一、灵芝多糖和香菇多糖纠正环磷酰胺所致荷瘤小鼠免疫抑制的作用研究（论文文献综述）
杨滨梦[1]（2021）在《HsPc-HA营养液的挤压制备及其功能性研究》文中指出本课题将挤压膨化技术与植物化学物的现代提取分离技术有效结合,建立能够提升Hs Pc-HA营养液中有效组分提率的创新性方法,并将该组分应用于恶性肿瘤的治疗及治疗后期的营养支持。从体内及体外两个方面探讨其作用效果,并从分子水平阐明其作用机理。主要研究内容如下:（1）采用挤压膨化预处理提取有效组分,并以猴头菇为例,确定最佳挤压膨化参数以及挤压膨化预处理对多糖提取率的影响。响应面分析优化结果表明猴头菇多糖最佳挤压膨化预处理提取条件为:螺杆转速400r/min,水分含量16%,挤压温度120℃。经验证,确定在此条件下提取率达到最高可达3.63±0.02%。将有效组分根据对脾淋巴细胞增殖作用效果进行配伍,最终将猴头菇多糖:刺五加多糖:茯苓多糖:白术内酯四种有效组分按照1:1:2:1的比例配置成Hs Pc-HA营养液（Hs Pc-HA）。（2）体外构建IEC-6细胞损伤模型,从细胞水平探讨Hs Pc-HA的作用效果。MTT结果表明1.5mg/m L环磷酰胺（CTX）作用48h时,可以成功构建IEC-6细胞损伤模型。且Hs Pc-HA对于IEC-6细胞的最佳修复率可达47.18±1.23%。细胞划痕实验与HE染色结果显示造模给药培养24h后模型组愈合率为8.20±1.03%,Hs Pc-HA组愈合率可达16.35±1.57%。表明Hs Pc-HA可以促进IEC-6细胞损伤迁移,能够提高细胞损伤愈合率,并能适当提高细胞存活率。（3）皮下接种S180腹水瘤细胞可成功构建荷瘤鼠模型,腹腔注射一周12mg/m L环磷酰胺（CTX）后,可成功构建化疗后荷瘤鼠模型。较模型组（CTX组）相比,灌服Hs Pc-HA后,小鼠体重、摄食量、存活率均有明显提高,CTX组存活率仅有62.5%,给药营养支持后,存活率可达到75%,说明Hs Pc-HA可提高免疫低下荷瘤鼠的存活率,延长放化疗小鼠生存时间。另外,Hs Pc-HA可以有效促进化疗后荷瘤鼠的胃排空率及小肠推进率,提升小鼠胸脾指数,降低小鼠耳肿胀率及肉芽肿抑制率,对化疗后荷瘤鼠表现出一定增强免疫及抗炎功效。HE染色结果发现Hs Pc-HA能够减轻由CTX引起的各组织器官损伤。生化法及ELISA法结果表明Hs Pc-HA能够显着降低化疗后荷瘤鼠血清中天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、总胆红素（TBIL）、尿素氮（BUN）,同时能够提升血清中免疫因子超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、肿瘤坏死因子-ɑ（TNF-α）、白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-8（IL-8）、免疫球蛋白M（Ig M）、免疫球蛋白A（Ig A）含量,达到降低肝肾损伤及调节机体免疫功能的作用。Western Blot法测定了小鼠脾脏组织中核转录因子-кB（NF-кB p65）蛋白含量,阐述其抗炎作用机理。结果表明Hs Pc-HA能够下调化疗后荷瘤鼠脾脏组织中NF-κB P65的蛋白表达量,通过抑制NF-кB信号通路的传导来减轻CTX引起的炎症反应。
孙文静[2]（2021）在《地锦多糖的制备及对小鼠免疫增强活性研究》文中指出多糖是中药的重要组成部分,具有增强免疫、抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、抗衰老、等生物活性。多糖作为免疫增强剂对动物疾病具有增强抵抗力的作用。地锦草在我国分布范围广且药理作用广泛,具有显着的抗氧化、抗肿瘤以及抗菌抗炎的功效,有重要的临床应用和开发价值。本研究选择地锦多糖作为研究对象,从提取纯化、结构鉴定、对淋巴细胞免疫活性、对巨噬细胞功能及对小鼠巨噬细胞的抗氧化等方面初步筛选出3个效果较好的活性部位,进一步研究其体内对免疫抑制小鼠的免疫调节作用。试验Ⅰ地锦多糖的提取纯化采用一步醇沉和分步醇沉法提取粗地锦总多糖(EHPS tc)和各分级多糖EHPS60c、EHPS70c和EHPS80c。然后以脱色率、多糖保留率为指标,采用L25（56）正交设计对双氧水加入量、反应温度、p H值、反应时间等脱色条件进行优选。脱色后EHPStc经DEAE-Sephadex A-25葡聚糖凝胶柱层析,得到纯化的地锦多糖1(EHPStp-1)和地锦多糖2(EHPStp-2),分别用苯酚-硫酸法和考马斯亮兰法测定多糖和蛋白含量。结果表明,EHPStc最优脱色条件为反应温度50℃、反应时间4 h、p H值为2、双氧水加入量4%时,多糖脱色率达到71.10%,保留率为63.31%,多糖含量为74.52%。经柱层析纯化后EHPStp-1糖含量提高为95.36%,EHPStp-2糖含量提高为92.35%。因此可以看出,地锦多糖经过DEAE-Sephadex A-25葡聚糖凝胶柱的洗脱纯化可以显着提高多糖含量;经验证试验发现双氧水脱色工艺有效可行。试验Ⅱ地锦多糖的结构鉴定采用红外光谱法（IR）、紫外光谱法（UVS）、PMP柱前衍生高效液相色谱法（PMP-HPLC）、高效凝胶渗透色谱（HPGPC）法、硫酸咔唑法、刚果红法和核磁共振波谱法（NMR）等方法分析各多糖结构。结果表明,EHPStc和EHPStp-2中可能含有少量蛋白。EHPStc、EHPStp-1和EHPStp-2均符合多糖类物质红外光谱基本特征。EHPStp-1主要包括Glc（83.1%）、Gal（6.1%）、Glc UA（1.6%）;EHPStp-2主要包括Gal（25.6%）、Gal UA（22.2%）、Ara（16.6%）;EHPStc主要包括Glc（53.5%）、Ara（16.8%）、Gal（14.3%）。EHPStc和EHPStp-1的重均分子量分别为26.2和26.0 k Da;EHPStp-2重均分子量分别为145.6 k Da和8.9 k Da。EHPStp-1和EHPStp-2的糖醛酸含量分别为15.9%和27.9%。EHPStc和EHPStp-1均具有明显的三螺旋结构。EHPStp-1存在α构型的单糖;EHPStc存在α和β构型的单糖。经结构鉴定,水提醇沉提取物均为多糖,但多糖结构复杂,要得到具体的结构成分还需进一步检测。试验Ⅲ地锦多糖对淋巴细胞免疫活性的影响将EHPS60c、EHPS70c、EHPS80c、EHPStc、EHPStp-1和EHPStp-2加入到小鼠外周血淋巴细胞培养体系中,用MTT法测定其安全浓度;然后取安全浓度范围内6个多糖,分别单独或协同PHA加入到小鼠外周血淋巴细胞中,培养48 h后,测定淋巴细胞增殖(细胞A570值和最高淋巴细胞增殖率)的变化,筛选增强免疫活性的较好部位;将筛选出的3个多糖在31.25μg/m L时刺激淋巴细胞,分别在24 h、48 h和72 h收集细胞处理后,在流式细胞仪上检测各个时间点的周期分布情况和CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的变化;ELISA法测定免疫球蛋白IgA、IgG和细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IFN-r的含量。结果表明,多糖单独刺激时EHPStp-1在15.625μg/m L时的细胞增殖率最高,为15.099%,其次为EHPStp-2在相同浓度时,达到12.129%;多糖与PHA共同刺激时,EHPStc在15.625μg/m L时的细胞增殖率最高,为23.820%;其次为EHPStp-1在31.25μg/m L时,为20.499%。综合评价,筛选出EHPStc、EHPStp-1和EHPStp-2可能是增强免疫活性的较好部位。细胞周期分布结果表明,与EHPStc相比较,EHPStp-1和EHPStp-2处理细胞48 h和72 h后,SPF值和PI值显着升高。EHPStp-1和EHPStp-2处理细胞48 h后,CD4+、CD8+淋巴细胞百分率显着高于EHPStc对照组。EHPStp-1、EHPStp-2和EHPStc均能显着促进IgA、IgG和IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ的分泌。说明,地锦多糖能够有效提高小鼠淋巴细胞免疫活性,其中EHPStc、EHPStp-1和EHPStp-2免疫增强活性最强。试验Ⅳ地锦多糖对巨噬细胞功能的影响取安全浓度范围内5个浓度的6个多糖,分别单独或协同LPS加入到培养的小鼠腹腔巨噬细胞中,培养48 h后,测定巨噬细胞增殖的变化;检测小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性、NO和iNOS分泌;ELISA法测定细胞因子IL-2、IL-6、IFN-γ、MCP-1、MIP-1?的含量;流式细胞术分析CD14和MHC-II表达。结果表明,多糖单独刺激时EHPStp-1在31.25μg/m L时的细胞增殖率最高,为23.17%;其次为EHPStc,在31.25μg/m L时的细胞增殖率为16.42%;协同LPS刺激巨噬细胞时,EHPStp-1在31.25μg/m L时的细胞增殖率最高,为20.29%;其次为EHPS60c,在31.25μg/m L时的细胞增殖率为17.41%。在31.25～1.953μg/m L时,EHPStc和EHPStp-1促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用最强,且在31.25～15.625μg/m L时,EHPStc促进噬细胞吞噬作用显着强于EHPStp-1。EHPStc、EHPStp-1和EHPStp-2分别在31.25～1.953μg/m L和31.25～3.907μg/m L时,对小鼠腹腔巨噬细胞NO和iNOS分泌功能显着强于其余多糖组。EHPStp-1、EHPStp-2和EHPStc均能显着促进细胞因子的分泌。在31.25～7.813μg/m L时,EHPStp-1组对CD14和MHC-II的表达显着高于EHPStp-2组和BL组。说明,地锦多糖能够有效促进小鼠腹腔巨噬细胞功能,其中EHPStc、EHPStp-1和EHPStp-2免疫增强活性最强。试验Ⅴ地锦多糖对小鼠巨噬细胞的抗氧化作用取安全浓度范围内5个浓度的EHPStc、EHPStp-1和EHPStp-2,加入到培养的小鼠腹腔巨噬细胞中,培养48 h后,ELSIA法测定EHPStc、EHPStp-1和EHPStp-2对小鼠巨噬细胞的SOD、GSH-PX、MDA及MPO含量。结果表明,EHPStc、EHPStp-1和EHPStp-2均可显着提高小鼠SOD酶、GSH-PX酶活性,其中EHPStp-1组地锦多糖SOD酶、GSH-PX酶活力显着高于其他多糖组。EHPStc、EHPStp-1和EHPStp-2在7.813～31.25μg/m L均能显着降低MDA含量,减少体内脂质过氧化程度。EHPStc、EHPStp-1和EHPStp-2作用小鼠巨噬细胞后MPO酶活力均有显着降低。其中31.25μg/m L组MPO酶活力显着低于其他多糖组。说明,EHPStc、EHPStp-1和EHPStp-2具有显着的抗氧化作用,以减轻动物机体自由基损伤,保护动物机体,增强免疫功能。试验Ⅵ地锦多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用建立环磷酰胺（CTX）小鼠免疫抑制模型,测定EHPStc和EHPStp-1对免疫抑制小鼠的免疫调节作用。小鼠随机分为5组（n=10）。分别为正常对照组（NC）、模型对照组（MC）、EHPStc组、EHPStp-1组、阳性对照组（PC组）。NC组小鼠,每天灌胃给予生理盐水,2个多糖组小鼠每天灌胃150 mg/kg EHPStc和EHPStp-1,PC组小鼠给予左旋咪唑（100 mg/kg）。实验持续24 d。第15、16、17 d腹腔注射100 mg Cy/kg bw,对小鼠进行免疫抑制造模。NC组和MC组灌胃0.1 m L/10g生理盐水。结果显示,EHPStc和EHPStp-1在大多时间点能促进T淋巴细胞增殖、促进淋巴细胞进入S期和G2/M期,提高CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的百分率,提高血清中免疫球蛋白和细胞因子水平,提高小鼠免疫器官指数及脾脏抗氧化指标。说明,EHPStc和EHPStp-1能够有效提高免疫抑制小鼠细胞免疫、体液免疫能力。综合评价EHPStp-1免疫增强活性最强。本研究首先通过对地锦多糖提取脱色纯化后,获得总多糖和各分级多糖,利用小鼠外周血淋巴细胞、巨噬细胞和免疫抑制小鼠检测了多糖的淋巴细胞免疫活性、巨噬细胞功能和抗氧化能力及其对免疫抑制小鼠的免疫调节作用,发现地锦多糖具有显着的免疫增强作用。本研究为地锦草等中药多糖在防治动物疾病中的推广应用提供了理论依据。
刘佳[3]（2021）在《女贞子免疫增强活性成分分离鉴定及作用机制研究》文中进行了进一步梳理女贞子Ligustri Lucidi Fructus系木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ail.的干燥成熟果实,性味甘、苦,凉;归肝、肾经;功能补肝肾,强筋骨,明目;主治阴虚内热,腰肢无力,肾虚滑精,视力减退等。研究表明,女贞子主要含有齐墩果酸、熊果酸、特女贞苷、女贞子苷等化学成分,具有免疫调节、保肝、抗炎、抗菌和抗病毒等作用。已有文献证明女贞子可以提高家畜的生产性能和免疫功能,然而目前的研究未能阐释女贞子发挥免疫增强活性的化学成分,对其作用机制的研究更是少见。本研究进行了女贞子免疫增强活性部位筛选、活性成分分离鉴定、活性成分增强巨噬细胞和淋巴细胞免疫活性的作用及机制研究,取得以下主要结果:（1）女贞子免疫增强活性部位的筛选通过乙醇提取法和液-液萃取法制备女贞子五个极性部位,通过巨噬细胞吞噬试验和淋巴细胞增殖试验检测五部位萃取物的免疫活性。结果表明,女贞子石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和水部位萃取物得率分别为1.64%、1.28%、1.13%、11.15%和26.96%;女贞子石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水部位萃取物均可不同程度地提高RAW264.7巨噬细胞吞噬中性红的能力,且正丁醇和乙酸乙酯部位萃取物的增强效果较好;女贞子乙酸乙酯、正丁醇和水部位萃取物均可不同程度地促进淋巴细胞增殖,其中正丁醇和乙酸乙酯萃取物的促增殖效果较好。说明正丁醇和乙酸乙酯部位为女贞子的主要免疫增强活性部位。（2）女贞子免疫增强活性成分的分离纯化与结构鉴定通过大孔树脂、硅胶和Sephadex LH-20柱色谱法及制备薄层色谱法,对女贞子正丁醇部位萃取物进行分离纯化,并运用1H-NMR、13C-NMR和HR-ESI-MS对单体化合物进行结构鉴定;通过巨噬细胞吞噬试验和淋巴细胞增殖试验检测大孔树脂乙醇洗脱段和单体化合物的免疫活性。结果表明,女贞子正丁醇部位萃取物的大孔树脂水洗脱段、30%、50%、70%和90%乙醇洗脱段得率分别为8.54%、25.62%、58.34%、1.42%和1.07%,其中30%乙醇洗脱段的免疫活性较强;对30%乙醇洗脱段进行分离纯化得到10个单体化合物,结构鉴定为:橄榄苦苷酸（oleuropeinic acid）、女贞子苷（nuezhenide）、异女贞子苷（isonuezhenide）、红景天苷（salidroside）、异女贞苷酸（isoligustrosidic acid）、ligulucidumoside A、8（E）-女贞子苷（8（E）-nuezhenide）、羟基酪醇（hydroxytyrosol）、橄榄苦苷（oleuropein）和p-hydroxyphenethyl 7-β-D-glucosideelenolic acid eater,其中橄榄苦苷酸、红景天苷、羟基酪醇、橄榄苦苷和p-hydroxyphenethyl7-β-D-glucosideelenolic acid eater有不同程度增强免疫细胞活性的作用,且羟基酪醇的作用最强。说明羟基酪醇等是女贞子的主要免疫增强活性成分。（3）女贞子活性成分羟基酪醇增强巨噬细胞免疫活性的作用及机制通过荧光显微镜观察羟基酪醇作用于RAW264.7巨噬细胞后细胞抗原摄取能力,ELISA检测细胞因子分泌,Griess法检测一氧化氮（NO）释放,荧光显微镜和流式细胞术检测活性氧（ROS）产生,流式细胞术检测细胞表面分子和共激活分子的表达,并通过Western blot检测NF-κB和TLR4信号通路相关靶点蛋白的表达。结果表明,羟基酪醇能显着增强巨噬细胞对FITC-OVA的摄取能力,提高肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β（IL-1β）等分泌,促进NO释放和ROS产生,并显着上调细胞表面分子MHC-Ⅱ和共激活分子CD80和CD86的表达;进一步研究表明,羟基酪醇可以显着上调细胞核NF-κB p65表达,下调细胞浆IκB-α表达,同时还能显着上调TLR4,My D88,TRIF和IKKβ的表达,说明羟基酪醇对RAW264.7巨噬细胞的活化可以通过TLR4/My D88（TRIF）/IKKβ介导的信号反应激活细胞内NF-κB信号通路实现。（4）女贞子活性成分羟基酪醇增强淋巴细胞免疫活性的作用及机制通过ELISA检测细胞因子和免疫球蛋白分泌,流式细胞术检测细胞亚群比例,荧光显微镜和流式细胞术检测细胞内Ca2+浓度,微板法检测细胞中钙调神经磷酸酶（Calcineurin）活力,并通过Western blot检测核转录因子NFAT和NF-κB信号通路相关靶点蛋白表达。结果表明,羟基酪醇可显着增加白细胞介素4（IL-4）、γ干扰素（IFN-γ）和TNF-α分泌,提高淋巴细胞亚群CD3+和CD4+/CD8+比例;进一步研究表明,羟基酪醇可以显着增加细胞内Ca2+浓度,提高Calcineurin活力,并且显着上调细胞核NFAT和NF-κB p65表达,同时下调细胞浆NFAT和IκB-α表达,说明羟基酪醇可以通过促进Ca2+/Calcineurin/NFAT和NF-κB信号通路的级联反应,激活脾淋巴细胞。综上所述,本研究发现女贞子正丁醇和乙酸乙酯部位萃取物为其主要免疫增强活性部位,并分离和筛选得到多个具有免疫增强活性的单体化合物,其中羟基酪醇活性最好;进一步研究阐释了羟基酪醇可以通过影响细胞信号通路的传递,引起NF-κB p65和NFAT的入核来增强巨噬细胞和淋巴细胞的免疫活性。本论文研究结果为今后将女贞子开发为免疫增强剂提供了理论依据,为发展可以替代抗生素的中兽药饲料添加剂提供思路。
王刚,连紫宛,李占强,张朝霞,樊融,马蕊[4]（2021）在《雪灵芝粗多糖对S180荷瘤小鼠免疫功能的影响》文中提出目的:建立S180荷瘤小鼠模型,探讨雪灵芝粗多糖（AKCP）对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法:Balb/c小鼠随机分为6组:正常组、模型组、香菇多糖（LNT,0.25 mg/kg）组和AKCP-H（200 mg/kg）、AKCP-M（100 mg/kg）、AKCP-L（50 mg/kg）剂量组,除正常组外,其余5组建立S180荷瘤小鼠模型。各组小鼠连续给与蒸馏水或药物8天后,观察瘤重、体重增率及免疫脏器系数,检测脾淋巴细胞增殖与CD3+/CD4+/CD8+T细胞亚群、NK细胞杀伤活性,以及IL-2、TNF-α、IFN-γ在脾细胞中的mRNA表达及血清中含量等免疫功能指标。结果:AKCP-H组和LNT组瘤重显着低于模型组,二者抑瘤率分别为36.64%和26.35%。AKCP-H组的体重增率低于正常组和模型组。与正常组比较,模型组脾淋巴细胞增殖、NK细胞杀伤活性、CD3+T细胞（包括CD3+/CD4+和CD3+/CD8+）、血清IFN-γ水平均明显降低,而CD4+/CD8+细胞比例和血清TNF-α显着升高。AKCP-H、AKCP-L组和LNT组脾淋巴细胞增殖和NK细胞杀伤活性高于模型组。AKCP各剂量组CD3+/CD8+亚群高于模型组且CD4+/CD8+比值低于模型组,并恢复到正常组水平;AKCP-H组和LNT组脾细胞中IFN-γ的mRNA表达升高,AKCP-M、AKCP-L和LNT组血清IL-2、IFN-γ水平高于模型组。结论:雪灵芝粗多糖对S180荷瘤小鼠免疫功能具有激活作用,进而发挥间接性抑瘤效应。
沙依拜·沙比提[5]（2021）在《阿里红多糖对S180荷瘤小鼠的抑瘤作用与机制研究》文中研究说明目的:探讨阿里红多糖（Fomes officinals polysaccharide,FOPS）对S180荷瘤小鼠的抑瘤作用及其机制。方法:从GEO数据库下载三个m RNA表达谱（GSE20465、GSE53388和GSE116596）,利用GEO2R软件分析肿瘤组织与正常组织之间的差异表达基因（DEGs）。利用David、String软件进行GO分析、KEGG分析、PPI分析,利用Cytoscape软件构建蛋白互作网络,筛选核心基因。采用雄性昆明小鼠制备S180荷瘤模型,将造模成功小鼠随机分为模型组、阳性对照组、FOPS低中高剂量组,每组10只。另取10只健康小鼠作为空白组。模型组与空白组给予NS灌胃,阳性对照组腹腔注射50 mg/kg环磷酰胺,FOPS低中高剂量组灌胃不同浓度（50、100、200mg/kg）FOPS,1次/d,给药周期为15 d。计算抑瘤率、脏器指数;血细胞分析仪检测血细胞常规;流式细胞术（FCM）检测小鼠外周血T淋巴细胞中CD3+T、CD4+T和CD8+T细胞百分含量,并计算CD4+/CD8+比值;酶联免疫法（ELISA）检测小鼠血清TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-1β和IL-6等细胞因子水平;荧光定量法（q RT-PCR）检测小鼠肿瘤组织TLR4、My D88、TRAF-6、TRIF、p38MAPK、p-c-Jun m RNA表达水平;蛋白免疫技术（Western blotting）检测小鼠肿瘤组织TLR4、My D88、TRAF-6、TRIF、p38MAPK、p-c-Jun、NF-κB、p-NF-κB蛋白表达水平。结果:经筛选得到12个UDEGs,41个DDEGs,以IGF1、IRF4、C3、PENK、SOCS3、HIST1H4C、HIST1H4F、MGAT4A、VCAN及CDH1等基因为核心构成PPI互作网络,包括MAPK、TLR在内的118条信号通路有明显富集。与模型组相比,阳性对照组、FOPS低、中、高剂量组小鼠瘤重显着减小（P<0.05）,FOPS低、中剂量组小鼠脾脏指数、胸腺指数显着提高（P<0.05）;FOPS低剂量组小鼠外周血白细胞数、红细胞数及淋巴细胞数显着升高（P<0.05）,中性粒细胞数及单核细胞率显着降低（P<0.05）;阳性对照组及FOPS高剂量组小鼠外周血CD3+T细胞、CD4+T细胞比例显着提高（P<0.05）,阳性对照组及FOPS低、中剂量组小鼠CD8+T细胞比例显着降低（P<0.05）,阳性对照组及FOPS低剂量组小鼠CD4+/CD8+比值显着提高（P<0.05）;FOPS低剂量组小鼠血清TNF-α、IFN-γ、IL-2水平显着提高（P<0.05）,阳性对照组、FOPS低、中、高剂量组小鼠IL-6、IL-1β水平显着降低（P<0.01）;FOPS低剂量组组小鼠肿瘤组织TLR4、My D88、TRAF-6、p38MAPK、p-c-Jun m RNA表达水平显着升高（P<0.05）;FOPS低剂量组小鼠肿瘤组织TLR4、My D88、TRAF-6、p38MAPK、p-c-Jun、p-NF-κB蛋白表达水平显着升高（P<0.05）。结论FOPS具有抗肿瘤活性,其机制可能与调节机体免疫功能、激活TLR4-MAPK/NF-κB信号通路有关。
王莹[6]（2020）在《枸杞多糖的分离纯化及基于对肠道菌群调节的免疫作用机制研究》文中研究表明研究目的枸杞的水溶性多糖是枸杞发挥生物活性的主要成分,具有良好的免疫增强作用,但其免疫调节作用机制尚在探索研究中。近些年来肠道菌群研究的不断深入,为多糖等低生物利用度产品的作用机制探究提供了新的思路。枸杞多糖（The polysaccharides of Lycium barbarumL.,LBP）对肠道菌群会产生怎样的影响以及其与免疫功能之间是否存在相关性,目前尚不清楚。本研究以环磷酰胺致免疫抑制小鼠和RAW 264.7细胞为模型,考察了 LBP体内外免疫功能以及对小鼠肠道菌群的影响,且结合LBP肠跨膜转运情况,以期深入探讨LBP的免疫活性及免疫调节作用途径。多糖的结构与活性有着紧密的联系,建立能反映其结构、纯度特性的多糖质控方法对于多糖产品的有效性、稳定性、均一性和安全性有重要意义。然而由于多糖结构的复杂性,导致其质控方法研究进展缓慢。本研究拟采用多种分析技术联用方式对LBP初级结构进行测定,通过构效关系分析得到影响LBP免疫活性发挥的主要结构特征,形成能反映LBP关键结构特征的质控方法,以控制和指导LBP的制备;同时结合体外免疫和抗氧化活性测定对不同产地枸杞中LBP进行比较,为我国枸杞资源质量评价提供理论基础。研究方法1、采用水提醇沉法得到枸杞粗多糖;采用苯酚硫酸-UV法测定总糖含量;咔唑硫酸-UV法测定酸性糖含量;建立PMP衍生化-HPLC-PDA法测定LBP中单糖组成及摩尔百分比;采用GPC-RI-MALLS联用法测定LBP的相对分子量（Mw）、分散系数（PDI）以及空间构象（α）;采用甲基化-GC/MS法对LBP糖的连接位置进行测定。2、在LBP分离纯化过程中,分别对乙醇沉淀法、膜分离法、色谱柱分离法进行考察,以获得高纯度的均一的LBP成分。3、以人工胃液和肠液模拟体外消化状态,考察LBP在消化液中的稳定性。采用FITC对LBP进行荧光标记,再采用Caco-2细胞模型对FITC-LBP的跨膜吸收进行研究,获得表观渗透系数Papp。4、以RAW264.7小鼠单核巨噬细胞为模型,考察LBP对细胞增殖活性、吞噬能力及相关细胞因子表达量的影响;同时采用Western-blot法初步分析LBP对信号通路的影响。5、采用CTX致免疫抑制小鼠模型,考察LBP对小鼠免疫器官、巨噬细胞吞噬指数、脾脏中淋巴细胞、T细胞亚群及血清中IgG、IgM水平的影响。6、采用16S rDNAV3+V4高变区测定技术,对不同实验组小鼠肠道菌群的多样性及群落结构进行统计;同时采用Pearson统计法分析肠道菌群与免疫功能之间的相关性。采用HE染色法对小鼠肠粘膜形态进行观察。7、对不同产地（宁夏、新疆、青海）枸杞中的LBP进行提取和纯化,采用已建立的方法对其产率和初级结构进行测定,并对LBP单糖组成及糖连接方式指纹图谱进行相似度评价。同时对不同产地LBP体外免疫活性及抗氧化活性进行比较。研究结果1、LBP初级结构测定本实验所得LBP是总糖含量为66.9%的酸性杂多糖;由9种单糖组成,分别为:甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖;LBP分子量测定呈现出2个分离不完全的色谱峰,峰1的Mw为 1.37×106Da（PDI为 1.58）;峰 2 的 Mw 为 8.83 × 104Da（PDDI为 1.48）;α（Rg-M曲线的斜率值）为0.237,初步推断LBP在0.1%NaCl溶液中呈现紧缩的球型;LBP中主要有14种糖的连接方式,以（1→4）GalA连接为主。本实验采用的定量测定方法灵敏度高、准确性好,经方法学验证符合实验要求。2、LBP的分离纯化 采用DEAE-52纤维素柱和HW-65层析柱相结合的方法对LBP进行分离,获得两个高纯度均一成分:LBP1和LBP2,其Mw分别为1207400 Da和 125000 Da。3、LBP在体外消化液中的稳定性及肠跨膜转运能力 通过Mw测定表明LBP1和LBP2在人工胃液和人工肠液中均未发生降解;在肠跨膜转运实验中培养的Caco-2单细胞模型经验证紧密性和完整性良好,可模拟小肠上皮细胞;采用经验证标记成功的FITC-LBP1和FITC-LBP2进行Caco-2细胞跨膜转运实验,其累积转运率分别为0.99%和1.15%,Papp<1.0 × 10-6cm·s-1,说明两个LBP组分在小肠中均不易被吸收。4、LBP对巨噬细胞的免疫调节及其机制研究 LBP1和LBP2均能显着促进RAW 264.7细胞增殖,增强其吞噬能力;提高细胞中IL-6、TNF-α、IL-1β和iNOS的mRNA表达量,呈剂量依赖性;同时诱导巨噬细胞p-JNK MAPKs信号通路的激活,且其激活程度随着浓度的增加而逐渐增强。在对RAW 264.7的调节作用上,LBP1效果优于LBP2（P<0.05）。5、LBP对免疫抑制小鼠免疫功能的影响 相比于模型组,LBP1和LBP2均显着提高小鼠胸腺和脾脏指数;促进脾脏中T、B淋巴细胞的增殖;提高血清中IgG、IgM的含量;同时调节CD4+、CD8+T淋巴细胞数量及CD4+/CD8+比例,均呈现剂量依赖性。在体内免疫调节功能上,LBP1效果优于LBP2（P<0.05）。6、LBP对免疫抑制小鼠肠道菌群及肠粘膜的影响 高剂量LBP1和LBP2给药组可逆转由CTX导致的肠道菌群紊乱,使OTU多样性及菌群结构恢复到对照组水平。比较不同实验组菌群结构发现:LBP可显着提高双歧杆菌、乳杆菌、拟杆菌、普雷沃氏菌科和理研菌科的相对丰度;降低某些菌群,如大肠杆菌,Parabacteroides和Ruminococcus的相对丰度。通过相关性分析得出:在科水平上,乳杆菌、拟杆菌、普雷沃氏菌和双歧杆菌与免疫调节呈显着正相关,而大肠杆菌、瘤胃菌科与毛螺旋菌科与免疫调节呈显着负相关。同时发现低剂量LBP组对肠道菌群无明显调节作用。此外,经LBP干预后可一定程度修复由CTX引起的小鼠肠道粘膜损伤。7、基于LBP测定的不同产地枸杞质量评价 不同产地LBP结构和体外活性具有高度相似性,且单糖组成和糖的连接位置指纹图谱相似度均大于0.90;但不同产地枸杞中LBP的产率相差较大,在1.6%～4.4%之间,青海枸杞LBP的平均产率显着低于新疆和宁夏枸杞子（P<0.05）。研究结论1、基于不同产地LBP结构共性特征及构效关系分析,初步形成了 LBP质控方法。包括对LBP中半乳糖醛酸、阿拉伯糖、半乳糖和葡萄糖四种主要单糖进行含量测定,对LBP的Mw及PDI的范围进行检查,同时以LBP单糖组成对照指纹图谱对待测LBP进行相似度分析,相似度应不得低于0.90。此法极大提高LBP检测的专属性,可有效的反映LBP关键结构属性,且检测指标与其活性密切相关,可将LBP及其相关产品与其他中药多糖进行有效区分。2、不同产地枸杞中LBP结构及体外活性具有高度一致性,但LBP产率存在较大差异。推测对于多糖成分,种属对其结构和生物活性有关键影响,而地域对多糖产率有较大影响。宁夏一直被认为是枸杞的道地产区,本研究从多糖的角度部分阐明了宁夏产区枸杞的质量优势。3、体内外实验均表明LBP具有较强的免疫调节功能。RAW264.7细胞实验表明LBP可通过激活p-JNK MAPKs细胞通路对巨噬细胞免疫调节作用产生影响;免疫抑制小鼠模型实验表明LBP可改善CTX导致的小鼠免疫器官萎缩,并从体液免疫和细胞免疫两方面增强机体免疫功能。同时发现LBP1的效果优于LBP2,说明Mw是影响LBP免疫活性的关键因素之一。4、高剂量LBP可改善免疫抑制小鼠菌群多样性,提高某些菌群的相对丰度,此类菌群或可直接激活相关免疫通路,促进T淋巴细胞的分化;或与SCFA的产生相关,可增强肠道粘液屏障功能。同时发现LBP可降低某些潜在的致病菌,而此类致病菌亦与结肠炎、结肠癌等疾病相关。5、结合LBP在Caco-2跨膜研究中转运率很低的结果,初步推测LBP进入肠道后对肠道菌群的调节作用是其发挥免疫功能的重要途径之一;低剂量LBP无明显肠菌群调节作用,说明LBP免疫作用途径与其剂量紧密相关。
周红秋[7]（2020）在《金蝉花粗多糖CP50和CP80的制备和抗肿瘤及抗肝损伤作用初步研究》文中研究指明药用金蝉花（Cordyceps cicadae）始记载于南北朝的《雷公炮炙论》,为麦角菌科真菌蝉草及其寄主山蝉若虫形成的干燥复合体。金蝉花含有多种活性成分,多糖是金蝉花的主要活性成分之一,具有抗肿瘤、延长寿命、调节免疫系统、抗氧化、降血脂、延缓肾衰竭等药理活性。本研究以50%和80%乙醇沉淀制备金蝉花粗多糖CP50和CP80,比较这两种粗多糖对人宫颈癌细胞Hela细胞的增殖抑制作用,筛选抗肿瘤效果较优的粗多糖,并初步研究金蝉花粗多糖抗肿瘤的机制。此外,本研究初步评估这两个粗多糖对化疗药物环磷酰胺毒性造成的肝损伤的保护作用,为金蝉花的合理开发和临床使用提供参考。实验研究的主要结果如下:1.金蝉花粗多糖CP50和CP80的制备通过单因素试验和正交试验优化Sevage法金蝉花多糖中脱蛋白的最佳条件:Sevage试剂配比三氯甲烷:正丁醇为4:1,Sevage试剂与金蝉花多糖脱蛋白体积比例为1:3,脱蛋白次数为4次,金蝉花多糖的蛋白脱除率为46.35%。按照此方法制备金蝉花粗多糖CP50和CP80得率分别为2.69%、18.79%,多糖含量为2.11%、6.23%。2.金蝉花粗多糖CP50和CP80抗肿瘤活性比较及机制初步研究以人宫颈癌细胞Hela细胞作为模型细胞,通过CCK-8法比较CP50和CP80粗多糖对Hela细胞的增殖抑制活性,二者的IC50分别为1203μg/mL和778.9μg/mL,当CP80的浓度为100、200、400、800μg/mL时对Hela细胞具有显着抑制,存活率分别为87.73%（P<0.05）、84.85%（P<0.01）、71.58%（P<0.01）和58.60%（P<0.001）;而CP50只有当浓度达到400μg/mL时,对Hela细胞的增殖抑制才具有显着性,为82.98%（P<0.05）,且随着多糖浓度的递增,细胞的增殖抑制趋势较CP80小,因此CP80的抗肿瘤活性相对优于CP50。进一步观察发现CP80对Hela细胞形态和迁移具有抑制作用;通过DCFH-DA法测定HeLa细胞内ROS活性,通过Western blot法和实时定量PCR法测定Bax、Bcl-2和p53的蛋白和基因表达水平,结果表明CP80各浓度给药组在Hela细胞内的ROS活性比空白组显着提高（P<0.05）,Bax、p53的蛋白和基因的表达水平显着提高（P<0.05）,Bcl-2的蛋白和基因表达水平显着下降（P<0.05）。因此,推断金蝉花粗多糖CP80是通过提高Hela细胞中ROS的活性及介导p53信号通路致使细胞凋亡。3.金蝉花粗多糖CP50和CP80抗环磷酰胺致肝损伤的活性研究以C57BL/6小鼠,通过给予140 mg/mL环磷酰胺构建肝损伤模型。除了金蝉花CP50低剂量组（50 mg/mL）外,其余各给药组的肝脏指数均比模型组有降低,而脾脏指数有所上升,CP80高剂量组（200 mg/kg）比低剂量组（50 mg/mL）的效果比较明显;ALT、AST的活力值和MDA的含量较模型组有不同程度的下降,且CP80在高剂量（200 mg/kg）时显着降低CPA致小鼠肝损伤中MDA的活性（P<0.05）。结果表明,金蝉花粗多糖对肿瘤化疗药CPA诱导的C57BL/6小鼠药物性肝损伤具有一定的保护作用,CP80的效果稍好于CP50。
张霞[8]（2020）在《雪上一枝蒿多糖组分XP-10抗肿瘤免疫作用机理的研究》文中提出机体的免疫功能低下与肿瘤的发生发展密切相关,因此,通过药物增强机体的免疫功能,更好地发挥机体抗肿瘤免疫监杀机制,已成为肿瘤治疗的重要手段。自然界中大多数多糖都具有显着的免疫调节活性,并且广泛应用于临床抗肿瘤免疫治疗和对抗化疗药物副作用,但价格昂贵。因此,从传统中医药中寻找高效低价具有抗肿瘤免疫活性的多糖具有重要的意义和价值。雪上一枝蒿是一味具有广泛药理作用的乌头属植物,乌头类生物碱为其主要的活性成分。然而目前多糖成分报道较少,利用率较低。课题组前期发现雪上一枝蒿多糖组分XP-10具有显着的免疫调节活性,研究成果已申请发明专利（雪上一枝蒿多糖及提取方法以及应用,专利号:CN107936130 B）。本论文主要研究雪上一枝蒿多糖组分XP-10体内、外抗肿瘤免疫效应,为其多糖进一步开发提供科学依据。首先本研究第一部分通过构建脾淋巴增殖细胞模型,评价了雪上一枝蒿多糖组分XP-10免疫调节活性。结果显示,XP-10对Con A诱导的T细胞和LPS诱导的B细胞具有显着的促增殖活性,同时作为丝裂原,显着诱导脾淋巴增殖以及细胞因子（IFN-?、IL-2和IL-6）的产生。另外,XP-10干预对树突状细胞无明显影响,包括特异性表明标志（CD86,CD80和CD11c）的表达与细胞因子IL-12的产生。提示,XP-10体外具有较好的免疫调节活性。本研究的第二部分,我们观察了雪上一枝蒿多糖组分XP-10对免疫功能低下模型小鼠免疫功能的影响。结果显示,XP-10能拮抗免疫抑制模型小鼠体重和胸腺指数的下降,促进免疫抑制小鼠T淋巴细胞增殖功能的恢复,显着下调具有免疫抑制作用的Treg细胞（CD4+Foxp3+）的表达。然而,XP-10药物干预并不影响B220+亚群比例、Th17（CD4+IL-17+）细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞及CD4+/CD8+T比值,对免疫抑制模型小鼠外周血常规指标亦无影响。提示,XP-10在免疫抑制模型小鼠体内显示较好的免疫调节作用。最后第三部分,通过构建H22肝癌肺转移小鼠模型,研究XP-10对原发性肝癌肺转移抑制效应及机制。结果显示,XP-10干预能显着减少肝癌肺转移模型小鼠肺转移结节数,促进脾淋巴细胞的的增殖功能。然而,XP-10灌胃给药对肝癌肺转移模型小鼠免疫器官指数（胸腺指数和脾指数）、CD3+CD4+T淋巴细胞和CD44+CD62L-效应性T细胞无明显的的影响。尤其注意的是,XP-10显着下调Treg细胞（CD4+Foxp3+）的表达,同时对免疫检查点PD-1具有一定的下调作用,对Th1（CD4+IFN-?+）和Th17（CD4+IL-17+）亚群表达却无明显的影响,该部分研究结果与第二部分一致。综上所述,雪上一枝蒿多糖组分XP-10在体内、外具有优良的免疫调节活性,显着抑制肝癌肺转移,其作用机理与下调负调控机制Treg细胞,从而促进T淋巴细胞的增殖和增强抗肿瘤免疫有关。该研究为雪上一枝蒿多糖抗肿瘤免疫疗法提供了一定的科学依据。
宗帅[9]（2020）在《粒毛盘菌多糖抗肿瘤作用及其机制研究》文中进行了进一步梳理前期,本课题组已经对粒毛盘菌YM130胞外多糖（LEP130）的结构进行了解析,并发现了LEP130的抗肿瘤活性。然而其抗肿瘤作用机制尚不清楚。本文研究了LEP130的抗肿瘤作用及其与化疗药物的协同作用,并对其作用机制进行了初步的探讨。主要研究结果如下:1)利用体外实验研究了LEP130与5-氟尿嘧啶（5-FU）联用对Hep G2细胞的抑制作用。MTT实验结果表明,LEP130与5-FU联用对Hep G2细胞活性具有显着的抑制作用,该抑制作用强于LEP130或5-FU单独处理,并且两者间具有显着的协同作用。而LEP130对人皮肤成纤维细胞HSF、人正常肝细胞LO2没有明显作用,这表明LEP130对正常细胞是安全无毒的。Western blot等实验结果表明,LEP130能降低胸苷酸合酶和二氢嘧啶脱氢酶的表达,从而抑制5-FU的降解失活。另外,LEP130能抑制Ras/Raf/MEK/ERK和PI3K/Akt/m TOR介导的细胞存活通路,增强Hep G2细胞对5-FU的敏感性,防止细胞产生耐药性。LEP130还能抑制Nrf2介导的细胞抗氧化防御系统,增加细胞内活性氧,并破坏线粒体膜电位,激活线粒体凋亡途径。还发现,LEP130能促进p53活化,抑制NF-κB及其下游靶蛋白的表达,导致细胞周期停滞在S期,并且抑制DNA碱基切除修复和错配修复,继而增强5-FU的作用效果。因此,LEP130与5-FU通过多种方式发挥体外抑制Hep G2细胞的协同增效作用。2)采用H22荷瘤小鼠模型,研究了LEP130与环磷酰胺（CTX）对H22肿瘤生长的抑制作用。结果表明,LEP130能激活Fas/Fas L介导的死亡受体途径,增加相关蛋白（如caspase 3、caspase 8、PARP1等）的表达,并通过t-Bid激活线粒体凋亡途径。LEP130还能通过抑制血管生成相关蛋白（如VEGF、b FGF、MMPs等）的表达,减少瘤内血管生成。此外,LEP130能提高H22荷瘤小鼠的脾脏指数和胸腺指数,促进T细胞、NK细胞和巨噬细胞向肿瘤组织中浸润,增加血清和肿瘤组织中免疫因子（IFN-γ、IL-1β、IL-2和TNF-α）的含量,继而激活抗肿瘤免疫系统抑制肿瘤的生长。还发现,LEP130能抑制Stat3和NF-κB介导的细胞存活蛋白（如Bcl-2、Bcl-XL、Survivin等）的表达,并抑制H22肿瘤细胞产生多药耐药性,继而增强CTX的抑瘤作用。同时发现LEP130能显着改善由CTX导致的肝损伤、肾损伤、免疫抑制等副作用,促进机体恢复健康。以上结果表明,LEP130与CTX联用能协同抑制H22荷瘤小鼠肿瘤的生长,并且LEP130能缓解CTX引起的副作用。3)利用S180荷瘤小鼠模型,研究了LEP130对抗肿瘤免疫系统的作用。体外实验表明LEP130不能抑制S180细胞的增殖,而体内实验证实LEP130能显着抑制S180荷瘤小鼠肿瘤的生长。实验结果表明,LEP130主要通过激活机体免疫系统来发挥抑瘤作用。对S180荷瘤小鼠进行灌胃处理后发现,LEP130能引起辅助性T细胞向Th1型极化,并促进Th1细胞因子（IL-2和IFN-γ）的表达;抑制辅助性T细胞向Th2型极化,并抑制Th2细胞因子（IL-4和IL-10）的表达。另外,LEP130引起的高水平的IFN-γ被证明能调节肿瘤微环境中的巨噬细胞分型,促进巨噬细胞向M1型极化,继而发挥抑瘤作用。此外,LEP130能通过增加抑瘤性免疫细胞（如白细胞、B细胞和NK细胞等）和抑瘤性免疫细胞趋化因子（如CXCL9、CXCL10和CXCL13等）,抑制免疫抑制性细胞（如骨髓源性抑制细胞、调节性T细胞等）、免疫抑制细胞趋化因子（如G-CSF、M-CSF、CCL22等）以及免疫抑制因子（如TGF-β、IL-10、PEG2等）,改善免疫抑制性肿瘤微环境,增强免疫系统对肿瘤细胞的杀伤作用。最后,体外实验表明,LEP130能通过TLR4介导的NF-κB信号通路直接诱导原代巨噬细胞向M1型转化,发挥抑瘤作用。以上结果表明,LEP130能激活机体免疫系统抑制S180荷瘤小鼠肿瘤的生长。4)采用AOM/DSS诱导的小鼠结肠癌模型,研究了LEP130对结肠癌的抑制作用以及对肠道菌群的影响。LEP130能显着缓解AOM/DSS导致的结肠癌小鼠体重减轻、结肠长度缩短,并有效抑制了结肠肿瘤的发生。另外,LEP130能显着改善结肠癌小鼠肠道的病理状况,缓解AOM/DSS导致的肠道损伤,并通过增加ZO-1、occludin、E-cadherin等蛋白的表达恢复肠屏障完整性。LEP130还能降低结肠癌小鼠结肠组织中的促炎因子（TNF-α、IL-6、IL-1β和IFN-γ）水平,抑制组织炎症。16S r RNA高通量测序结果表明,LEP130能改善结肠癌小鼠肠道菌群的结构与组成,增加肠道菌群的丰度和物种多样性。LPE130能降低（机会）致病菌和病原菌（如副杆菌属、大肠志贺氏杆菌、脱硫弧菌属、螺杆菌属、毛螺菌属-NK4A136组和厌氧支原体属等）的相对丰度,并增加短链脂肪酸产生菌和益生菌（如瘤胃梭菌属、毛螺菌属、雷沃氏菌属-NK3B31组、双歧杆菌属和罗斯氏菌属等）的相对丰度。非靶向代谢组学结果表明,LEP130能显着改善结肠癌小鼠肠道菌群的代谢状况,降低肠道中鹅去氧胆酸、脱氧胆酸和石胆酸含量,增加短链脂肪酸（乙酸、丙酸、正丁酸）和δ-生育酚含量,从而抑制结肠癌的发生。相关性分析结果表明,肠道菌群的调节与代谢物的变化具有高度的相关性。以上结果表明,LEP130能够抑制结肠癌的发生,并且这种抑制作用可能与LEP130对肠道微生物群及其代谢产物的调节相关。
姜慧敏[10]（2020）在《榴莲皮多糖调节免疫功能的研发》文中研究表明多糖广泛存在于植物、动物和微生物,具有多种生物学活性,可以保护免疫器官,清除自由基,提高机体抗氧化能力,调节肠道菌群和改善免疫功能。本论文以榴莲皮多糖为研究对象,环磷酰胺（CTX）给药建立免疫抑制小鼠模型,通过蛋白质组学和肠道菌群研究,评价榴莲皮多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响。腹腔注射70 mg/kg CTX进行免疫抑制小鼠造模,榴莲皮多糖高、中、低剂量组（200、100和50 mg/kg）给药。分别测定各组小鼠胸腺、脾脏指数,观察组织病理改变,以评价榴莲皮多糖对免疫器官的影响。取小鼠血清,用于测定吞噬细胞活力、抗氧化应激能力、细胞因子含量。取小鼠脾脏,测定白介素-2（IL-2）、白介素-4（IL-4）、白介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量。取小鼠肝脏,在全基因组水平上测定蛋白表达差异。取小鼠盲肠内容物,测定短链脂肪酸（SCFAs）的含量及肠道菌群的多样性。结果表明,与模型组相比,榴莲皮多糖高剂量组（200 mg/kg）可显着提高胸腺、脾脏指数,改善脾脏组织结构;显着增高细胞因子中IL-2、IL-4、IL-6和TNF-α含量;提高血清中酸性磷酸酶（ACP）、乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）和总抗氧化能力（T-AOC）活力;增高肝脏中过氧化氢酶（CAT）活力,降低丙二醛（MDA）含量,增强免疫抑制模型小鼠的免疫活性。蛋白质组学研究表明,与模型组相比,给药组可以显着上调肿瘤坏死因子受体超家族成员6（FAS）、低亲和力免疫球蛋白Fc受体III（FcγRIII）、信号转换器和转录激活剂1（STAT1）和肿瘤坏死因子受体相关因子5（TRAF5）蛋白的表达,显着下调受体酪氨酸激酶（RTK）蛋白的表达,参与Autoimmune thyroid disease、Staphylococcus aureus infection和NF-κB signaling pathway等代谢通路的调节。肠道微生物研究表明,与模型组相比,给药组SCFAs的含量增加,肠道菌群中有益菌Akkermansia、Bacteroides、Paraprevotella相对丰度增加,Ruminococcus和Oscillospira相对丰度降低。说明榴莲皮多糖可以通过改善菌群组成对免疫调节产生有益作用。
二、灵芝多糖和香菇多糖纠正环磷酰胺所致荷瘤小鼠免疫抑制的作用研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、灵芝多糖和香菇多糖纠正环磷酰胺所致荷瘤小鼠免疫抑制的作用研究（论文提纲范文）
（1）HsPc-HA营养液的挤压制备及其功能性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 挤压膨化技术 |
| 1.1.1 挤压膨化技术简介 |
| 1.1.2 挤压膨化技术的应用 |
| 1.2 多糖研究进展 |
| 1.2.1 猴头菇多糖研究进展 |
| 1.2.2 刺五加多糖研究进展 |
| 1.2.3 茯苓多糖研究进展 |
| 1.3 白术内酯研究进展 |
| 1.4 多糖作用效果 |
| 1.4.1 抗肿瘤作用 |
| 1.4.2 免疫调节作用 |
| 1.4.3 降血糖降血脂作用 |
| 1.4.4 抗炎作用 |
| 1.5 选题意义及内容 |
| 第二章 HsPc-HA原料组分的挤压膨化预处理 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与仪器设备 |
| 2.2.1 材料 |
| 2.2.2 主要试剂及耗材 |
| 2.2.3 主要仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 猴头菇挤压膨化预处理 |
| 2.3.2 猴头菇多糖的提取 |
| 2.3.3 葡萄糖标准曲线的建立 |
| 2.3.4 多糖含量的测定 |
| 2.3.5 挤压膨化预处理单因素实验设计 |
| 2.3.6 响应面优化试验 |
| 2.3.7 统计学分析 |
| 2.4 结果与分析 |
| 2.4.1 单因素实验结果与分析 |
| 2.4.2 响应面试验结果与分析 |
| 2.4.3 最优条件验证分析 |
| 2.4.4 原料挤压膨化预处理 |
| 2.4.5 挤压膨化预处理对多糖提取率的影响 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 HsPc-HA营养液的制备及其对IEC-6 细胞修复、损伤迁移能力的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与仪器设备 |
| 3.2.1 材料 |
| 3.2.2 主要试剂及耗材 |
| 3.2.3 主要仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 HsPc-HA营养液的制备 |
| 3.3.2 脾淋巴细胞的制备 |
| 3.3.3 不同多糖组分对脾淋巴细胞的增殖作用 |
| 3.3.4 细胞培养 |
| 3.3.5 MTT法筛选CTX诱导IEC-6 细胞损伤模型最佳造模条件 |
| 3.3.6 HsPc-HA对 CTX诱导IEC-6 细胞损伤模型的修复作用 |
| 3.3.7 HsPc-HA对 CTX诱导IEC-6 细胞损伤模型的迁移作用 |
| 3.3.8 HsPc-HA对 CTX诱导IEC-6 细胞损伤模型的HE染色 |
| 3.3.9 统计学分析 |
| 3.4 实验结果分析 |
| 3.4.1 有效组分配比筛选结果 |
| 3.4.2 CTX诱导IEC-6 细胞损伤模型造模条件结果 |
| 3.4.3 HsPc-HA对 CTX诱导IEC-6 细胞损伤模型的修复作用结果 |
| 3.4.4 HsPc-HA对 CTX诱导IEC-6 细胞损伤模型的迁移作用结果 |
| 3.4.5 HsPc-HA对 CTX诱导的IEC-6 细胞损伤模型HE染色结果 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 化疗后荷瘤鼠体内调节及作用机理研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与仪器设备 |
| 4.2.1 原料 |
| 4.2.2 主要试剂及耗材 |
| 4.2.3 主要仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 安全性实验 |
| 4.3.2 模型建立 |
| 4.3.3 实验分组及给药方案 |
| 4.3.4 HsPc-HA对化疗后荷瘤鼠胃肠改善功能研究 |
| 4.3.5 HsPc-HA对化疗后荷瘤鼠抗炎功能研究 |
| 4.3.6 HsPc-HA对化疗后荷瘤鼠行为学作用研究 |
| 4.3.7 HsPc-HA对化疗后荷瘤鼠体内免疫调节作用研究 |
| 4.3.8 对降低肝肾功能损伤作用研究 |
| 4.3.9 ELISA检测化疗后荷瘤鼠血清细胞因子含量 |
| 4.3.10 Western Blot检测化疗后荷瘤鼠脾脏组织中NF-кB p65 蛋白的表达量 |
| 4.3.11 统计学分析 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 安全性实验结果 |
| 4.4.2 HsPc-HA对化疗后荷瘤鼠胃肠改善功能研究结果 |
| 4.4.3 HsPc-HA对化疗后荷瘤鼠抗炎功能研究结果 |
| 4.4.4 HsPc-HA对化疗后荷瘤鼠行为学作用研究结果 |
| 4.4.5 HsPc-HA对化疗后荷瘤鼠体内免疫调节作用研究结果 |
| 4.4.6 HsPc-HA对降低化疗后荷瘤鼠肝肾功能损伤作用研究结果 |
| 4.4.7 HsPc-HA对化疗后荷瘤鼠血清细胞因子含量影响的结果 |
| 4.4.8 HsPc-HA对化疗后荷瘤鼠脾脏组织中NF-кB p65 蛋白表达的影响 |
| 4.5 本章小结 |
| 结论、展望与创新点 |
| 1 结论 |
| 2 创新点 |
| 3 展望 |
| 参考文献 |
| 个人简历及攻读学位期间科研成果 |
| 致谢 |
（2）地锦多糖的制备及对小鼠免疫增强活性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 地锦草的研究进展 |
| 1.1.1 地锦草的化学成分 |
| 1.1.2 地锦草的药理作用 |
| 1.1.3 地锦草的临床应用 |
| 1.2 多糖的研究进展 |
| 1.2.1 多糖的生物活性 |
| 1.2.2 多糖结构的研究 |
| 1.2.3 多糖的提取及分离纯化 |
| 1.2.4 多糖在动物生产中的应用 |
| 1.3 本研究的目的意义 |
| 第二章 地锦多糖的提取与脱色纯化 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 药材 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 地锦样品的前处理 |
| 2.2.2 地锦多糖的提取 |
| 2.2.3 地锦多糖的含量测定 |
| 2.2.4 地锦多糖中蛋白含量测定 |
| 2.2.5 地锦多糖双氧水脱色的最佳条件的优化 |
| 2.2.6 地锦多糖的纯化 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 地锦多糖的提取结果 |
| 2.3.2 地锦多糖的纯化结果 |
| 2.3.3 地锦多糖双氧水脱色的单因素试验结果 |
| 2.3.4 地锦多糖双氧水脱色的正交试验结果 |
| 2.3.5 地锦多糖双氧水脱色的验证试验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 地锦多糖的提取方法 |
| 2.4.2 多糖的含量测定方法 |
| 2.4.3 地锦多糖的双氧水脱色 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 地锦多糖的结构鉴定 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 地锦多糖 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 地锦多糖的紫外光谱分析 |
| 3.2.2 地锦多糖的红外光谱分析 |
| 3.2.3 地锦多糖的单糖组成分析 |
| 3.2.4 地锦多糖的分子量检测 |
| 3.2.5 地锦多糖的糖醛酸含量测定 |
| 3.2.6 地锦多糖的刚果红试验 |
| 3.2.7 地锦多糖的核磁共振波谱测定 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 地锦多糖的紫外光谱分析结果 |
| 3.3.2 地锦多糖的红外光谱分析结果 |
| 3.3.3 地锦多糖的单糖组成结果 |
| 3.3.4 地锦多糖的分子量结果 |
| 3.3.5 地锦多糖的糖醛酸含量结果 |
| 3.3.6 地锦多糖的刚果红试验结果 |
| 3.3.7 地锦多糖的核磁试验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 多糖的光谱分析 |
| 3.4.2 多糖的分子量及及糖醛酸分析 |
| 3.4.3 多糖的核磁分析 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 地锦多糖对小鼠外周血淋巴细胞免疫活性的影响 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 地锦多糖 |
| 4.1.2 试验动物 |
| 4.1.3 主要试剂 |
| 4.1.4 主要仪器 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 小鼠外周血淋巴细胞的分离和培养 |
| 4.2.2 地锦多糖对小鼠外周血淋巴细胞最大安全浓度的测定 |
| 4.2.3 地锦多糖对小鼠外周血淋巴细胞增殖的影响 |
| 4.2.4 地锦多糖对小鼠外周血淋巴细胞周期的影响 |
| 4.2.5 地锦多糖对小鼠外周血CD4~+、CD8~+T淋巴细胞亚群的影响 |
| 4.2.6 地锦多糖对小鼠淋巴细胞免疫球蛋白IgA、IgG的影响 |
| 4.2.7 地锦多糖对小鼠淋巴细胞细胞因子分泌的影响 |
| 4.2.8 数据分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 地锦多糖对小鼠外周血淋巴细胞最大安全浓度的测定 |
| 4.3.2 地锦多糖单独刺激时各组淋巴细胞增殖的结果 |
| 4.3.3 地锦多糖协同PHA刺激时淋巴细胞增殖的结果 |
| 4.3.4 地锦多糖对小鼠外周血淋巴细胞周期的影响结果 |
| 4.3.5 地锦多糖对CD4~+、CD8~+T 淋巴细胞亚群的影响结果 |
| 4.3.6 地锦多糖对小鼠外周血淋巴细胞免疫球蛋白IgA、IgG的影响结果 |
| 4.3.7 地锦多糖对小鼠外周血淋巴细胞细胞因子分泌的影响结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 地锦多糖对细胞生长的影响 |
| 4.4.2 地锦多糖对淋巴细胞增殖的影响 |
| 4.4.3 地锦多糖对淋巴细胞周期的影响 |
| 4.4.4 地锦多糖对CD4~+、CD8~+T 淋巴细胞亚群的影响 |
| 4.4.5 地锦多糖对淋巴细胞细胞因子分泌的影响 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 地锦多糖 |
| 5.1.2 试验动物 |
| 5.1.3 主要试剂 |
| 5.1.4 主要仪器 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 小鼠腹腔巨噬细胞的分离和培养 |
| 5.2.2 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞最大安全浓度的测定 |
| 5.2.3 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞增殖的影响 |
| 5.2.4 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响 |
| 5.2.5 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO和iNOS生成的影响 |
| 5.2.6 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞细胞因子的影响 |
| 5.2.7 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞CD14和MHC-II表达 |
| 5.2.8 数据分析 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞最大安全浓度的测定 |
| 5.3.2 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞增殖的影响结果 |
| 5.3.3 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响结果 |
| 5.3.4 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO和iNOS生成的影响结果 |
| 5.3.5 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞细胞因子的影响结果 |
| 5.3.6 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞CD14和MHC-II表达的影响结果 |
| 5.4 讨论 |
| 5.4.1 地锦多糖对巨噬细胞增殖的影响 |
| 5.4.2 地锦多糖对巨噬细胞吞噬能力的影响 |
| 5.4.3 地锦多糖对巨噬细胞分泌NO和iNOS生成的影响 |
| 5.4.4 地锦多糖对巨噬细胞细胞因子的影响 |
| 5.4.5 地锦多糖对巨噬细胞CD14和MHC-II表达的影响 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞的抗氧化作用研究 |
| 6.1 材料 |
| 6.1.1 地锦多糖 |
| 6.1.2 试验动物 |
| 6.1.3 主要仪器 |
| 6.1.4 主要试剂 |
| 6.2 方法 |
| 6.2.1 小鼠腹腔巨噬细胞的分离和培养 |
| 6.2.2 小鼠腹腔巨噬细胞形态学观察 |
| 6.2.3 地锦多糖对H_2O_2诱导的巨噬细胞氧化损伤细胞存活率影响 |
| 6.2.4 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞抗氧化作用的测定 |
| 6.2.5 数据分析 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞形态的影响 |
| 6.3.2 地锦多糖对H_2O_2诱导的小鼠腹腔巨噬细胞氧化损伤细胞存活率影响 |
| 6.3.3 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞SOD酶活力的影响 |
| 6.3.4 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞GSH-PX酶活力的影响 |
| 6.3.5 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞MDA含量的影响 |
| 6.3.6 地锦多糖对小鼠腹腔巨噬细胞MPO酶活力的影响 |
| 6.4 讨论 |
| 6.4.1 地锦多糖对巨噬细胞SOD酶活力的影响 |
| 6.4.2 地锦多糖对巨噬细胞GSH-PX酶活力的影响 |
| 6.4.3 地锦多糖对巨噬细胞MDA含量的影响 |
| 6.4.4 地锦多糖对巨噬细胞MPO酶活力的影响 |
| 6.5 小结 |
| 第七章 地锦多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用研究 |
| 7.1 材料 |
| 7.1.1 地锦多糖 |
| 7.1.2 试验动物 |
| 7.1.3 主要仪器 |
| 7.1.4 主要试剂 |
| 7.2 方法 |
| 7.2.1 动物分组及处理 |
| 7.2.2 地锦多糖对免疫抑制小鼠免疫器官指数分析 |
| 7.2.3 地锦多糖对免疫抑制小鼠脾细胞增殖和腹腔巨噬细胞增殖的影响 |
| 7.2.4 地锦多糖对免疫抑制小鼠脾淋巴细胞周期的影响 |
| 7.2.5 地锦多糖对免疫抑制小鼠脾淋巴细胞CD4~+、CD8~+T亚群的影响 |
| 7.2.6 地锦多糖对免疫抑制小鼠脾淋巴细胞免疫球蛋白的影响 |
| 7.2.7 地锦多糖对免疫抑制小鼠脾淋巴细胞细胞因子分泌的影响 |
| 7.2.8 地锦多糖对免疫抑制小鼠抗氧化作用指标的测定 |
| 7.2.9 数据分析 |
| 7.3 结果 |
| 7.3.1 地锦多糖对免疫抑制小鼠免疫器官指数分析 |
| 7.3.2 地锦多糖对免疫抑制小鼠脾细胞增殖和腹腔巨噬细胞增殖的结果 |
| 7.3.3 地锦多糖对免疫抑制小鼠脾淋巴细胞周期的影响结果 |
| 7.3.4 地锦多糖对免疫抑制小鼠脾淋巴细胞CD4~+、CD8~+T亚群的影响结果 |
| 7.3.5 地锦多糖对免疫抑制小鼠脾淋巴细胞免疫球蛋白IgA、IgG的影响结果 |
| 7.3.6 地锦多糖对免疫抑制小鼠脾淋巴细胞细胞因子分泌的影响结果 |
| 7.3.7 地锦多糖对免疫抑制小鼠抗氧化活性的影响结果 |
| 7.4 讨论 |
| 7.4.1 多糖对免疫抑制小鼠周期和CD4+、CD8+的影响 |
| 7.4.2 多糖对免疫抑制小鼠细胞因子和免疫球蛋白的影响 |
| 7.5 小结 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）女贞子免疫增强活性成分分离鉴定及作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 中药增强免疫研究进展 |
| 1.1.1 中药促进免疫器官发育 |
| 1.1.2 中药增强免疫细胞功能 |
| 1.1.3 中药调节免疫分子生成 |
| 1.1.4 中药影响信号通路传递 |
| 1.2 女贞子研究进展 |
| 1.2.1 女贞子化学成分 |
| 1.2.2 女贞子药理作用 |
| 1.2.3 女贞子兽医临床应用 |
| 1.3 研究目的与意义 |
| 第二章 女贞子免疫增强活性部位的筛选 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 药材 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 女贞子五部位萃取物得率 |
| 2.2.2 女贞子不同部位萃取物对巨噬细胞活性的影响 |
| 2.2.3 女贞子不同部位萃取物对巨噬细胞吞噬功能的影响 |
| 2.2.4 女贞子不同部位萃取物对淋巴细胞增殖的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 女贞子五部位萃取物的制备 |
| 2.3.2 女贞子免疫增强活性部位的筛选 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 女贞子免疫增强活性成分的分离纯化与结构鉴定 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 药物 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.1.4 方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 大孔树脂吸附法分离女贞子正丁醇部位萃取物试验结果 |
| 3.2.2 不同乙醇洗脱段的免疫活性检测结果 |
| 3.2.3 分离纯化和结构鉴定结果 |
| 3.2.4 单体化合物的免疫活性检测结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 女贞子正丁醇部位萃取物的分离纯化 |
| 3.3.2 女贞子免疫增强活性化合物的筛选 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 女贞子活性成分羟基酪醇增强巨噬细胞免疫的作用机制 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 药物 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 主要仪器 |
| 4.1.4 方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 羟基酪醇对巨噬细胞摄取FITC-OVA的影响 |
| 4.2.2 羟基酪醇对细胞因子TNF-α和IL-1β分泌的影响 |
| 4.2.3 羟基酪醇对NO释放的影响 |
| 4.2.4 羟基酪醇对ROS产生的影响 |
| 4.2.5 羟基酪醇对细胞表面分子MHC-Ⅱ及共激活分子CD80、CD86表达的影响 |
| 4.2.6 羟基酪醇对NF-κB信号通路关键蛋白表达的影响 |
| 4.2.7 羟基酪醇对TLR4/MyD88(TRIF)/IKKβ通路蛋白表达的影响 |
| 4.2.8 信号阻断试验 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 羟基酪醇增强巨噬细胞免疫活性 |
| 4.3.2 羟基酪醇活化巨噬细胞的分子机制 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 女贞子活性成分羟基酪醇增强淋巴细胞免疫的作用机制 |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.1.1 药物 |
| 5.1.2 主要试剂 |
| 5.1.3 主要仪器 |
| 5.1.4 方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 羟基酪醇对细胞因子和免疫球蛋白分泌的影响 |
| 5.2.2 羟基酪醇对淋巴细胞亚群的影响 |
| 5.2.3 羟基酪醇对胞内Ca~(2+)浓度的影响 |
| 5.2.4 羟基酪醇对钙调神经磷酸酶的影响 |
| 5.2.5 羟基酪醇对核转录因子NFAT和NF-κB转运的影响 |
| 5.2.6 信号阻断试验 |
| 5.3 讨论 |
| 5.3.1 羟基酪醇增强淋巴细胞免疫活性 |
| 5.3.2 羟基酪醇激活淋巴细胞的分子机制 |
| 5.4 小结 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）雪灵芝粗多糖对S180荷瘤小鼠免疫功能的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料及仪器 |
| 1.2 S180荷瘤小鼠模型建立 |
| 1.3 试验分组与处理 |
| 1.4 体重增率、抑瘤率和免疫脏器系数计算公式 |
| 1.5 脾淋巴细胞增殖与NK细胞杀伤活性检测 |
| 1.6 脾细胞中T细胞亚群检测 |
| 1.7 脾细胞中细胞因子的mRNA表达 |
| 1.8 ELISA法检测血清中细胞因子 |
| 1.9 统计学处理 |
| 2 结 果 |
| 2.1 AKCP对S-180荷瘤小鼠瘤体生长的抑制作用 |
| 2.2 各组小鼠体重增率及免疫脏器系数的比较 |
| 2.3 各组小鼠脾淋巴细胞增殖及NK细胞杀伤活性的比较 |
| 2.4 各组小鼠脾淋巴细胞亚群的比较 |
| 2.5 各组小鼠脾细胞中IL-2、IFN-γ及TNF-α的mRNA表达 |
| 2.6 各组小鼠血清IL-2、IFN-γ及TNF-α水平 |
| 3 结论与讨论 |
（5）阿里红多糖对S180荷瘤小鼠的抑瘤作用与机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 生物信息学分析肿瘤差异表达基因及富集通路研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 阿里红多糖对S180 荷瘤小鼠免疫功能的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 多糖调节肿瘤免疫应答研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
| 指导教师评阅意见表 |
（6）枸杞多糖的分离纯化及基于对肠道菌群调节的免疫作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 中药多糖制备及质量控制体系初探 |
| 1 中药多糖质量控制标准现状 |
| 2 中药多糖制备及质量控制标准研究进展及评价 |
| 3 中药多糖质量控制新技术 |
| 4 中药多糖质控体系亟待解决的问题 |
| 5 总结与展望 |
| 综述二 枸杞多糖结构特征及免疫活性研究进展 |
| 1 枸杞多糖的结构特征 |
| 2 枸杞多糖的免疫调节及其作用机制 |
| 3 总结 |
| 前言 |
| 技术路线图 |
| 第一章 枸杞多糖的提取纯化及理化性质研究 |
| 第一节 枸杞多糖结构分析方法的建立 |
| 第二节 枸杞多糖的分离纯化 |
| 第三节 枸杞多糖在胃肠液中的稳定性及肠跨膜研究 |
| 第二章 枸杞多糖对巨噬细胞的免疫调节作用及其机制研究 |
| 第三章 枸杞多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响 |
| 第四章 枸杞多糖对小鼠肠道菌群的影响及与免疫功能相关性分析 |
| 第一节 枸杞多糖基于对肠道菌群调节的免疫作用机制研究 |
| 第二节 枸杞多糖对免疫抑制小鼠肠粘膜形态的影响 |
| 第五章 枸杞多糖质量控制及基于其结构和活性测定的产品质量评价 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（7）金蝉花粗多糖CP50和CP80的制备和抗肿瘤及抗肝损伤作用初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词英文注释表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 金蝉花的研究进展 |
| 1.1.1 金蝉花简介 |
| 1.1.2 金蝉花的化学成分研究现状 |
| 1.1.3 金蝉花的药理活性研究现状 |
| 1.2 多糖抗肿瘤研究进展 |
| 1.2.1 真菌类多糖的抗肿瘤作用 |
| 1.2.2 植物多糖的抗肿瘤作用 |
| 1.2.3 海洋生物多糖的抗肿瘤作用 |
| 1.3 多糖抗肝损伤作用研究进展 |
| 1.3.1 植物多糖的抗肝损伤作用 |
| 1.3.2 微生物多糖的抗肝损伤作用 |
| 1.3.3 动物多糖的抗肝损伤作用 |
| 1.4 本课题的立项背景和意义 |
| 1.5 本课题主要的研究内容 |
| 第二章 金蝉花粗多糖CP50和CP80 的制备 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验药材 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 金蝉花粗多糖的提取 |
| 2.2.2 多糖含量测定 |
| 2.2.3 蛋白质含量测定 |
| 2.2.4 Sevage法脱蛋白处理 |
| 2.3 实验结果与分析 |
| 2.3.1 葡萄糖标准曲线 |
| 2.3.2 蛋白标准曲线 |
| 2.3.3 金蝉花粗多糖脱蛋白的单因素试验结果 |
| 2.3.4 CP50和CP80 的制备结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 金蝉花粗多糖CP50和CP80 抗肿瘤活性比较及机制初步研究 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验样品 |
| 3.1.2 实验细胞 |
| 3.1.3 主要试剂 |
| 3.1.4 主要仪器 |
| 3.1.5 主要试剂的配制 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 细胞培养 |
| 3.2.2 实验分组 |
| 3.2.3 CCK-8 法检测金蝉花多糖CP50和CP80对Hela细胞增殖影响 |
| 3.2.4 显微镜观察金蝉花粗多糖CP80对Hela细胞形态的影响 |
| 3.2.5 细胞划痕实验观察金蝉花粗多糖CP80对Hela细胞迁移作用的影响 |
| 3.2.6 DCFH-DA探针法检测金蝉花粗多糖CP80对Hela细胞内活性氧水平的影响 |
| 3.2.7 Western blot法检测金蝉花粗多糖CP80对Hela细胞Bax、Bcl-2 和p53蛋白表达的影响 |
| 3.2.8 金蝉花粗多糖CP80对Hela细胞Bax、Bcl-2和p53 mRNA表达水平的测定 |
| 3.2.9 统计学分析 |
| 3.3 实验结果与分析 |
| 3.3.1 金蝉花粗多糖CP50和CP80对Hela细胞增殖的影响 |
| 3.3.2 金蝉花粗多糖CP80对Hela细胞形态的影响 |
| 3.3.3 金蝉花粗多糖CP80对Hela细胞迁移作用的影响 |
| 3.3.4 金蝉花粗多糖CP80对Hela细胞内活性氧水平的影响 |
| 3.3.5 金蝉花粗多糖CP80对Hela细胞内p53、Bax和 Bcl-2 蛋白表达的影响 |
| 3.3.6 金蝉花粗多糖CP80对Hela细胞内p53、Bax和 Bcl-2mRNA表达的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 金蝉花粗多糖CP50和CP80 抗环磷酰胺致肝损伤的活性研究 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 实验仪器 |
| 4.1.3 实验试剂 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 金蝉花粗多糖样品的制备 |
| 4.2.2 环磷酰胺致小鼠肝损伤模型的构建 |
| 4.2.3 动物分组及给药方法 |
| 4.2.4 血清、肝脏生化指标的检测 |
| 4.2.5 数据分析 |
| 4.3 实验结果与分析 |
| 4.3.1 环磷酰胺对小鼠肝损伤模型的构建 |
| 4.3.2 金蝉花粗多糖对肝损伤小鼠肝脏指数的影响 |
| 4.3.4 金蝉花粗多糖对肝损伤小鼠生化指标测定结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 全文总结与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 创新点 |
| 5.3 工作展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 |
（8）雪上一枝蒿多糖组分XP-10抗肿瘤免疫作用机理的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号与说明 |
| 引言 |
| 第一部分 雪上一枝蒿多糖组分XP-10体外免疫调节活性的研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 XP-10的提取分离方法 |
| 3 实验方法 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 第二部分 雪上一枝蒿多糖组分XP-10对环磷酰胺所致免疫抑制模型小鼠的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 第三部分 雪上一支蒿多糖组分XP-10抗肝癌肺转移效应的研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
（9）粒毛盘菌多糖抗肿瘤作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 真菌多糖的提取 |
| 1.2 真菌多糖的纯化 |
| 1.3 真菌多糖的分级分离 |
| 1.4 真菌多糖的纯度及分子量的测定 |
| 1.5 真菌多糖的生物活性 |
| 1.6 粒毛盘菌多糖研究概况 |
| 1.7 本课题研究的内容与意义 |
| 第二章 粒毛盘菌YM130胞外多糖联合5-氟尿嘧啶体外抗肝癌作用及其机制 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 材料 |
| 2.2.2 主要试剂和仪器 |
| 2.2.3 细胞培养 |
| 2.2.4 细胞毒性实验 |
| 2.2.5 细胞形态学观察 |
| 2.2.6 克隆形成实验 |
| 2.2.7 伤口愈合实验 |
| 2.2.8 细胞侵袭与迁移实验 |
| 2.2.9 细胞核形态学分析 |
| 2.2.10 Western blot分析以及核蛋白和胞质蛋白提取方法 |
| 2.2.11 细胞凋亡检测 |
| 2.2.12 细胞中活性氧的检测 |
| 2.2.13 细胞周期分析 |
| 2.2.14 细胞线粒体膜电位测定 |
| 2.2.15 细胞免疫荧光染色 |
| 2.2.16 数据统计与分析 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 5-FU和LEP130分别对Hep G2、LO2和HSF细胞活力的影响 |
| 2.3.2 5-FU与LEP130联用对Hep G2细胞的协同抑制作用 |
| 2.3.3 5-FU与LEP130联用对Hep G2细胞凋亡的影响 |
| 2.3.4 LEP130细胞存活途径的影响 |
| 2.3.5 LEP130对细胞内活性和抗氧化酶的影响 |
| 2.3.6 LEP130对线粒体凋亡途径的影响 |
| 2.3.7 5-FU与LEP130联用对Hep G2细胞周期的影响 |
| 2.3.8 5-FU与LEP130对p53活化状态和DNA修复的影响 |
| 2.3.9 5-FU与LEP130联用Hep G2细胞迁移与侵袭 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 粒毛盘菌YM130胞外多糖联合环磷酰胺体内抗肝癌作用及其机制 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 材料 |
| 3.2.2 主要试剂和仪器 |
| 3.2.3 细胞培养 |
| 3.2.4 H22荷瘤小鼠模型 |
| 3.2.5 动物分组与处理 |
| 3.2.6 生化指标分析 |
| 3.2.7 组织病理学检测 |
| 3.2.8 免疫组化检测 |
| 3.2.9 Western blot分析 |
| 3.2.10 TUNEL染色 |
| 3.2.11 线粒体膜电位检测 |
| 3.2.12 数据统计与分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 CTX与LEP130联用对H22 荷瘤小鼠肿瘤生长的影响 |
| 3.3.2 CTX与LEP130联用对H22 荷瘤小鼠肿瘤组织形态的影响 |
| 3.3.3 CTX与LEP130联用对肿瘤细胞死亡受体途径的影响 |
| 3.3.4 CTX与LEP130联用对肿瘤细胞线粒体凋亡途径的影响 |
| 3.3.5 CTX与LEP130联用对H22 荷瘤小鼠免疫系统的影响 |
| 3.3.6 CTX与LEP130联用对肿瘤组织中免疫细胞和免疫因子的影响 |
| 3.3.7 CTX与LEP130联用对肿瘤组织中存活蛋白的影响 |
| 3.3.8 CTX与LEP130联用对肿瘤组织中血管生成的影响 |
| 3.3.9 LEP130对CTX引起的副作用的影响 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 粒毛盘菌YM130胞外多糖通过增强机体免疫系统抑制S180荷瘤小鼠肿瘤生长 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 材料 |
| 4.2.2 主要试剂和仪器 |
| 4.2.3 细胞培养 |
| 4.2.4 细胞毒性实验 |
| 4.2.5 S180荷瘤小鼠模型 |
| 4.2.6 动物分组与处理 |
| 4.2.7 生化指标分析 |
| 4.2.8 组织病理学检测 |
| 4.2.9 免疫组化检测 |
| 4.2.10 Western blot分析 |
| 4.2.11 免疫荧光双染实验 |
| 4.2.12 Quantitative real-time PCR(q PCR)检测 |
| 4.2.13 小鼠腹腔巨噬细胞(M?)的制备及条件培养基处理 |
| 4.2.14 数据统计与分析 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 LEP130对S180荷瘤小鼠肿瘤生长的影响 |
| 4.3.2 LEP130对肿瘤微环境中M1、M2型巨噬细胞的影响 |
| 4.3.3 LEP130通过T细胞调节肿瘤微环境中的M1、M2型巨噬细胞的比率 |
| 4.3.4 LEP130对肿瘤特异性辅助性T细胞(Th1)免疫应答的影响 |
| 4.3.5 LEP130对免疫抑制性肿瘤微环境的影响 |
| 4.3.6 LEP130在体外通过TLR4模式识别受体促进原代巨噬细胞向M1 型极化 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 粒毛盘菌YM130胞外多糖抗结肠癌活性与肠道微生物及其代谢物相关性 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 材料 |
| 5.2.2 主要试剂和仪器 |
| 5.2.3 CRC小鼠建模与处理 |
| 5.2.4 生化指标分析 |
| 5.2.5 组织病理学检测 |
| 5.2.6 免疫组化检测 |
| 5.2.7 Western blot分析 |
| 5.2.8 粪便中短链脂肪酸的测定 |
| 5.2.9 DNA提取和16S r RNA测序 |
| 5.2.10 测序数据的处理与生物信息学分析 |
| 5.2.11 非靶向代谢组学检测 |
| 5.2.12 代谢组学数据分析 |
| 5.2.13 数据统计与分析 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 LEP130对AOM/DSS诱导的小鼠结肠癌发生的影响 |
| 5.3.2 LEP130对结肠癌小鼠肠屏障完整性和肠道炎症的影响 |
| 5.3.3 LEP130对结肠癌小鼠肠道菌群整体结构的影响 |
| 5.3.4 LEP130对结肠癌小鼠肠道菌群组成的影响 |
| 5.3.5 LEP130对结肠癌小鼠肠道菌群相关性的影响 |
| 5.3.6 LEP130对结肠癌小鼠代谢组的影响 |
| 5.3.7 LEP130对结肠癌小鼠差异代谢物与肠道菌群相关性的影响 |
| 5.4 本章小结 |
| 第六章 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 创新点 |
| 6.3 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间的学术活动及成果情况 |
（10）榴莲皮多糖调节免疫功能的研发（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词列表 |
| 第一章 多糖增强免疫等相关生物活性的研究进展 |
| 1.1 多糖药理活性研究进展 |
| 1.1.1 免疫活性 |
| 1.1.2 抗肿瘤活性 |
| 1.1.3 抗氧化活性 |
| 1.1.4 抗凝血活性 |
| 1.2 多糖调节免疫在蛋白质组中的研究 |
| 1.3 多糖改善肠道菌群的作用 |
| 1.3.1 肠道菌群的研究现状 |
| 1.3.2 多糖对肠道微生物的调节作用 |
| 1.4 本课题研究的目的和意义 |
| 参考文献 |
| 第二章 榴莲皮多糖对CTX诱导的免疫抑制小鼠的影响 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料和仪器 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 主要试剂与耗材 |
| 2.2.3 主要仪器与设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 榴莲皮多糖的制备 |
| 2.3.2 实验动物分组 |
| 2.3.3 实验动物给药和造模 |
| 2.3.4 样品采集与处理 |
| 2.3.5 胸腺指数和脾脏指数的测定 |
| 2.3.6 ELISA法测定血清中细胞因子水平 |
| 2.3.7 抗氧化应激能力测定 |
| 2.3.8 乳酸脱氢酶(ACP)和酸性磷酸酶(LDH)活力测定 |
| 2.3.9 HE染色法 |
| 2.3.10 统计分析 |
| 2.4 结果 |
| 2.4.1 榴莲皮多糖对胸腺指数和脾脏指数的影响 |
| 2.4.2 榴莲皮多糖对小鼠细胞因子含量的影响 |
| 2.4.3 榴莲皮多糖对小鼠ACP和 LDH活力的影响 |
| 2.4.4 榴莲皮多糖对小鼠抗氧化能力的影响 |
| 2.4.5 榴莲皮多糖对小鼠免疫器官病理变化的影响 |
| 2.5 结论与讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 榴莲皮多糖对免疫抑制小鼠肝脏的蛋白质组学研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料和仪器 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 主要试剂与耗材 |
| 3.2.3 主要仪器与设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 榴莲皮多糖的制备 |
| 3.3.2 实验动物分组 |
| 3.3.3 实验动物给药和造模 |
| 3.3.4 样品采集与处理 |
| 3.3.5 小鼠肝组织蛋白提取 |
| 3.3.6 蛋白鉴定 |
| 3.3.7 生物信息学分析 |
| 3.4 结果 |
| 3.4.1 蛋白质鉴定和IBT定量 |
| 3.4.2 GO(Gene Ontology)注释分析 |
| 3.4.3 差异蛋白富集分析 |
| 3.4.4 蛋白pathway分析 |
| 3.4.5 差异蛋白互作分析 |
| 3.4.6 差异表达蛋白亚细胞定位 |
| 3.5 讨论与结论 |
| 参考文献 |
| 第四章 榴莲皮多糖对免疫抑制小鼠肠道菌群的研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料和仪器 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 主要试剂与耗材 |
| 4.2.3 主要仪器与设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 榴莲皮多糖的制备 |
| 4.3.2 实验动物分组 |
| 4.3.3 实验动物给药和造模 |
| 4.3.4 样品采集与处理 |
| 4.3.5 DNA提取 |
| 4.3.6 构建文库和高通量测序 |
| 4.3.7 SCFA含量测定 |
| 4.3.8 生物信息学和统计分析 |
| 4.4 结果 |
| 4.4.1 微生物16SrRNA基因测序评估 |
| 4.4.2 模型组与给药组OTU比较 |
| 4.4.3 榴莲皮多糖对肠道菌群整体结构的影响 |
| 4.4.4 榴莲皮多糖对肠道菌群分类组成的影响 |
| 4.4.5 榴莲皮多糖对物种功能影响的预测与分析 |
| 4.4.6 榴莲皮多糖对SCFAs含量的影响 |
| 4.5 讨论与结论 |
| 参考文献 |
| 结论与展望 |
| 论文创新点 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 致谢 |
四、灵芝多糖和香菇多糖纠正环磷酰胺所致荷瘤小鼠免疫抑制的作用研究（论文参考文献）
- [1]HsPc-HA营养液的挤压制备及其功能性研究[D]. 杨滨梦. 沈阳师范大学, 2021(09)
- [2]地锦多糖的制备及对小鼠免疫增强活性研究[D]. 孙文静. 西北农林科技大学, 2021(01)
- [3]女贞子免疫增强活性成分分离鉴定及作用机制研究[D]. 刘佳. 西北农林科技大学, 2021(01)
- [4]雪灵芝粗多糖对S180荷瘤小鼠免疫功能的影响[J]. 王刚,连紫宛,李占强,张朝霞,樊融,马蕊. 中国野生植物资源, 2021(03)
- [5]阿里红多糖对S180荷瘤小鼠的抑瘤作用与机制研究[D]. 沙依拜·沙比提. 新疆医科大学, 2021(08)
- [6]枸杞多糖的分离纯化及基于对肠道菌群调节的免疫作用机制研究[D]. 王莹. 北京中医药大学, 2020(04)
- [7]金蝉花粗多糖CP50和CP80的制备和抗肿瘤及抗肝损伤作用初步研究[D]. 周红秋. 江苏大学, 2020(02)
- [8]雪上一枝蒿多糖组分XP-10抗肿瘤免疫作用机理的研究[D]. 张霞. 云南中医药大学, 2020(01)
- [9]粒毛盘菌多糖抗肿瘤作用及其机制研究[D]. 宗帅. 合肥工业大学, 2020(01)
- [10]榴莲皮多糖调节免疫功能的研发[D]. 姜慧敏. 河南大学, 2020(02)