固定化及重复利用 |
| 5.4 本章小结 |
| 6 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 创新点 |
| 6.3 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 作者简介 |
| 攻读博士学位期间科研项目及科研成果 |
| 致谢 |
（5）谷氨酰胺二肽对猪肠上皮细胞更新和蛋白质代谢的调控研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1 肠道小肽吸收利用机制 |
| 1.1 小肽转运途径 |
| 1.2 肽转运载体PepT1特性和调控 |
| 1.3 小肽的代谢 |
| 2 肠道小肽感应与胃肠激素分泌和摄食调控 |
| 3 小肽吸收利用与肠道健康 |
| 4 小肽在动物营养中应用 |
| 4.1 小肽在动物营养中的应用 |
| 4.2 Gln二肽在医学临床上的应用 |
| 5 展望 |
| 6 研究目的与意义 |
| 第二章 谷氨酰胺二肽对猪肠上皮细胞增殖的调控 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 数据分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 细胞增殖 |
| 2.2 细胞周期 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第三章 谷氨酰胺二肽对肠上皮细胞小肽转运载体的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 数据分析 |
| 2 结果与分析 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第四章 谷氨酰胺二肽对肠上皮细胞蛋白质代谢的调控 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 蛋白质周转 |
| 1.2.2 RT-PCR检测 |
| 1.2.3 Western Blot分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 谷氨酰胺二肽对肠上皮细胞蛋白质周转的影响 |
| 2.2 谷氨酰胺二肽对肠上皮细胞mTOR信号通路的影响 |
| 2.3 谷氨酰胺二肽对肠上皮细胞泛素蛋白酶体途径的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 蛋白质周转代谢研究 |
| 3.2 谷氨酰胺二肽对蛋白质代谢相关信号通路影响研究 |
| 4 结论 |
| 第五章 研究结论 |
| 参考文献 |
| 附录A 蛋白周转检测试剂配置 |
| 附录B 英文简写词表 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（6）肠道小肽吸收利用机制及其营养功能（论文提纲范文）
| 1肠道小肽吸收利用机制 |
| 1.1肽转运载体小肽转运蛋白1(peptidetransporter1,PepT1)特性和调控 |
| 1.2小肽转运途径 |
| 1.3小肽的代谢 |
| 2肠道小肽感应与胃肠激素分泌和摄食调控 |
| 3小肽吸收利用与肠道健康 |
| 4小肽在动物营养中的应用 |
| 5小结 |
（7）Ala-Gln对断奶仔猪体液免疫及肠黏膜细胞免疫的调控作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩写词表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 研究的目的与意义 |
| 2 国内外研究现状 |
| 2.1 仔猪的免疫机制 |
| 2.1.1 仔猪肠道黏膜免疫 |
| 2.1.2 肠道黏膜屏障功能 |
| 2.1.2.1 分泌型免疫球蛋白 A |
| 2.1.2.2 小肠上皮细胞 |
| 2.2 早期断奶对仔猪免疫机能的影响 |
| 2.2.1 早期断奶对仔猪免疫系统发育的影响 |
| 2.2.2 早期断奶对仔猪肠道黏膜免疫的影响 |
| 2.2.3 早期断奶对仔猪体液免疫和细胞免疫的影响 |
| 2.3 Gln 及其二肽对断奶仔猪免疫机能影响的研究进展 |
| 2.3.1 Gln 及其二肽对断奶仔猪血液中免疫分子的影响 |
| 2.3.2 Gln 及其二肽对断奶仔猪肠道免疫的影响 |
| 2.3.3 Gln 及其二肽对断奶仔猪细胞因子的影响 |
| 3 技术路线 |
| 第二章 试验研究 |
| 试验一 Ala-Gln 对断奶仔猪外周血细胞因子、免疫器官细胞因子及 T 淋巴细胞亚群的调节作用 |
| 摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验动物和分组 |
| 1.3 试验日粮 |
| 1.4 饲养管理 |
| 1.5 样品采集及预处理 |
| 1.6 测定指标与方法 |
| 1.6.1 血清生化指标 |
| 1.6.2 血清中免疫球蛋白 |
| 1.6.3 血清中细胞因子 |
| 1.6.4 免疫器官指数及其细胞因子 |
| 1.6.4.1 免疫器官指数 |
| 1.6.4.2 免疫器官细胞因子 |
| 1.6.5 外周血 T 淋巴细胞亚群的数量 |
| 2 数据处理与统计分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 饲粮不同水平的 Ala-Gln 对断奶仔猪血液生化指标的影响 |
| 3.2 饲粮不同水平的 Ala-Gln 对断奶仔猪血清免疫球蛋白的影响 |
| 3.3 饲粮不同水平的 Ala-Gln 对断奶仔猪血清细胞因子的影响 |
| 3.4 饲粮不同水平的 Ala-Gln 对断奶仔猪免疫器官指数及其细胞因子含量的影响 |
| 3.5 饲粮不同水平的 Ala-Gln 对断奶仔猪外周血液 T 淋巴细胞亚群数量的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 Ala-Gln 对断奶仔猪血液生化指标的影响 |
| 4.2 Ala-Gln 对断奶仔猪血清免疫球蛋白的影响 |
| 4.3 Ala-Gln 对断奶仔猪血清和免疫器官细胞因子的影响 |
| 4.4 Ala-Gln 对断奶仔猪外周血液 T 淋巴细胞亚群数量的影响 |
| 试验二 Ala-Gln 对断奶仔猪小肠黏膜固有层 SIgA 浆细胞数量、SIgA 及黏膜中细胞因子含量的影响 |
| 摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验分组及日粮 |
| 1.3 样品采集及预处理 |
| 1.4 测定指标及方法 |
| 1.4.1 小肠黏膜固有层 SIgA 浆细胞数量 |
| 1.4.1.1 常规切片操作 |
| 1.4.1.2 羊抗猪 SIgA 抗体 |
| 1.4.1.3 小肠 SIgA 浆细胞的数量 |
| 1.4.2 小肠黏膜 SIgA 含量 |
| 1.4.3 小肠黏膜细胞因子含量 |
| 2 数据处理与统计分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 饲粮不同水平的 Ala-Gln 对断奶仔猪小肠固有层 SIgA 浆细胞数量的影响 |
| 3.2 饲粮不同水平的 Ala-Gln 对断奶仔猪空肠黏膜中 SIgA 含量的影响 |
| 3.3 饲粮不同水平的 Ala-Gln 对断奶仔猪小肠黏膜细胞因子的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 Ala-Gln 对断奶仔猪小肠固有层 SIgA 浆细胞分布及 SIgA 分泌量的影响 |
| 4.2 Ala-Gln 对断奶仔猪小肠黏膜中细胞因子的影响 |
| 试验三 Ala-Gln 对仔猪小肠上皮细胞凋亡的影响 |
| 摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 主要仪器设备 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.3.1 基础培养液 |
| 1.3.2 试验细胞 |
| 1.3.3 细胞的培养 |
| 1.3.4 IPEC-1 细胞凋亡率检测 |
| 1.3.5 Caspase-3 激活产物和 Bcl-2 的表达量测定 |
| 1.3.5.1 SDS-PAGE 缓冲液 |
| 1.3.5.2 膜蛋白的提取与处理 |
| 1.3.5.3 目的蛋白电泳及 Western-blot |
| 2 数据处理与统计分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 Ala-Gln 对仔猪小肠上皮细胞凋亡的影响 |
| 3.2 Ala-Gln 对仔猪小肠上皮细胞凋亡相关蛋白表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 第三章 本研究的总体结论、创新点及有待进一步解决的问题 |
| 1 总体结论 |
| 2 创新点 |
| 3 有待进一步解决的问题 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附图 |
（8）谷氨酰胺二肽对镜鲤生长、肠道发育及非特异性免疫的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 水生动物消化系统的结构与特点 |
| 1.1.1 水生动物消化道结构 |
| 1.1.2 水生动物消化腺 |
| 1.2 水生动物免疫系统的特点 |
| 1.2.1 免疫组织和器官 |
| 1.2.2 免疫细胞 |
| 1.2.3 体液免疫 |
| 1.3 谷氨酰胺的研究现状 |
| 1.3.1 谷氨酰胺的理化性质 |
| 1.3.2 谷氨酰胺的生物学功能 |
| 1.3.3 谷氨酰胺的代谢 |
| 1.3.4 影响谷氨酰胺代谢的因素 |
| 1.4 谷氨酰胺在动物生产中的应用 |
| 1.4.1 谷氨酰胺对动物生长性能的影响 |
| 1.4.2 谷氨酰胺对动物消化性能的影响 |
| 1.4.3 谷氨酰胺对动物抗氧化性能的影响 |
| 1.4.4 谷氨酰胺对动物免疫性能的影响 |
| 1.5 谷氨酰胺肽的研究状况 |
| 1.5.1 谷氨酰胺肽与谷氨酰胺理化性质的比较 |
| 1.5.2 谷氨酰胺肽的吸收与代谢 |
| 1.5.3 谷氨酰胺与谷氨酰胺肽作用比较 |
| 1.5.4 谷氨酰胺肽在动物生产中的应用 |
| 1.6 谷氨酰胺研究中存在的问题 |
| 1.7 本研究的目的和意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验设计 |
| 2.2 试验材料 |
| 2.2.1 试验药品、试剂及仪器 |
| 2.2.2 试验动物 |
| 2.2.3 试验饲粮 |
| 2.2.4 试验时间及地点 |
| 2.3 试验管理 |
| 2.4 测定项目及方法 |
| 2.4.1 生长性能的测定 |
| 2.4.2 鱼体品质的测定 |
| 2.4.3 肠道形态结构及肝胰脏指数的测定 |
| 2.4.4 肠道消化酶、Na~+, K~+-ATPase 活性及肝胰脏蛋白含量的测定 |
| 2.4.5 血清生化指标及组织抗氧化性能的测定 |
| 2.4.6 血清免疫指标的测定 |
| 2.5 统计方法 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 丙氨酰谷氨酰胺对幼镜鲤生长性能的影响 |
| 3.2 丙氨酰谷氨酰胺对幼镜鲤体组成的影响 |
| 3.3 丙氨酰谷氨酰胺对幼镜鲤肠道结构及肝胰脏的影响 |
| 3.4 丙氨酰谷氨酰胺对幼镜鲤肠道消化酶及Na~+,K~+-ATPase 活性的影响 |
| 3.5 丙氨酰谷氨酰胺对幼镜鲤血清生化指标的影响 |
| 3.6 丙氨酰谷氨酰胺对幼镜鲤血清、肠道及肌肉抗氧化性能的影响 |
| 3.7 丙氨酰谷氨酰胺对幼镜鲤血清非特异性免疫指标的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 丙氨酰谷氨酰胺对幼镜鲤生长性能的影响 |
| 4.2 丙氨酰谷氨酰胺幼镜鲤体组成的影响 |
| 4.3 丙氨酰谷氨酰胺对幼镜鲤肠道结构的影响 |
| 4.4 丙氨酰谷氨酰胺对幼镜鲤肠道消化酶及Na~+,K~+-ATPase 活性的影响 |
| 4.5 丙氨酰谷氨酰胺对幼镜鲤血清生化指标的影响 |
| 4.6 丙氨酰谷氨酰胺对幼镜鲤抗氧化性能的影响 |
| 4.7 丙氨酰谷氨酰胺对幼镜鲤血清非特异性免疫力的影响 |
| 4.8 幼镜鲤饲料中丙氨酰谷氨酰胺适宜添加量 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
（9）谷氨酰胺二肽在动物营养中的生理作用及其在仔猪生产中的应用前景（论文提纲范文）
| 1 甘氨酰谷氨酰胺的理化性质 |
| 2 甘氨酰谷氨酰胺的吸收与代谢 |
| 2.1 甘氨酰谷氨酰胺的吸收 |
| 2.2 甘氨酰谷氨酰胺的代谢 |
| 3 甘氨酰谷氨酰胺的生物学功能 |
| 3.1 甘氨酰谷氨酰胺对蛋白质合成和氮平衡的影响 |
| 3.2 甘氨酰谷氨酰胺对肠道的保护功能 |
| 3.3 甘氨酰谷氨酰胺对机体免疫功能的影响 |
| 3.4 甘氨酰谷氨酰胺对机体抗氧化的影响 |
| 4 甘氨酰谷氨酰胺在动物生产中的应用 |
| 5 结语 |
（10）过度训练对大鼠肠道免疫功能的影响及谷氨酰胺、大豆多肽的干预作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 文献综述 |
| 1 肠道免疫的概述 |
| 1.1 肠道免疫的组成 |
| 1.2 肠道免疫的功能 |
| 2 运动与肠道免疫 |
| 3 运动、谷氨酰胺与肠道免疫 |
| 3.1 谷氨酰胺的组成与生理功能 |
| 3.2 谷氨酰胺与肠道免疫 |
| 3.3 运动与血浆 Gln |
| 3.4 补充Gln 的免疫干预作用 |
| 4 运动、大豆多肽与肠道免疫 |
| 4.1 大豆多肽组成 |
| 4.2 大豆多肽的生理功能 |
| 4.3 大豆多肽与运动 |
| 4.4 大豆多肽与肠道 |
| 5 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验分组 |
| 1.2 运动条件 |
| 1.3 训练方案 |
| 1.4 大豆多肽及其剂量 |
| 1.5 谷氨酰胺及其剂量 |
| 1.6 动物处理 |
| 1.7 指标测定的方法 |
| 1.8 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 实验大鼠的一般表现和体重的变化 |
| 2.2 实验大鼠 T、C、T/C 水平的变化 |
| 2.3 实验大鼠Hb、WBC、MCV 水平的变化 |
| 2.4 实验大鼠肠组织CD4~+、CD8~+T 细胞、CD4~+/CD8~+、sIgA 水平的变化 |
| 2.5 实验大鼠肠组织SOD、MDA、Gln 水平的变化 |
| 3 讨论 |
| 3.1 大鼠过度训练模型的建立及其Gln 和SPI 的干预作用 |
| 3.2 过度训练对大鼠肠道免疫功能的影响 |
| 3.2.1 过度训练对大鼠肠道体液免疫功能的影响 |
| 3.2.2 过度训练对大鼠肠道细胞免疫功能的影响 |
| 3.3 Gln 的补充对过度训练大鼠肠道免疫功能的影响 |
| 3.4 SPI 的补充对过度训练大鼠肠道免疫功能的影响 |
| 3.5 过度训练影响肠道免疫功能的机制及其补充Gln 和SPI 的干预机制 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 致谢 |
| 第四部分 攻读学位期间参加的科研项目和发表论文 |
四、谷氨酰胺二肽对生长期大鼠蛋白质代谢的作用（论文参考文献）
- [1]亮氨酸-亮氨酸肽介导的肉仔鸡小肠上皮细胞调控通路研究[D]. 杜宝龙. 甘肃农业大学, 2021(09)
- [2]桑叶魔芋复配粉干预老年小鼠动物源性高蛋白膳食消化代谢作用及机理研究[D]. 邓利玲. 西南大学, 2020(01)
- [3]酶解大豆蛋白对生长中期草鱼生长性能和肌肉品质的影响及机制研究[D]. 宋燕. 四川农业大学, 2020
- [4]重组微生物全细胞催化高效合成丙谷二肽[D]. 李益民. 大连理工大学, 2020(07)
- [5]谷氨酰胺二肽对猪肠上皮细胞更新和蛋白质代谢的调控研究[D]. 贺光祖. 湖南农业大学, 2015(12)
- [6]肠道小肽吸收利用机制及其营养功能[J]. 贺光祖,谭碧娥,肖昊,印遇龙,方俊. 动物营养学报, 2015(04)
- [7]Ala-Gln对断奶仔猪体液免疫及肠黏膜细胞免疫的调控作用[D]. 叶亚玲. 江西农业大学, 2014(02)
- [8]谷氨酰胺二肽对镜鲤生长、肠道发育及非特异性免疫的影响[D]. 朱青. 东北农业大学, 2010(05)
- [9]谷氨酰胺二肽在动物营养中的生理作用及其在仔猪生产中的应用前景[J]. 郎淑妮,雷奇. 国外畜牧学(猪与禽), 2009(03)
- [10]过度训练对大鼠肠道免疫功能的影响及谷氨酰胺、大豆多肽的干预作用[D]. 王海军. 扬州大学, 2008(02)